Espressione genica immuno-correlata nei reni e nella milza delle papere infette da astrovirus nefritico dell'oca

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ASTRATTOL'astrovirus nefritico dell'oca (GNAstV) è stato isolato per la prima volta nel 2018, causando grandi perdite economiche all'industria dell'oca. Tuttavia, si sa poco sull'hostrisposta immunitariaall'infezione da GNAstV. In questo studio, quaranta paperi di 2 giorni sono stati divisi in modo casuale in 2 gruppi: infezione e gruppi di controllo negativi. Ogni papera nel gruppo di infezione è stata sfidata con 0,5 ml di GNAstV-JSHA per via intramuscolare, mentre la papera nel gruppo di controllo negativo è stata inoculata con la stessa quantità di PBS. Cambiamenti istopatologici e localizzazione del virus nelmilzaerenesono stati esaminati e l'espressione di geni immuno-correlati è stata determinata dalla qPCR a 7 e 14 d dopo l'infezione. I nostri risultati hanno mostrato che la degenerazione e la necrosi indotte dall'infezione da GNAstV dei linfociti splenici e delle cellule epiteliali renali e queste cellule erano positive per il virus. Inoltre, l'infezione da GNAstV ha indotto l'attivazione dei recettori di riconoscimento dei pattern (RIG-I, MDA-5 e TLR3) e delle molecole chiave dell'adattatore.

(MyD88, MAVS e IRF7) nella milza e nei reni e ha sovraregolato l'espressione genica dell'interferone-α nella milza e nelle proteine antivirali (MX1, OASL e IFITM3) nella milza e nel rene. Inoltre, sono stati trovati alti livelli di espressione di interleuchina (IL) -1β e IL-8 nella milza e iNOS nella milza e nei reni. Questi risultati hanno indicato che l'infezione da GNAstV ha attivato la risposta immunitaria innata dell'ospite. Inoltre, l'infezione da GNAstV ha aumentato i livelli di espressione di CD8t, MHCI e MHCII, indicando che è stata attivata una risposta immunitaria adattativa. Inoltre, il TGF-β era altamente espresso nella milza e nel rene, che può essere una strategia di evasione immunitaria di GNAstV per causare infezioni. È interessante notare che entrambi i livelli di mRNA IL-1β e IL-6 sono diminuiti nel rene, il che può aiutare a ridurre le lesioni renali. Questo è il primo studio a segnalare cambiamenti nell'espressione genica immuno-correlata in risposta all'infezione da GNAstV e i nostri risultati forniscono approfondimenti sulla patogenesi virale.

Parole chiavi: astrovirus nefritico dell'oca, risposta immunitaria, milza, rene, papero

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INTRODUZIONE

Dal 2017, diversi branchi di oche hanno sperimentato un grave focolaio di gotta in paperi di 4-16 giorni nella Cina orientale, portando a gravi perdite economiche nell'industria dell'oca. Le papere infette mostravano un peso corporeo ridotto e reni gonfi e pallidi, con urati bianchi negli ureteri e disposizione dell'urato sulla superficie degli organi viscerali e della cavità articolare. Nel 2018, un nuovo astrovirus dell'oca è stato isolato dalle papere infette e gli esperimenti di riproduzione animale hanno dimostrato che era il principale agente eziologico della gotta della gotta. Questo virus era geneticamente distinto dal noto mam astrovirus e astrovirus. Ha formato un clade distinto in conformità con la sequenza di amminoacidi della proteina ORF2 a lunghezza intera (proteina capside), che è la regione più variabile del genoma. Quindi, si dovrebbe prestare maggiore attenzione ai danni causati dal virus alle papere. Nel presente studio, il nuovo astrovirus dell'oca è indicato come astrovirus nefritico dell'oca (GNAstV).

