L'attivazione di TLR9 induce una glicosilazione di IgA aberrante tramite percorsi mediati da APRILE e IL-6 nella nefropatia da IgA
Mar 11, 2022
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Yuko Makita1, Hitoshi Suzuki1, Toshiki Kano1, Akiko Takahata1, Bruce A. Julian2,3, Jan Novak3 e Yusuke Suzuki1
PAROLE CHIAVE: APRILE; IgA1 carenti di galattosio; nefropatia da IgA; IL-6; immunocomplesso
Le IgA1 carenti di galattosio (Gd-IgA1) svolgono un ruolo cruciale nello sviluppo diNefropatia da IgA(IgAN). Tuttavia, i meccanismi patogeni che guidano la produzione di Gd-IgA1 non sono stati completamente chiariti. È noto che l'attivazione immunitaria innata tramite il recettore Toll-like 9 (TLR9) è coinvolta nella produzione di Gd-IgA1. Un ligando che induce la proliferazione (APRIL) e IL-6 sono anche noti per migliorare la sintesi di Gd-IgA1 in IgAN. Con questo come sfondo, abbiamo studiato come l'attivazione di TLR9 nelle cellule che secernono IgA si traduce in una sovrapproduzione di IgA nefritogene nel topo ddY incline a IgAN e nelle cellule che secernono IgA1- umane. L'iniezione del ligando TLR9 CpG-oligonucleotidi ha aumentato la produzione di immunocomplessi IgA e IgG-IgA aberranti glicosilati nei topi ddY che, a loro volta, hanno esacerbatodanno renale. I topi stimolati con CpG-oligonucleotide avevano livelli sierici elevati di APRIL che erano correlati a quelli degli immunocomplessi IgA e IgG-IgA aberranti glicosilati. In vitro,Attivazione TLR9ha potenziato la produzione di IgA nefritogenica, nonché di APRIL e IL{0}} negli splenociti di topi ddY e nelle cellule che secernono IgA1- umane. Tuttavia, il knock-down del siRNA di APRIL ha soppresso completamente la sovrapproduzione di Gd-IgA1 indotta da IL-6. La neutralizzazione di IL-6 ha ridotto la sovrapproduzione di Gd-IgA1 indotta da CpG-oligonucleotide. Inoltre, i percorsi APRIL e IL-6 hanno mediato indipendentemente la sovrapproduzione di Gd-IgA1 indotta da TLR9-. Pertanto, l'attivazione di TLR9 ha migliorato la sintesi di IgA glicosilata in modo anomalo che, in un modello murino di IgAN, ha ulteriormente migliorato il danno renale. Pertanto, APRIL e IL-6 in sinergia, oltre che indipendentemente, migliorano la sintesi di Gd-IgA1.
Dichiarazione traslazionale
La terapia specifica per la malattia mirata alle IgA1 carenti di galattosio può costituire un futuro trattamento diNefropatia da IgA. I risultati di questo studio, che hanno dimostrato il coinvolgimento di un ligando che induce la proliferazione (APRIL) e di interleuchina-6 (IL-6) nella sovrapproduzione di IgA glicosilati in modo anomalo, supportano la logica del targeting di APRIL e IL{ {3}} nella nefropatia da IgA (IgAN). Infatti, un recente studio ha dimostrato gli effetti positivi dell'anticorpo monoclonale anti-APRIL nelle IgAN murine,1 ed è attualmente in corso uno studio clinico con anticorpi neutralizzanti APRIL in pazienti con IgAN.
La nefropatia da IgA (IgAN), la glomerulonefrite primitiva più comune,2 causa una malattia renale allo stadio terminale nel 20-40% dei pazienti entro 20 anni dall'esordio di questa malattia.3 Sebbene la patogenesi delle IgAN rimanga completamente chiarita, episodica ematuria macroscopica in concomitanza con un'infezione del tratto respiratorio superiore suggerisce che il sistema immunitario della mucosa gioca un ruolo importante nelle manifestazioni cliniche di IgAN.4
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Glicosilazione aberrante di IgAè centrale nella patogenesi di IgAN. Le IgA glomerulari nei pazienti con IgAN sono limitate alla sottoclasse IgA1 ed è arricchito per molecole che hanno alcuni O-glicani della regione cerniera carenti di galattosio (IgA1 carenti di galattosio [Gd-IgA1]).5,6 Inoltre, i livelli sierici di Gd -IgA1 e IgA1-contenentiimmunocomplessi(IC) con autoanticorpi specifici per Gd-IgA1 sono elevati nei pazienti con IgAN.7-9 Tuttavia, i meccanismi per la produzione di Gd-IgA1 non sono ancora completamente compresi.
In questo studio abbiamo utilizzato il modello murino ddY incline a IgAN. I topi ddY sviluppano lesioni glomerulari che imitano quelle degli esseri umani con IgAN.10 Sebbene i topi non abbiano molecole di IgA con O-glicani tipici dell'IgA1 umana, l'IgAN umana e questo modello di topo ddY incline a IgAN condividono alcune caratteristiche specifiche della malattia, come l'aumento del siero di IgA e IgG-IgA IC in modo aberrante.6,11 Infatti, la glicosilazione di IgA aberrante dovuta al deficit di b1,{10}}galattosilazione di N-glicani induce IgAN murina a causa dell'aumento dei livelli sierici di alto peso molecolare IC contenenti IgA e IgA con la loro successiva deposizione renale e danno glomerulare.12 topi ddY mostrano proteinuria e glomerulonefrite proliferativa mesangiale con co-deposizione di IgA e C3 nei glomeruli. Uno studio di associazione sull'intero genoma ha identificato loci candidati legati alla progressione di IgAN nei topi ddY.13 I loci includono geni funzionalmente simili a quelli associati all'IgAN umana.14,15 Questi risultati suggeriscono che l'IgAN nei topi ddY e nell'uomo può essere influenzata almeno in parte dagli stessi geni di suscettibilità. Sebbene le caratteristiche molecolari delle IgA murine e delle IgA1 umane differiscano, le IgA glicosilate aberranti tendono a formare IC polimerici di IgA e IgG-IgA che successivamente guidano la progressione del danno renale nel modello murino ddY di IgAN, così come nell'IgAN umano. Pertanto, il modello di topi ddY ha alcune caratteristiche comuni con l'IgAN umana e può essere uno strumento utile per l'analisi di varie caratteristiche patogenetiche dell'IgAN.
