Ricerca sull'intervento sulla glicosidesina dell'alcol feniletilico Cistanche sul modello animale della sindrome perimenopausale Ⅱ

Esperimento 1 Preparazione del glicoside feniletanoide Cistanche 1 Fonte di materiali medicinali

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, numero di lotto: 20130501.

2 reagenti

Etanolo al 95% (grado medico); AB-8 resina ad adsorbimento macroporosa, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, numero di lotto: 20130618.

Sostanza di riferimento dell'echinacoside, fornita dall'Istituto cinese per il controllo dei prodotti farmaceutici e biologici, numero di lotto: 111670-200503.3

QUANTO TEMPO IMPIEGA LE CISTANCHE A FUNZIONARE?

Metodo di preparazione

È stato fatto riferimento al metodo della letteratura [19] ed è stato condotto sotto la guida del professor Feng Suxiang del Dipartimento di analisi dei farmaci dell'Henan College of Traditional Chinese Medicine.Macinare Cistanchein una polvere grossolana, aggiungere 10 volte la quantità di etanolo al 70% a riflusso ed estrarre due volte, 1,5 ore ogni volta, unire i due estratti alcolici, concentrare sotto pressione ridotta finché non si avverte più odore di alcol e disperdere con acqua distillata (la concentrazione è 0,5 g di materiale medicinale/ml) come soluzione campione. Passare attraverso la resina AB-8 (farmaco nella colonna: la resina è 1:10), caricare il campione in un flusso e lasciarlo riposare per 5 ore fino al completo assorbimento. Innanzitutto, lavare con 10 volte il volume della colonna di acqua distillata, eliminare l'acqua e quindi utilizzare 10 volte il volume della colonna. Utilizzare etanolo al 10% per rimuovere le impurità e infine eluire con 7 volte il volume della colonna di etanolo al 60%. Raccogliere l'eluato ed evaporare a secco per ottenere una polvere. 4 Selezione della lunghezza d'onda di misurazione

Misurare con precisione {{0}},5 ml della soluzione di riferimento, aggiungere 1 ml di soluzione di nitrito di sodio al 5%, agitare bene e lasciare riposare per 6 minuti; aggiungere 1 ml di soluzione di nitrato di alluminio al 10%, agitare bene e lasciare riposare per 6 minuti; aggiungere una soluzione di idrossido di sodio al 10% 10 mL, diluire a 25 mL con acqua, agitare bene e lasciare riposare per 18 minuti per servire come soluzione di riferimento. 0,5 ml diCistanche feniletanolo glicosidela soluzione è stata preparata allo stesso modo della soluzione di prova. Utilizzare il campione parallelo senza aggiungere la sostanza di riferimento, testare la soluzione come bianco e preparare la soluzione bianco allo stesso modo. Sullo spettrofotometro UV, esegui una scansione completa della lunghezza d'onda delle tre soluzioni precedenti nell'intervallo di lunghezze d'onda di 200-800 nm. Sia la sostanza di riferimento che la soluzione di prova presentano picchi di assorbimento massimi a 507 nm, pertanto come lunghezza d'onda di assorbimento viene determinata 507 nm.

Dopo lo sviluppo del colore del campione di glicoside del feniletanolo Cistanche + lo sviluppo del colore della sostanza di riferimento del mandarino Echinacea (confronto sovrapposto), vedere la Figura 1.

Figura 1 Dopo lo sviluppo del colore del campione di glicoside feniletanoide Cistanche + dopo lo sviluppo del colore della sostanza di riferimento Echinacea mandarino Figura 5 Metodo di rilevamento del contenuto

Misurare con precisione 1 mL della soluzione da testare, aggiungere 1 mL di soluzione di nitrito di sodio al 5%, agitare bene e lasciare riposare per 6 minuti; aggiungere 1 ml di soluzione di nitrato di alluminio al 10%, agitare bene e lasciare riposare per 6 minuti; aggiungere idrossido di sodio al 10%. La soluzione è 10 mL, diluire a 25 mL con acqua, agitare bene e lasciare riposare per 18 minuti. Utilizzare il campione parallelo senza aggiungere la soluzione campione come bianco e preparare una soluzione bianco allo stesso modo. Misurato utilizzando uno spettrofotometro UV a 507 nm. 6 Revisione metodologica

6.1 Preparazione della soluzione di riferimento e della soluzione campione

Preparazione della soluzione di riferimento: pesare accuratamente 3,06 mg di standard di riferimento di echinacoside essiccato fino a peso costante, collocarlo in un matraccio tarato da 25 ml, aggiungere una soluzione al 70% per sciogliere e diluire fino alla tacca, agitare bene e mettere da parte. La concentrazione standard è 0,1224 mg/ml.

Preparazione della soluzione campione: pesare esattamente 5 mg diGlicoside feniletanoide di Cistanche estrattoin un matraccio tarato da 10 ml, scioglierlo con etanolo al 70% e portare a volume.

6.2 Preparazione della curva standard

Disegna con precisione {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 mL di soluzione di riferimento, sviluppare il colore e diluire a volume secondo il metodo descritto al punto 4.2 e misurare il valore di assorbanza a 507 nm. Utilizzando la concentrazione rispetto all'assorbanza per creare una curva di regressione, l'equazione di regressione è: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994) e l'intervallo lineare è 4.{{ 23}}.4ug/ml.

6.3 Prova di precisione

Prendere la soluzione campione e misurarla sei volte in parallelo secondo la voce "Metodo di determinazione del contenuto". Calcolare la deviazione standard relativa dell'assorbanza. Le assorbanze sono rispettivamente {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0.297. L'assorbanza media=0.298, RSD=0.330% (n =6).

6.4 Prova di stabilità

Prendi una quantità adeguata della soluzione campione e, in base alla voce "Metodo di determinazione del contenuto", misura i valori di assorbanza a {{0}}, 15, 30, 50 e 60 minuti dopo che la soluzione è stata completamente colorata e calcolare la deviazione standard relativa. Le assorbanze sono rispettivamente 0.304, 0,303, 0,300 e 0,296. , 0,295, 0,295, assorbanza media=0,299, RSD=1,362% (n=5).

6.5 Prova di ripetibilità

Prendere un campione, preparare 6 soluzioni campione in base alla voce "Preparazione della soluzione campione" e misurare il valore di assorbanza in base alla voce "Metodo di determinazione del contenuto" e calcolare il contenuto. I contenuti sono rispettivamente 65,2%, 65,6%, 66,7%, 67,2% e 66,5%. , 65,8%, contenuto medio 66,2%, RSD=1,142% (n=6).

6.6 Test di recupero del campione

Prelevare con precisione 0,5 mL della soluzione campione con contenuto noto, per un totale di 9 parti, e aggiungere rispettivamente 200, 250 e 300 ul della soluzione standard. Misurare e calcolare il tasso di recupero e la deviazione standard relativa del glicoside del feniletanolo Cistanche. I tassi di recupero sono rispettivamente del 101,45% e del 99,26%. , 98,94%, 101,83%, 99,05%, 99,47%, 98,72%, 99,17%, 100,64%, il tasso di recupero medio è 99,84%, RSD=1,164% (n=9).

7 Determinazione del contenuto del campione

Tabella 1 Risultati della determinazione del contenuto di glicosidi feniletanoidi in Cistanche