Poiché GNAstV è un virus emergente di recente, la maggior parte degli studi si è concentrata sul suo isolamento, analisi genetica e definizione di metodi diagnostici (Yuan et al, 2018; Wan et al., 2019; Yin et al., 2020). Tuttavia, si sa poco sulla risposta immunitaria dell'ospite all'infezione da GNAstV. L'astrovirus nefritico dell'oca causa principalmente danni ai reni, al fegato e alla milza nelle papere e una carica virale più elevata è stata rilevata nel rene e nella milza rispetto a quella di altri organi (Jin et al, 2018; Xu et al,2019). Le lesioni della milza e l'elevata carica virale indicano che il virus può causare danni alla risposta immunitaria. Il sistema immunitario innato svolge un ruolo importante durante l'infezione da virus fungendo da prima linea di difesa contro l'invasione virale (Chow J et al., 2015). I recettori di riconoscimento dei pattern (PRR) riconoscono gli acidi nucleici virali e suscitano una risposta innata, compresa la produzione di citochine, come I-1β, TNF-x e IFN, e proteine antivirali come OASL, IFITM3 e MX1. Il recettore Toll-like 3 (TLR3) legato alla membrana e i recettori citosolici RIG-I-like che contengono principalmente RIG-1 e MDA-5 sono i PRR più importanti che riconoscono l'RNA virale. La risposta immunitaria innata induce la segnalazione per suscitare la risposta immunitaria adattativa, che controlla l'infezione virale in una successiva fase di infezione. L'immunità adattativa comprende la risposta I mediata da anticorpi/cellule B e la risposta cellulo-mediata, che richiedono il coinvolgimento di molecole CD3+, CD4+, CD8+ e MHC di classe I e II. Attualmente, i meccanismi con cui il GNAstV influenza le risposte immunitarie innate e adattative dell'ospite non sono chiari. La Cina ospita la più alta popolazione di oche al mondo; pertanto, studiare la risposta immunitaria dell'oca all'infezione da GNAstV è importante per chiarire il meccanismo di patogenicità e immunità di GNAstVand controllandone la diffusione. In questo studio, le papere di 2 giorni sono state infettate da GNAstV. Sono stati quindi esaminati i cambiamenti istopatologici e la posizione del virus, nonché l'espressione genica immuno-correlata nella milza e nel rene.

MATERIALI E METODI

Dichiarazione etica

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con le linee guida per gli animali da esperimento del Ministero della Scienza e della Tecnologia (Pechino, Cina) e sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università agraria di Nanchino.

Virus

L'isolato GNAstV-JSHA (adesione GenBank n. MK125058) è stato isolato da paperi malati con gotta (provincia di Jiangsu, Cina) e tenuto nel nostro laboratorio. Il titolo del GAstV-JSHA era di 1 × dose infettiva di coltura tissutale del 104,25% (TCID50) / mL come determinato dalla titolazione su cellule epiteliali renali d'oca in conformità con il metodo di Reed & Muench.

Esperimento sugli animali

I campioni di milza e rene sono stati raccolti dal nostro precedente esperimento sugli animali che è stato descritto nello studio di Xu (Xuet al., 2019). Brevemente, quaranta paperi di 2 giorni senza infezione da GNAstV sono stati separati in modo casuale in 2 gruppi: infezione e gruppi di controllo negativi. Ogni papero nel gruppo di infezione è stato sfidato con 0,5 ml di GNAstV-JSHA mediante inoculazione intramuscolare, mentre la papera nel gruppo di controllo negativo è stata inoculata con la stessa quantità di PBS.

Tutte le papere sono state monitorate quotidianamente per i segni clinici. A 7 d post-infezione (dpi), 10 paperi di ciascun gruppo sono stati sottoposti a eutanasia e sono stati esaminati i cambiamenti grossolani, quindi sono stati raccolti il rene e la milza. Una parte di questi problemi è stata risolta in formaldeide al 10% per l'esame istopatologico, il resto è stato conservato a -80 ° C per ulteriori esperimenti. A 14 dpi, le papere sopravvissute sono state eutanasizzate e i tessuti sono stati raccolti e conservati come menzionato sopra.