I recettori toll-like (TLR) sono molecole chiave nel sistema immunitario innato e sono stati implicati nella patogenesi di IgAN.16–20 Antigeni esogeni derivati da agenti patogeni attivano la via di segnalazione del TLR9-MyD88.21 Questo processo porta a aumento significativo della sintesi di citochine infiammatorie, come l'interferone di tipo 1 e l'interleuchina-6 (IL-6).22 Recentemente abbiamo dimostrato che l'attivazione di TLR9 aggravavadanno renalein topi ddY inclini a IgAN, con un aumento dei livelli sierici di IgA e IgG-IgA IC.16 Inoltre, specifici polimorfismi di TLR9 sono associati alla progressione della malattia nei pazienti con IgAN.16 Livelli sierici di fattore di necrosi tumorale-a e IL{{ 6}} sono elevati nei pazienti con IgAN.23 Inoltre, IL-6 e IL-4 aumentano la produzione di IgA1 e accentuano il grado di carenza di galattosio, aumentando la sintesi di Gd-IgA1 da parte di IgA{{13} }secrezione di linee cellulari da pazienti con IgAN.24 Questi risultati suggeriscono che IL-6 potrebbe essere un mediatore chiave di questo processo.24,25.
Il gene del membro della superfamiglia 13 del ligando del fattore di necrosi tumorale (TNFSF13) codifica per un ligando che induce la proliferazione (APRIL) che è una citochina centrale per la maturazione e la sopravvivenza dei linfociti B.26 APRIL condivide alcuni recettori di segnalazione importanti per lo sviluppo dei linfociti B con un altro Legante della superfamiglia del TNF, fattore di attivazione delle cellule B (BAFF). BAFF è anche coinvolto nella maturazione dell'affinità dei linfociti B. Uno studio di associazione sull'intero genoma ha identificato il TNFSF13 come uno dei geni candidati associati all'IgAN.27 Infatti, nei pazienti con IgAN, i livelli sierici di APRIL sono elevati28 e i livelli sono associati alla prognosi renale.28
Per ottenere una migliore comprensione dei meccanismi sottostanti coinvolti nella sovrapproduzione di IgA glicosilata in modo anomalo tramite l'attivazione di TLR9 da parte degli oligodeossinucleotidi (ODN) del ligando CpG, abbiamo utilizzato topi ddY inclini a IgAN e cellule che secernono IgA1- umane.
RISULTATI
L'attivazione di TLR9 ha aggravato il danno renale nei topi ddY attraverso l'aumento della produzione di IgA nefritogene
TLR9 può essere attivato dai ligandi corrispondenti, come CpG-ODN. Per testare l'effetto dell'attivazione di TLR9 in un modello murino di IgAN, abbiamo utilizzato un'iniezione del ligando in topi ddY inclini a IgAN. I topi iniettati con CpG-ODN hanno sviluppato proliferazione mesangiale ed espansione della matrice extracellulare (Figura 1a). I punteggi istologici renali basati sulla proliferazione mesangiale e sull'espansione della matrice mesangiale nei topi ai quali è stato iniettato CpG-ODN erano significativamente superiori a quelli dei topi di controllo (P <{7}}.01; figura="" 1a).="" i="" livelli="" di="" albumina="" urinaria="" nei="" topi="" ai="" quali="" è="" stato="" iniettato="" cpg-odn="" erano="" significativamente="" elevati="" rispetto="" a="" quelli="" dei="" topi="" di="" controllo="" (p=""><0.{{20}}1; figura="" 1a).="" solo="" i="" topi="" iniettati="" con="" cpg-odn="" hanno="" sviluppato="" depositi="" mesangiali="" di="" iga,="" igg="" e="" complemento="" c3="" (figura="" 1b).="" i="" topi="" iniettati="" con="" cpg-odn="" hanno="" mostrato="" livelli="" sierici="" significativamente="" più="" elevati="" di="" iga="" (p=""><0,01) e="" igg="" (p=""><0,01) rispetto="" ai="" topi="" di="" controllo="" (figura="" 1c).="" le="" iga="" sieriche="" di="" topi="" iniettati="" con="" topi="" cpg-odn="" avevano="" una="" reattività="" inferiore="" con="" le="" lectine="" agglutinine="" di="" ricinus="" communis="" agglutinine-i="" (rca-i)="" e="" sambucus="" nigra="" rispetto="" a="" quelle="" dei="" topi="" di="" controllo="" (figura="" 1c),="" indicando="" un="" contenuto="" inferiore="" di="" galattosio="" e="" acido="" sialico="" su="" n="" -glicani="" di="" iga="" murina.="" inoltre,="" il="" livello="" sierico="" di="" igg-iga="" ic="" nei="" topi="" iniettati="" con="" cpg-odn="" era="" significativamente="" superiore="" a="" quello="" dei="" topi="" di="" controllo="" (p=""><0,05; figura="" 1c).="" questi="" risultati="" lo="" hanno="">Attivazione TLR9di CpG-ODN ha provocato la sovrapproduzione di IgA e IgG-IgA IC aberranti glicosilati, portando aimmunocomplessodeposizione e danno renale.
Le cellule B e le cellule dendritiche sono state coinvolte nelle risposte CpG-ODN
Abbiamo studiato quali tipi cellulari sono coinvolti nell'induzione della sovrapproduzione di IgA glicosilata in modo anomalo in risposta a CpG-ODN. I linfociti B e le cellule dendritiche (DC) sono stati isolati dalla milza di topi ddY utilizzando anticorpi anti-topo CD19 e CD11c rispettivamente mediante smistamento cellulare attivato con fluorescenza FL. La stimolazione CpG-ODN di cellule B isolate ha indotto una sovrapproduzione di IgA. Inoltre, CpG-ODN ha aumentato significativamente la produzione di IgA quando le cellule B sono state co-coltivate con DC (Figura supplementare S1). Questi risultati hanno suggerito che le cellule B CpG-ODN attivassero direttamente e che la DCS migliorasse ulteriormente la produzione di IgA dopo l'attivazione di TLR9.
La sovrapproduzione di APRIL ha migliorato la sintesi di circuiti integrati di IgA e IgG-IgA aberranti glicosilati
Abbiamo valutato se APRIL e/o BAFF fossero coinvolti nella sintesi di IgA nefritogeniche indotte dall'attivazione di TLR9. L'iniezione di CpG-ODN nei topi ddY ha elevato significativamente i livelli sierici di APRIL e BAFF (Figura 2a). I livelli di espressione di APRILE negli splenociti erano correlati alla produzione di IgA glicosilati in modo anomalo e alla formazione di IC IgG-IgA (Figura 2b). I livelli di espressione di BAFF negli splenociti erano correlati alla produzione di IgA glicosilati in modo anomalo ma non alla formazione di IgG-IgA IC (Figura 2b). Inoltre, i livelli sierici di APRILE ma non di BAFF erano significativamente correlati con livelli sierici elevati di IgA e IgG-IgA IC aberranti glicosilati nei topi iniettati con CpG-ODN (Figura 2c). Questi risultati suggeriscono che sia APRIL che BAFF possono essere coinvolti nella produzione di IgA glicosilati in modo anomalo, sebbene APRIL possa essere più coinvolto nella produzione di IgG-IgA IC.
Figura 1|Produzione indotta da stimolazione CpG-oligodeossinucleotide (ODN) di IgA nefritogene. L'iniezione con CpG-ODN ha aumentato i livelli ematici di IgA e IgG-IgA immunocomplessi (IC) aberranti glicosilati e ha esacerbato il danno renale nei topi ddY. (a) topi ddY prima dello sviluppo diNefropatia da IgA(IgAN) sono stati iniettati ip con CpG-ODN tre volte alla settimana per 12 settimane. In un'analisi istologica delle lesioni glomerulari, i topi iniettati con CpG-ODN hanno mostrato la proliferazione delle cellule mesangiali e l'espansione della matrice extracellulare. Il pannello di destra mostra la valutazione delle lesioni renali mediante punteggio semiquantitativo. I punteggi istologici renali, valutati dalle percentuali di glomeruli con le suddette lesioni, hanno mostrato che il danno renale nei topi ai quali era stato iniettato CpG-ODN era esacerbato. I livelli di albumina urinaria nei topi iniettati con CpG-ODN erano significativamente elevati rispetto a quelli dei topi di controllo. Barre nei pannelli inferiori ¼ significano ± SEM. (b) Analisi immunoistochimica dei depositi glomerulari di IgA, IgG e C3. Solo i topi a cui è stato iniettato CpG-ODN hanno sviluppato depositi mesangiali di IgA, IgG e C3. (c) I livelli sierici di IgA, IgG e IgG-IgA IC sono stati significativamente aumentati dopo il trattamento con CpG-ODN per 12 settimane. Le IgA sieriche nei topi iniettati con CpG-ODN hanno mostrato una reattività significativamente inferiore con le lectine di Ricinus communis agglutinina-I (RCA-I) e Sambucus nigra agglutinina (SNA) rispetto alle IgA nei topi di controllo. Questi risultati indicano che l'iniezione di CpG-ODN ha aumentato i livelli sierici di IgA glicosilata in modo anomalo. Vengono visualizzati i singoli punti. *P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" densità="" ottica.="" per="" ottimizzare="" la="" visualizzazione="" di="" questa="" immagine,="" consultare="" la="" versione="" online="" di="" questo="" articolo="" su="">
Figura 2|La correlazione tra la sovrapproduzione di un ligando che induce la proliferazione (APRIL) e IgA glicosilata aberrante nei topi iniettati con CpG-oligodeossinucleotide (ODN). (a) L'iniezione di topi ddY con CpG-ODN ha aumentato i livelli sierici del fattore di attivazione delle cellule B (BAFF) e APRILE. ( b ) I livelli di espressione di BAFF negli splenociti interi erano correlati con una ridotta reattività con la lectina di Ricinus communis agglutinina-I (RCA-I) ma non erano correlati con la formazione del complesso immunitario IgG-IgA (IC). Nel frattempo, i livelli di espressione di APRILE sono stati associati alla produzione di IgA glicosilata in modo anomalo e alla formazione di IgG-IgA IC. ( c ) Nei topi iniettati con CpG-ODN, i livelli sierici di APRIL erano associati a una ridotta reattività di IgA con lectina RCA-I e livelli elevati di IgG-IgA IC. I livelli sierici di BAFF non erano correlati alla produzione di IgA glicosilata e alla formazione di IgG-IgA IC. Barre ¼ significano - SEM. *P < 0.05.="" od,="" densità="">
IL{0}} ha indotto la produzione di IgA glicosilata in modo anomalo
I livelli sierici di IL{{0}} nei topi iniettati con CpG-ODN erano significativamente più alti rispetto ai topi di controllo (P <0,05; figura="" 3a).="" utilizzando="" splenociti="" di="" topi="" ddy="" inclini="" a="" igan,="" abbiamo="" esaminato="" se="" l'attivazione="" cellulare="" indotta="" da="" tlr9-="" e="" la="" sovrapproduzione="" di="" iga="" glicosilata="" in="" modo="" anomalo="" fossero="" mediate="" da="" il-6.="" la="" stimolazione="" cpg-odn="" ha="" migliorato="" la="" produzione="" di="" il-6="" da="" parte="" degli="" splenociti="" in="" vitro.="" l'aggiunta="" di="" il{10}}="" al="" mezzo="" di="" coltura="" degli="" splenociti="" ha="" aumentato="" la="" produzione="" di="" iga.="" inoltre,="" il-6="" ha="" migliorato="" la="" sintesi="" di="" iga="" glicosilati="" in="" modo="" anomalo="" e="" la="" formazione="" di="" igg-iga="" ic="" e="" ha="" aumentato="" la="" produzione="" di="" aprile="" (figura="" 3a).="" il-6–anticorpo="" neutralizzante="" ridotto="" cpg-odn–="" iga="" totale="" indotta,="" produzione="" di="" iga="" glicosilata="" aberrante="" e="" formazione="" di="" igg-iga="" ic="" (figura="" 3b).="" questi="" risultati="" indicano="" che="" l'attivazione="" di="" tlr9="" è="" stata="" mediata,="" almeno="" in="" parte,="" da="" il-="" 6.="" inoltre,="" nella="" produzione="" di="" iga="" glicosilata="" in="" modo="" anomalo="" possono="" essere="" coinvolte="" altre="" vie{20}}mediate="" da="">
cistancepuò migliorarerenefunzione
APRILE e IL{0}} hanno migliorato la sintesi di Gd-IgA1 nelle cellule che secernono IgA1- umane
Abbiamo ulteriormente verificato se APRIL e IL-6 sono comuni ai principali mediatori che migliorano la produzione di IgA nefritogene nelle cellule che secernono IgA1- umane. L'integrazione di CpG-ODN ha migliorato l'aumento di IL-6, l'espressione di APRILE, la produzione della proteina APRIL e la produzione di IgA e Gd-IgA1 (Figura 4a). La stimolazione con IL-6 e con APRIL ha migliorato la produzione di IgA e Gd-IgA1 (Figura 4b, c). Gli effetti della stimolazione CpG-ODN sulla produzione di IgA e Gd-IgA1 sono stati in parte ridotti dagli anticorpi neutralizzanti IL-6-(Figura 4d). Inoltre, il knockdown del piccolo (si)RNA interferente di APRIL ha anche ridotto la produzione di IgA e Gd-IgA1 indotta dalla stimolazione di IL-6 (Figura 4b), indicando che APRIL e IL-6 promuovono sinergicamente la generazione di Gd -IgA1.