Esame istopatologico

I campioni fissi sono stati disidratati da una serie di alcoli, chiarificati in xilene e incorporati nella paraffina. Quindi i campioni sono stati tagliati in serie in sezioni da 4 μm e colorati con ematossilina ed eosina con metodi di routine. Le sezioni macchiate sono state esaminate con un microscopio ottico.

Rilevamento della posizione dei virus mediante ibridazione in situ

Il metodo di ibridazione in situ (FISH) è stato eseguito secondo le istruzioni del kit ISH commerciale (Boster, Cina), con alcune modifiche. Prima dell'esecuzione dell'ISH, la sensibilità e la specificità del campione sono state testate e ottimizzate tramite una serie di pre-trattamenti. In breve, le sezioni di tessuto deparaffinizzato sono state pretrattate con HCl (0,2 M, 15 min) e proteinasi K (40 μg / mL, 20 min, 37 ° C). La proteasi K è stata inibita dalla fissazione in paraformaldeide al 4% per 5 minuti. Quindi, sono state eseguite le fasi di ibridazione e post ibridazione. Le sonde sono state aggiunte al tampone di ibridazione ad una concentrazione di 0,5-2 μg/mL; il tampone contenente le sonde è stato denaturato a 98°C per 10 minuti e immediatamente raffreddato sul ghiaccio. Circa 20 μL della miscela di ibridazione sono stati pipettati su sezioni di tessuto, ricoperte con coverslip trattate con dietilpirocarbonato e incubate per 16-20 ore a 42 ° C. Le sonde che si erano ibridate con l'RNA virale sono state rilevate utilizzando un anticorpo anti-DIG coniugato a tetracloridrato di 3,3-N-diaminobenzidina. I vetrini sono stati controcolorati con verde metile e sigillati con gomma neutra. Per migliorare la sensibilità, la proteinasi K è stata utilizzata per migliorare la permeabilità dei tessuti per facilitare l'ingresso di sonde nei tessuti.

Analisi dei geni immunitari mediante PCR quantitativa in tempo reale

L'RNA totale è stato estratto utilizzando Trizol (Invitrogen, CA) e la trascrizione inversa dell'RNA è stata condotta utilizzando il kit HiScript Q RT SuperMix (Vazyme, Cina). Un termociclatore (AB7300; Life Technologies) è stato utilizzato per la PCR quantitativa. Il software Primer 5.0 è stato utilizzato per la designazione dei geni immuno-correlati, come mostrato nella Tabella 1. L'espressione dell'acido ribonucleico è stata normalizzata dalla quantificazione di GAPDH come gene di pulizia. I livelli di trascrizione relativi sono stati analizzati con metodo utilizzando il 2-AACT

Analisi Statistica

Le differenze tra il gruppo di controllo e il gruppo sperimentale sono state analizzate da Student t-test. I risultati sono espressi come deviazione media ± standard. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

RISULTATI

Cambiamenti clinici

Non sono stati osservati decessi o segni clinici evidenti nel controllo non inoculato. Tuttavia, 5 delle 20 papere infette sono morte durante l'esperimento e una riduzione del peso corporeo è stata osservata nelle papere infette da GNAstV. All'autopsia, gli organi del gruppo di controllo negativo sembravano normali, ma la disposizione dell'urato sulla superficie degli organi (fegato, cuore e rene), delle sacche biliari e della cavità articolare è stata rilevata nelle papere morte. Inoltre, reni gonfi e pallidi con urato bianco negli ureteri sono stati osservati in tutte le papere infette. I cambiamenti patologici sono stati mostrati nel nostro studio precedente (Xu et al.. 2019). Questi risultati hanno indicato che abbiamo stabilito con successo un modello animale di infezione da GNAstV nelle papere.