DISCUSSIONE
L'IgA mesangiale nell'IgAN umana è esclusiva della sottoclasse IgA1 che mostra una anormale O-glicosilazione. 29,30 L'IgA1 umana ha una regione cerniera con O-glicani che è assente dall'IgA murina.6,31,32 Tuttavia, la glicosilazione aberrante degli N-glicani è coinvolta nella patogenesi di un modello murino di IgAN in topi ddY, con un aumento di IgA glicosilati in modo anomalo e IC contenenti IgA.11,12 Modifiche aberranti dei carboidrati IgA negli O- o N-glicani sono proprietà caratteristiche dell'IC nefritogenico contenente IgA.
Diversi studi hanno mostrato l'attivazione di TLR9 nella progressione di IgAN.17-19 Nel presente studio, abbiamo dimostrato che l'attivazione di TLR9 mediante iniezione ip di CpG-ODN in topi ddY aggravava le lesioni renali accompagnate da depositi di IgA e IgG glomerulari, probabilmente perché di aumento dei livelli sierici di IgA e IgG-IgA IC aberranti glicosilati. Inoltre, abbiamo dimostrato che l'attivazione di TLR9 era coinvolta nella sintesi di Gd-IgA1 nelle linee cellulari che secernono IgA1- umane.
Figura 3|L'effetto di CpG-oligodeossinucleotide (ODN) e interleuchina (IL)-6 su splenociti in coltura di topi ddY. (a) I livelli sierici di IL-6 nei topi iniettati con CpG-ODN erano significativamente più alti rispetto ai topi di controllo. La stimolazione con CpG-ODN ha aumentato la produzione di IL-6 di splenociti di topi ddY in coltura. L'incubazione di splenociti di topi ddY con IL{7}} ricombinante ha aumentato la produzione di IgA totali e IgA aberranti glicosilate, con conseguente formazione del complesso immunitario IgG-IgA (IC). IL ricombinante-6 ha aumentato la sovrapproduzione di un ligando che induce la proliferazione (APRIL). (b) Gli splenociti in coltura sono stati stimolati con CpG-ODN in presenza o assenza di anticorpi neutralizzanti IL-6. L'anticorpo anti-IL-6 ha ridotto la produzione di IgA totali e IgA aberranti glicosilate e, di conseguenza, ha ridotto la formazione di IgG-IgA IC indotta da CpG-ODN. Barre ¼ significano ± SEM. * P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" densità="" ottica;="" pbs,="" soluzione="" salina="" tamponata="" con="" fosfato;="" rca-i,="" ricinus="" communis="" agglutinina-i;="" sna,="" agglutinina="" di="" sambucus="">
Figura 4|L'effetto della supplementazione di CpG-oligodeossinucleotide (ODN) o di un ligando che induce la proliferazione (APRIL) sulle linee cellulari che secernono IgA umane1- su IgA1, IgA1 carenti di galattosio (Gd-IgA1) e interleuchina (IL){{ 9}} produzione. (a) L'integrazione di CpG-ODN ha migliorato la produzione di IL-6. CpG-ODN ha migliorato l'espressione genica di APRILE. L'analisi Western blot ha dimostrato che CpG-ODN ha aumentato i livelli proteici di APRILE. I risultati sono stati valutati densitometricamente. La stimolazione con CpG-ODN ha indotto la produzione di IgA e Gd-IgA1. (b) Il knockdown dell'RNA (siRNA) piccolo e interferente di APRIL ha ridotto la sovrapproduzione indotta da IL-6 di IgA e Gd-IgA1. (c) Le cellule produttrici di IgA{{2{{30}}}} stimolate con APRIL ricombinante hanno prodotto più IgA e Gd-IgA1. (d) Le cellule secernenti IgA1- sono state incubate con anticorpi anti-IL-6 dopo la stimolazione con CpG-ODN. La maggiore produzione di IgA e Gd-IgA1 indotta da CpG-ODN è stata ridotta dall'anticorpo anti-IL-6 e dal knockdown siRNA di APRIL. Barre ¼ significano ± SEM. *P < 0,05,="" **p="">< 0,01.="" gadph,="" gliceraldeide{34}}fosfato="" deidrogenasi;="" pbs,="" soluzione="" salina="" tamponata="" con="">
Abbiamo valutato il meccanismo mediante il quale l'attivazione di TLR9 ha mediato una maggiore produzione di IgA glicosilata in modo anomalo. BAFF e APRIL sono noti per i loro ruoli nella sopravvivenza e differenziazione delle cellule B. McCarthy et al.33 hanno dimostrato che topi transgenici con sovraespressione di BAFF sviluppano depositi di IgA mesangiale con danno renale e anomalie urinarie.33 Recentemente abbiamo dimostrato che l'espressione genica di APRIL è elevata nei centri germinali tonsillari di pazienti con IgAN. Inoltre, la sovraespressione di APRIL nei centri germinali tonsillari era correlata ai livelli sierici di Gd-IgA1 e alla gravità della malattia nei pazienti con IgAN.34 Questi risultati suggeriscono che sia BAFF che APRIL possono essere coinvolti nella patogenesi di IgAN. Tuttavia, l'associazione tra l'attivazione di BAFF/APRIL e TLR9 non è chiara. Nel presente studio, l'attivazione di TLR9 ha aumentato l'espressione genica e i livelli sierici di APRIL. I livelli sierici di IgA glicosilata in modo anomalo erano correlati ai livelli di espressione di BAFF e APRIL negli splenociti. Tuttavia, i livelli sierici di IgG-IgA IC erano correlati ai livelli di espressione di APRIL ma non di BAFF. Inoltre, i livelli sierici di APRIL erano associati alla sovrapproduzione di IgA e IgG-IgA IC aberranti glicosilati nei topi attivati con TLR9-. Nelle cellule che secernono IgA1-, l'attivazione di TLR9 ha anche indotto una sovrapproduzione di Gd-IgA1 tramite APRIL. Questi risultati hanno suggerito che APRIL svolge un ruolo importante nella sovrapproduzione indotta da TLR9-di IgA nefritogeniche e nella formazione di IgG-IgA IC.