Cambiamenti istopatologici nel rene e nella milza

All'esame istopatologico, i reni e le milze delle papere di controllo negativo apparivano istologicamente normali (Figure 1A e 1B). Tuttavia, degenerazione e necrosi delle cellule epiteliali renali einfiammatoriol'infiltrazione cellulare è stata osservata nei reni delle papere infette (Figura 1C). Inoltre, necrosi della milzalinfocitie l'infiltrazione di cellule infiammatorie sono state trovate anche nella milza (Figura 1D).

Posizione del virus nel rene e nella milza

La posizione dell'astrovirus nefritico dell'oca nei reni e nella milza è stata esaminata utilizzando ISH. Come mostrato nella Figura 2, diverse particelle marroni sono state rilevate nel citoplasma delle cellule epiteliali tubulari renali, ma non sono state osservate particelle marroni nei glomeruli del rene. Poche particelle marroni sono state rilevate nei linfociti splenici e nelle cellule macrofagiche della milza. Questi risultati indicano che GNAstV può infettare le cellule epiteliali tubulari renali e i linfociti splenici.

Espressione di PRR e molecole adattatori nella milza e nel rene di paperi infetti da GNAstV L'espressione di PRR (RIG-1, MDA-5 e TLR3) e molecole chiave dell'adattatore (MAVS, MyD88 eIRF7) nella milza e nei reni sono stati determinati mediante qPCR come mostrato in Figura 3. Il livello di mRNA dei 3 PRR nella milza è stato significativamente aumentato nel gruppo infetto a 7 e 14 dpi rispetto al gruppo di controllo negativo (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Di conseguenza, l'espressione delle molecole adattatrici nel gruppo infetto a 7 e 14 dpi era significativamente superiore a quella del gruppo di controllo (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

Espressione di citochine nella milza e nel rene delle papere infette da GNAstV

Le espressioni della citochina, IL-1β, I-6, IL-8, II.-10, TGF-B e iNOS sono state determinate dalla qPCR come mostrato nella Figura 4. Nella milza, i livelli di mRNA di IL-1B e TGF-B nel gruppo di infezione a 7 e 14i dpi erano ovviamente superiori a quelli del gruppo di controllo negativo (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0,05). Inoltre, non è stata osservata alcuna differenza nell'espressione di i-6 mRNA a 7 e 14 dpi tra i gruppi di infezione e di controllo (P> 0,05). Nei reni, i livelli di mRNA di I-1β a 7 e 14 dpi e I-6 a 7 dpi erano inferiori nel gruppo di infezione rispetto a quelli nel gruppo di controllo negativo (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

Espressione di proteine antivirali nella milza e nel rene delle papere infette da GNAstV

Il livello di mRNA di IFN-d. nella milza e l'espressione di proteine antivirali (OASL, IFITM3.e MIX1) nel rene e nella milza sono stati determinati come mostrato nella Figura 5. Nella milza, i livelli di mRNA diIFN-2. OASL, IFITM3 e MX1 a 7 e 14 dpi erano significativamente più alti nel gruppo infetto rispetto a quelli nel gruppo di controllo negativo (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

Espressione di molecole CD4t, CD8+ e MHC e I nella milza di paperi infetti da GNAstV

L'espressione di geni associati alla presentazione dell'antigene (molecole CD4', CD8', MHC di classe I e II) nella milza è stata determinata mediante qPCR come mostrato nella Figura 6. I livelli di espressione di MHC I a 7 e 14i dpi erano significativamente più alti nel gruppo infetto rispetto a quelli nel gruppo di controllo negativo (P< 0.05).="" the="" expression="" levels="" of="" mhc="" ii="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0,05). I livelli di mRNA CD8+ a 7 e 14 dpi erano significativamente più alti nel gruppo infetto rispetto a quelli del gruppo di controllo negativo(P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

DISCUSSIONE

L'astrovirus nefritico dell'oca è un virus recentemente isolato che può causare la gotta viscerale e la morte delle papere, portando a gravi danni ai fock d'oca. Ad oggi, non ci sono vaccini e agenti terapeutici per il suo trattamento. Quindi, è necessario studiare la risposta immunitaria dell'ospite al virus per comprenderne la patogenesi e sviluppare vaccini e terapie. In questo studio, abbiamo stabilito con successo un modello animale nelle papere mediante inoculazione intramuscolare con GNAst V-JSHA. La posizione del virus nei linfociti splenici e nei macrofagi e la necrosi dei linfociti splenici indicano che il GNAstV può infettare la milza e indurre danni al sistema immunitario dell'ospite. Tuttavia, fino ad ora, non ci sono state segnalazioni sulla risposta immunologica delle papere infette da GNAstV. Inoltre, è stato osservato un alto titolo virale nelle cellule epiteliali renali. e questo può contribuire al danno renale e al disturbo dell'escrezione dell'acido urico.

Il sistema immunitario innato è la prima linea di difesa contro un agente patogeno invasore. Nel nostro studio, l'infezione da GNAstV ha causato un aumento di TLR3. RIG-1 e l'espressione di mRNA MIDA-5 nella milza e nei reni, indicando che è stato attivato il sistema immunitario innato che può contribuire all'inibizione dell'invasione virale, L'upregulation delle molecole chiave dell'adattatore (MyD88 e IRF7) ha ulteriormente confermato questi risultati. L'IFN viene prodotto dopo l'attivazione della PRR, che svolge un ruolo critico nella soppressione virale attraverso l'induzione di diversi geni stimolati dall'IFN i cui prodotti hanno attività antivirale diretta. Nel nostro studio, l'espressione di IFN-z nella milza e l'espressione di proteine antivirali (OASL, MX1 e IFITM3) nella milza e nei reni sono aumentate dopo l'infezione da GNAstrV. L'aumento della produzione di proteine antivirali può essere utile per l'inibizione dell'invasione virale. In conformità con questo, i nostri risultati hanno mostrato che TLR3. RIG-1. MDA-5 e IRF7 sono stati attivati durante l'infezione da GNAstV. Uno studio precedente ha anche dimostrato che il tipo di sistema limita la replicazione dell'astrovirus umano in vitro e in vivo e fornisce protezione contro la permeabilità alla barriera indotta dall'astrovirus (Marvin et al.. 2015). Tuttavia, i risultati per TLR3 e OASL erano diversi da quelli per le altre proteine PRR e antivirali nella milza, poiché l'espressione di TLR3 e OASL è diminuita a 14 dpi rispetto a 7 dpi. Ciò potrebbe essere correlato alla regolazione del feedback negativo o alla riduzione della carica virale. Di conseguenza, lL-1B a 14 dpi può essere il risultato di meccanismi di regolazione del corpo contro l'eccesso di produzione di citochine proinfiammatorie. È interessante notare che il livello di mRNA di I-1β nel rene è diminuito nel gruppo infetto. Un livello inferiore di questa citochina proinfiammatoria può aiutare ad alleviare il danno renale. Studi precedenti hanno riportato che le infezioni da astrovirus umano e astrovirus di tacchino di tipo 2 (TASt V-2) non erano associate all'infiammazione e causavano poche lesioni nei villi intestinali (Koci et al.. 2003; Sebire et al.2004), suggerendo che questa potrebbe essere una caratteristica dell'infezione da astrovirus nelle cellule epiteliali. I-6 è anche una citochina infiammatoria che induce effetti antivirali attraverso una risposta immunitaria efficiente, ma è anche coinvolta in processi che portano a danni vascolari,infiammazionedella parete vascolare e trombosi. Nel nostro studio, nessun cambiamento significativo in IL-6 è stato trovato nella milza dopo l'infezione da GNAstV; questo potrebbe essere correlato a grandi differenze tra le singole papere. Tuttavia, l'espressione di I-6 è diminuita nel rene, simile all'osservazione per -1B; questo può anche aiutare ad alleviare il danno renale. I-8 è un mediatore responsabile del reclutamento di neutrofili che partecipano all'infiltrato infiammatorio locale. In questo studio, I-8 è stato sovraregolato nella milza e nei reni e potrebbe quindi aver contribuito all'infiammazione. IL-10 è una citochina antinfiammatoria che può inibire la produzione di citochine proinfiammatorie. In questo studio, GNAstV ha causato un'evidente diminuzione dei livelli di IL-10 nella milza; questa potrebbe essere un'indicazione di grave infiammazione della milza e una delle cause di danno alla milza. L'infezione da altre infezioni da vi-ruses, come il virus dell'encefalite giapponese e il virus Zika, ha anche dimostrato di provocare una diminuzione dell'espressione di I-10 (Swarup et al.2007; Abreu 2019), ma l'esatto meccanismo alla base di GNAstr Vinfection ha bisogno di ulteriori studi. TGF-β è una citochina immunosoppressiva. Pertanto, l'aumento dei livelli di TGF-B nella milza e nei reni indica che l'infezione da GNAstV può indurre la soppressione immunitaria. Inoltre, è stato riportato che l'infezione da T AStV-2 ha aumentato il livello sierico di TGF-β nei tacchini (Koci et al.2003). L'aumento della produzione di TGF-β ha dimostrato di sopprimere la risposta immunitaria e migliorare la replicazione virale (Letterio e Roberts, 1998). Quindi, l'aumento della produzione di TGF-β potrebbe contribuire alla replicazione del GNAstV inibendo la risposta immunitaria dell'ospite.iNOS è una componente importante della risposta immunitaria innata e svolge un ruolo chiave nel controllo delle infezioni virali. Nel nostro studio, i risultati hanno indicato che l'infezione da GNAstV