Dovrebbe essere chiarita la risposta per tipo di cellula per determinare il ruolo delle cellule B e T e delle DC. Nel presente studio, abbiamo valutato il ruolo dei linfociti B e delle DC plasmacitoidi. TLR9 è espresso da DC, cellule B e macrofagi ma non da cellule T.35–37 Il contributo di BAFF/APRIL alla risposta anticorpale indipendente dalle cellule T è noto.38,39 Qui abbiamo testato se l'attivazione di TLR9 può migliorare la sintesi di IgA glicosilata in modo anomalo e formazione di IgG-IgA IC tramite APRIL in modo indipendente dalle cellule T. Abbiamo anche utilizzato linee cellulari che secernono IgA umane clonate1- e abbiamo dimostrato che l'attivazione di TLR9 aumentava la produzione di Gd-IgA1 tramite APRIL e IL{13}}, suggerendo che il processo è indipendente dai linfociti T. Inoltre, abbiamo valutato i ruoli delle cellule B e delle DC. Abbiamo dimostrato che CpG-ODN specifico per cellule B e DC ha aumentato la produzione di IgA glicosilata in modo anomalo negli splenociti interi. Inoltre, abbiamo studiato se la stimolazione CpG-ODN in vitro può migliorare la produzione di IgA. La stimolazione CpG-ODN di cellule B isolate ha indotto una sovrapproduzione di IgA. Inoltre, CpG-ODN ha aumentato significativamente la produzione di IgA quando le cellule B sono state co-coltivate con DC (Figura supplementare S1). Questi risultati suggeriscono che l'attivazione di CpG-ODN risulta maggioreProduzione di IgA e glicosilazione aberranteè mediato da TLR9 in modo indipendente dalle cellule T.
È noto che IL-6 accentua la proliferazione delle cellule produttrici di immunoglobuline e la differenziazione terminale delle plasmacellule.40–42 Inoltre, IL-6 può anche essere una citochina candidata primaria per la differenziazione delle cellule helper follicolari T .43,44 Le cellule helper follicolari T sono essenziali per la maturazione dell'affinità delle cellule B, la ricombinazione del cambio di classe e la generazione di cellule B di memoria e plasmacellule all'interno del centro germinale.43,44 In un modello murino di lupus, IL-6 la carenza ha impedito la differenziazione delle cellule helper follicolari T e l'espansione delle cellule B del centro germinale, con conseguente riduzione della produzione di autoanticorpi.45 Il presente studio ha chiarito che l'attivazione di TLR9 da parte di CpG-ODN ha migliorato la produzione di IL-6 negli splenociti di IgAN murina. IL-6 ha indotto la sovrapproduzione di IgA e IgG-IgA IC in modo anomalo in un modello murino di IgAN. Nelle cellule umane che secernono IgA1-, abbiamo confermato che IL-6 ha aumentato la produzione di Gd-IgA1.24 I nostri risultati suggeriscono che IL-6 potrebbe essere una delle principali molecole che inducono la sovrapproduzione di IgA nefritogeniche mediato dall'attivazione di TLR9.
APRIL svolge un ruolo importante nella commutazione della classe IgA e nella differenziazione dei plasmocitoidi.46,47 IL-6 promuove la differenziazione terminale dei linfociti B in plasmacellule che secernono IgA.41,42 Il presente studio ha dimostrato che IL{{7} } la stimolazione ha indotto la produzione di APRILE. Quindi abbiamo ipotizzato che esistesse un'associazione tra APRILE e IL-6 mediata dall'attivazione di TLR9 che induceva la produzione di IgA glicosilata in modo anomalo. Abbiamo scoperto che l'anticorpo neutralizzante IL-6 non bloccava completamente la sovrapproduzione di Gd-IgA1 indotta da CpG-ODN e che il knockdown del siRNA di APRIL riduceva la sovrapproduzione di Gd-IgA1 indotta da IL-6. Questi dati hanno suggerito che APRIL e IL-6 promuovessero sinergicamente la produzione di Gd-IgA1 mediata dall'attivazione di TLR9. Inoltre, sia l'anticorpo neutralizzante IL-6 che il knockdown siRNA di APRIL hanno ridotto la produzione di IgA e Gd-IgA1 più del solo anticorpo neutralizzante IL-6. Pertanto, il percorso di attivazione di TLR9 coinvolge gli effetti sinergici di IL-6 e APRIL sulla produzione di anticorpi e sulla glicosilazione (Figura 5). Studi recenti hanno inoltre indicato che IL-6, in combinazione con APRIL, induce la generazione e la sopravvivenza di plasmacellule.48,49 Tuttavia, sono necessari studi futuri per chiarire le vie di segnalazione intercellulare tra APRIL e IL-6 in la produzione di IgA nefritogeniche.
cistanceperreneinfezione
Insomma,Attivazione TLR9danno renale esacerbato in un modello murino di IgAN migliorando la produzione di IgA glicosilata in modo anomalo e la formazione di IgG-IgA IC. In questo processo, la sovrapproduzione di APRIL e IL-6 indotta dall'attivazione di TLR9 ha aumentato la produzione di IgA nefritogene. Inoltre, il presente studio ha chiarito che APRIL e IL-6 funzionano sinergicamente, oltre che indipendentemente, per produrre IgA glicosilati in modo anomalo. Questi risultati potrebbero informare il futuro sviluppo di nuovi approcci terapeutici per IgAN.