espressione INOS ovviamente sovraregolata. L'elevata produzione di iNOS può consentire all'ospite di resistere all'infezione virale. I nostri risultati sono stati in accordo con quelli di studi precedenti, che hanno dimostrato che l'infezione da TAStV-2 induce la produzione di iNOS, che limita la replicazione dell'astrovirus (Qureshi et al.,200l; Koci et al., 2004; Meyerhoff et al., 2012).

Il sistema immunitario adattativo svolge un ruolo chiave nel controllo delle infezioni virali. Nel nostro studio, GNAstVinfection ha aumentato il livello di mRNA di MHC Ia, MHC Iix e CD8 +, e questo indica che sono state attivate le risposte immunitarie umorali e cellulari. In precedenza, è stato riferito che l'infezione da astrovirus umano evoca la produzione di anticorpi, che può neutralizzare il virus (Kurtzand Lee, 1978). However.no nello studio sono stati riscontrati cambiamenti significativi nell'espressione dell'mRNA CD4+. Considerando che le cellule CD4"T sono essenziali per la maturazione delle cellule B e la specificità degli anticorpi, è possibile che GNAst V non possa indurre una forte risposta immunitaria umorale. Questo potrebbe spiegare perché non è stato osservato alcun aumento evidente di MHC II.aexpression a 7 dpi. Inoltre, i livelli di mRNA di CD8 e MHCIa a 14 dpi sono diminuiti rispetto a 7 dpi. Ciò può essere correlato alla riduzione della carica virale, come menzionato sopra. In questo studio, l'anticorpo GNAst V non è stato rilevato perché non è disponibile alcun kit commerciale. Quindi, il ruolo degli anticorpi in GNAstVinfection deve essere ulteriormente studiato.

In conclusione, i nostri dati hanno rivelato i modelli di risposta immunitaria nella milza e nel rene delle papere infette da V GNAst. Sull'infezione da GNAst V, sono stati attivati geni correlati all'immunità innata e adattativa. Tuttavia, la produzione di citochine e proteine antivirali non ha protetto le papere contro la malattia. Questo è il primo studio a riportare i cambiamenti nelle espressioni geniche immuno-correlate in risposta a GNAst Vinfection, che può ulteriormente aiutare a chiarire i meccanismi molecolari delle interazioni GNAstV dell'ospite.