Figura 5|Il ruolo sinergico tra il recettore Toll-like 9 (TLR9), un ligando che induce la proliferazione (APRIL) e l'interleuchina (IL){5}} nelle cellule produttrici di IgA nella nefropatia da IgA (IgAN). L'attivazione di TLR9 ha indotto la produzione di APRIL e IL-6, risultando in
la sovrapproduzione di IgA aberranti glicosilate. APRIL e IL{0}} funzionano sinergicamente per promuovere la generazione di IgA aberranti glicosilati. Oltre ad APRIL che induce la produzione di IL-6, come riportato in precedenza, IL-6 può anche migliorare la sintesi di APRIL. Inoltre, APRIL e IL-6 promuovono indipendentemente la produzione di IgA glicosilata in modo anomalo. NF-kB, fattore nucleare-kB.
METODI
Animali e protocolli sperimentali
Il topo ddY incline a IgAN è un modello noto di IgAN spontaneo con incidenza ed entità variabile della lesione glomerulare che imita l'IgAN umana.10 topi ddY sono divisi in 3 gruppi in base alla manifestazione didanno ai reni: topi con topi ad esordio precoce o tardivo e quiescenti. La malattia a esordio precoce nei topi ddY si presenta con proteinuria e depositi di IgA glomerulari dopo 20 settimane di età.13 Pertanto, abbiamo utilizzato topi ddY entro 18 settimane di età per valutare se l'attivazione di TLR9 aggravava IgAN in questo modello. Un totale di 30 topi femmine ddY (SLC Japan, Shizuoka, Giappone) sono stati mantenuti presso la struttura per animali della Juntendo University, Tokyo, Giappone. I topi sono stati nutriti con cibo regolare (Oriental Yeast Co., Tokyo, Giappone) e acqua ad libitum e sono stati alloggiati in una specifica stanza priva di agenti patogeni. Il protocollo sperimentale è stato approvato dall'Ethics Review Committee for Animal Experimentation della Juntendo University Facoltà di Medicina. A 6 settimane di età, i topi sono stati divisi casualmente in 2 gruppi. Un gruppo ha ricevuto ip iniettato CpG-ODN 3 volte a settimana per 12 settimane; il secondo gruppo (controllo) è stato iniettato con non-CpG-ODN. CpG-ODN e non-CpG-ODN sono stati sintetizzati chimicamente (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Kanagawa, Giappone). Le sequenze dell'ODN sono TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCCG o TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCC (50/30 ) per ODN CpG o non CpG, rispettivamente.
Determinazione di IgA, IgG, IgG-IgA IC e IgA aberranti glicosilate nel siero murino
Sono stati prelevati campioni di sangue dalla vena buccale. Le IgA, IgG e IgG-IgA IC sieriche sono state misurate mediante test immunoassorbente legato all'enzima sandwich (ELISA; Beethyl Laboratories, Montgomery, TX) utilizzando il metodo modificato basato sul nostro precedente rapporto.50 I test di legame della lectina sono stati utilizzato per accedere al glicoformio di IgA. In questo test sono stati utilizzati RCA-I biotinilato (Vector Laboratories, Burlingame, CA) e Sambucus nigra bark lectin (Vector Laboratories) che hanno riconosciuto rispettivamente il galattosio e l'acido sialico attaccati al galattosio (prevalentemente nel legame a2,6).51 Sieri diluiti sono stati aggiunti a 100 ng di IgA per pozzetto. Piastre per microtitolazione rivestite con 1 mg/ml di IgA anti-topo di capra (100 ml/pozzetto) per la quantificazione delle IgA sieriche sono state incubate con questi campioni e sono state quindi aggiunte agglutinina di Sambucus nigra biotinilata o RCA-I. È stato applicato il coniugato avidina-perossidasi di rafano (ExtrAvidin; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). I livelli sierici di IgA legate in modo anomalo glicosilato sono stati espressi in unità (1 unità come densità ottica 1,0 misurata a 490 nm). I livelli sierici di APRIL e BAFF sono stati misurati utilizzando un kit ELISA per topi APRIL ELISA (MyBioSource, San Diego, CA) e un kit ELISA per topi BAFF (R&D Systems, Minneapolis, MN), secondo i protocolli del produttore.
Saggio per Gd-IgA1 prodotto da cellule che secernono IgA1- umane
È stato costruito un sandwich ELISA per Gd-IgA1 utilizzando l'anticorpo specifico Gd-IgA1 (IBL, Giappone).52 L'anticorpo specifico Gd-IgA1 (7,5 mg/ml) diluito in una soluzione salina tamponata con fosfato è stato applicato su una piastra ELISA per 18 ore a temperatura ambiente. I campioni sono stati applicati e incubati per 2 ore a temperatura ambiente. Le piastre sono state lavate e incubate per 2 ore a temperatura ambiente con un anticorpo monoclonale di topo coniugato con perossidasi di rafano 1:{14}} anti-IgA1 umana a{18}}anticorpo monoclonale specifico per la catena (Southern Biotech, Birmingham, AL). Dopo il lavaggio, le piastre sono state sviluppate con una soluzione di SIG-MAFAST di o-fenilendiammina (Sigma-Aldrich) e la reazione è stata interrotta mediante l'aggiunta di acido solforico 1 M (Wako, Osaka, Giappone). I livelli di Gd-IgA1 sono stati estrapolati facendo riferimento a una curva standard ({25}}parametro adattamento della curva logistica) di densità ottica a 490 nm ed espressa in unità. La Gd-IgA1 generata enzimaticamente dal plasma umano IgA152 è stata diluita in serie (1,37–1000 ng/ml) per generare una curva standard. In questo studio, 1 unità è stata definita come 1 ng/mL dello standard Gd-IgA1.52
Valutazione del danno renale nei topi ddY
Reniwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >50 percento di 20 glomeruli).13,53,54 Il punteggio massimo totale per ciascuna sezione era 9. I campioni renali per l'immunofluorescenza sono stati immersi in un composto a temperatura di taglio ottimale (Sakura Finetek Japan Co., Tokyo, Giappone) e conservati a –80 gradi I campioni sono stati tagliati in sezioni spesse 3- mm, fissate con acetone a –20 gradi per 5 minuti, lavati con soluzione salina tamponata con fosfato, bloccati con un agente bloccante (DS Pharma Biomedical Co., Osaka, Giappone) a temperatura ambiente per 30 minuti, quindi incubato a temperatura ambiente per 2 ore con i seguenti anticorpi primari: IgA anti-murina di capra, IgG anti-murina di capra coniugata con Alexa e anti-C3 di ratto (Bethyl Laboratories). Dopo altri 3 lavaggi con soluzione salina tamponata con fosfato, i vetrini sono stati montati con mezzo di montaggio (Dako, Tokyo, Giappone). I campioni sono stati analizzati e ripresi mediante microscopia laser confocale (Olympus Corporation, Tokyo, Giappone).
Reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale
L'RNA dalle cellule della milza è stato estratto utilizzando la soluzione di Torizol (Invitrogen, Tokyo, Giappone) e purificato con RNeasy Mini Kit (74106; Qiagen, Valencia, CA). La reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale è stata eseguita utilizzando il sistema di reazione a catena della polimerasi in tempo reale Applied Biosystems 7500 utilizzando SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Tokyo, Giappone) e primer specifici: primer per mouse TLR9 forward TCTCCCAACATGGTTCTCCGTCG, primer inverso TCGAGCCAGGCCATGA; mouse MyD88 forward primer GCACCTGTGTCTGGTCCATT, reverse primer CTGTTGGA CACCTGGAGACA; e il gene housekeeping gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi primer diretto CATTGTGGAAG GGCTCATGA, primer inverso TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. Le condizioni di amplificazione erano le seguenti: preriscaldamento a 95 gradi per 20 secondi e poi 40 cicli di denaturazione a 95 gradi per 3 secondi, e ricottura ed estensione a 60 gradi per 30 secondi. Sono stati acquistati saggi di espressione genica TaqMan specifici per l'Homo sapiens (Life Technologies, Carlsbad, CA) per il primer di APRIL, Hs00601664_g1, Mm03809849-s1 e BAFF, Mm01168134-m1 . Le condizioni del ciclo di reazione a catena della polimerasi TaqMan erano le seguenti: preriscaldamento a 95 gradi per 20 secondi e quindi 40 cicli di denaturazione a 95 gradi per 3 secondi e ricottura ed estensione a 60 gradi per 30 secondi
Studi in vitro con splenociti di topi ddY
Gli splenociti sono stati coltivati in terreno Roswell Park Memorial Institute-1640 integrato con il 20% di siero di vitello fetale, 100 mg/ml di streptomicina e 100 U/ml di penicillina. I globuli rossi sono stati lisati nel tampone di lisi dei globuli rossi (R7757; Sigma-Aldrich) a temperatura ambiente per 1 minuto, seguito da un lavaggio nel terreno Roswell Park Memorial Institute–1640.50 Le colture cellulari sono state conservate in un incubatore umidificato a 37 gradi con 5 per cento di CO2. La classe C CpG-ODN (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG) è stata utilizzata come ligando TLR9. L'anticorpo ricombinante IL-6, l'anticorpo anti-IL-6 e il controllo dell'isotipo IgG1 di ratto sono stati ottenuti da R&D Systems. Le cellule sono state coltivate con concentrazioni medie o raccomandate di CpG-ODN, 10 ng/ml di IL ricombinante-6 e 100 ng/ml di anticorpo anti-IL6. Le IgA, le IgA glicosilate aberranti, le IgG-IgA IC e APRIL prodotte dagli splenociti sono state misurate mediante ELISA dopo 72-ore di incubazione in vitro.
Studi in vitro con linee cellulari che secernono IgA umane1-
Le cellule B del sangue di una persona sana sono state immortalate con il virus di Epstein-Barr, subclonate per produrre linee cellulari che secernono IgA1- e coltivate come descritto.9 Inoltre, abbiamo confermato l'espressione dei recettori per APRIL/BAFF e IL -6. Le cellule sono state coltivate nel terreno Roswell Park Memorial Institute-1640 integrato con il 20% di siero fetale di vitello, streptomicina e penicillina in un'incubatrice umidificata a 37 gradi con il 5% di CO2. La classe B CpG-ODN (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT) è stata utilizzata come ligando TLR9. Il ricombinante IL-6, l'APRILE ricombinante, l'anticorpo anti-IL-6 e l'anticorpo di controllo IgG di capra sono stati ottenuti da R&D Systems. Le cellule sono state coltivate con concentrazioni medie o consigliate di CpG-ODN, 50 ng/ml di IL ricombinante-6, 40 ng/ml di APRILE ricombinante e 100 ng/ml di anticorpo anti-IL-6 per 72 ore
macchia occidentale
I surnatanti delle cellule che secernono IgA{0}} sono stati separati mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide in condizioni riducenti utilizzando gel a lastre con gradiente dal 5% al 15%. I gel sono stati trasferiti su membrane di polivinilidene difluoruro e incubati con anticorpi specifici per APRIL (Abcam Inc., Cambridge, MA) e gliceraldeide{4}}fosfato deidrogenasi (Abcam Inc). Le macchie sono state visualizzate mediante chemiluminescenza utilizzando una chemiluminescenza avanzata (GE Healthcare, Tokyo, Giappone) e un rilevatore di luminescenza (Konica Minolta Healthcare, Tokyo, Giappone). I risultati sono stati valutati densitometricamente.
APRILE siRNA atterramento
Le cellule che secernono IgA umane1- sono state coltivate in 24-piastre di coltura di pozzetti e trasfettate con siRNA specifico per APRIL (GS8741, Qiagen) o controllo non mirato siRNA (GS10673, Qiagen) utilizzando il protocollo di trasfezione secondo le istruzioni del produttore . Dopo incubazione per 24 ore, le cellule sono state incubate con 50 ng/ml di IL{7}} ricombinante (sistemi di ricerca e sviluppo) per 72 ore. Dopo l'incubazione, le cellule e i supernatanti sono stati raccolti per la misurazione di IgA e Gd-IgA1.
analisi statistica
La correlazione tra diversi parametri è stata analizzata utilizzando un'analisi della varianza. I dati sono stati espressi come media ± DS o valori mediani. I valori P < {{0}}.05="" sono="" stati="" considerati="" statisticamente="" significativi.="" tutte="" le="" analisi="" statistiche="" sono="" state="" eseguite="" utilizzando="" graphpad="" prism="" versione="" 6.0="" per="" windows="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="">
cistanceperrenesintomi della malattia
CHIARIMENTI
Tutti gli autori non hanno dichiarato interessi concorrenti.
RINGRAZIAMENTI
Questo studio è stato sostenuto in parte dalla sovvenzione JSPS KAKENHI n. 18K08252 e dal progetto di ricerca pratica per le malattie renali dell'Agenzia giapponese per la ricerca e lo sviluppo medico, AMED. JN e BAJ sono stati supportati in parte dalle sovvenzioni DK078244 e DK082753 del National Institutes of Health. Ringraziamo la Sig.ra Terumi Shibata per la sua eccellente assistenza tecnica. Ringraziamo anche la signora Takako Ikegami e la signora Tomomi Ikeda (Divisione di ricerca molecolare e biochimica, Juntendo University Graduate School of Medicine) e la signora Tamami Sakanishi (Division of Cell Biology, Juntendo University Graduate School of Medicine) per l'eccellente assistenza tecnica .
MATERIALE SUPPLEMENTARE
File supplementare (PDF)
Figura S1. Le cellule B e le cellule dendritiche (DC) attivate da CpG-oligodeossinucleotide (ODN) migliorano ulteriormente la produzione di IgA. I linfociti B e le DC sono stati isolati dalla milza dei topi ddY. La stimolazione CpG-ODN ha aumentato la produzione di IgA nei linfociti B isolati. Questo aumento è stato ulteriormente rafforzato dalla co-coltura di cellule B con DC. *P < 0.05.="" i="" metodi="" dettagliati="" sono="" forniti="" nei="" metodi="" supplementari.="" metodi="">
RIFERIMENTI
1. Myette JR, Kano T, Suzuki H, et al. Un anticorpo mirato al ligando che induce la proliferazione (APRIL) è un trattamento sicuro ed efficace della nefropatia murina da IgA. Rene int. 2019;96:104–116.
2. Levy M, Berger J. Prospettiva mondiale della nefropatia da IgA. Sono J Kidney Dis. 1988;12:340–347.
3. D'Amico G. La glomerulonefrite più comune al mondo: la nefropatia da IgA. QJ Med. 1987;64:709–727.
4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE, et al. Studio sequenziale del sistema IgA nella nefropatia da IgA recidivante. Rene int. 1986;30:924–931.
5. Wyatt RJ, Julian BA. Nefropatia da IgA. N inglese J Med. 2013;368:2402–2414.
6. Suzuki H, Yasutake J, Makita Y, et al. La nefropatia da IgA e la vasculite da IgA con nefrite hanno una caratteristica condivisa che coinvolge la patogenesi orientata alle IgA carenti di galattosio1-. Rene int. 2018;93:700–705.
7. Glasso RJ. Analisi dell'attività anticorpale nella nefropatia da IgA. JClin Invest. 2009;119:1450–1452.
8. Moldoveanu Z, Wyatt RJ, Lee JY, et al. I pazienti con nefropatia da IgA hanno livelli sierici di IgA1 carenti di galattosio aumentati. Rene int. 2007;71: 1148–1154.
9. Suzuki H, Moldoveanu Z, Hall S, et al. Le linee cellulari che secernono IgA1- da pazienti con nefropatia da IgA producono IgA1 glicosilata in modo anomalo. JClin Invest. 2008;118:629–639.
10. Imai H, Nakamoto Y, Asakura K, et al. Deposizione spontanea di IgA glomerulare nei topi ddY: un modello animale di nefrite da IgA. Rene int. 1985;27:756–761.
11. Okazaki K, Suzuki Y, Otsuji M, et al. Sviluppo di un modello di nefropatia da IgA ad esordio precoce. J Am Soc Nephrol. 2012;23:1364–1374.
12. Nishie T, Miyaishi O, Azuma H, et al. Sviluppo dell'immunoglobulina A, una malattia simile alla nefropatia in topi carenti di beta-1,4-galattosiltransferasi I. Sono J Pathol. 2007;170:447–456.
13. Suzuki H, Suzuki Y, Yamanaka T, et al. La scansione dell'intero genoma in un nuovo modello di nefropatia IgA identifica un locus di suscettibilità sul cromosoma 10 murino, in una regione sintenica all'IGAN1 umano sul cromosoma 6q22-23. J Am Soc Nephrol. 2005;16:1289–1299.
14. Takei T, Iida A, Nitta K, et al. Associazione tra polimorfismi a singolo nucleotide nei geni selectina e nefropatia da immunoglobulina A. Sono J Hum Genet. 2002;70:781–786.
15. Gharavi AG, Yan Y, Scolari F, et al. La nefropatia da IgA, la causa più comune di glomerulonefrite, è legata a 6q22-23. Nat Genet. 2000;26:354–357.
16. Suzuki H, Suzuki Y, Narita I, et al. Il recettore toll-like 9 influenza la gravità della nefropatia da IgA. J Am Soc Nephrol. 2008;19:2384–2395.
17. Nakata J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Cambiamenti nelle IgA1 carenti di galattosio nel siero nefritogeno nella nefropatia da IgA dopo tonsillectomia e terapia steroidea. PLoS uno. 2014;9:e89707.
18. Sato D, Suzuki Y, Kano T, et al. Espressione tonsillare TLR9 ed efficacia della tonsillectomia con terapia pulsata steroidea in pazienti con nefropatia da IgA. Trapianto di quadrante di nefrolo. 2012;27:1090–1097.
19. Coppo R, Camilla R, Amore A, et al. Le espressioni del recettore Toll-like 4 sono aumentate nelle cellule mononucleate circolanti di pazienti con nefropatia da immunoglobuline A. Clin Exp Immunol. 2010;159:73–81.
20. Maiguma M, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Lo zinco alimentare è un modificatore ambientale chiave nella progressione della nefropatia da IgA. PLoS uno. 2014;9: e90558.
21. Kawai T, Akira S. Segnalazione a NF-kappaB da parte dei recettori Toll-like. Tendenze Mol Med. 2007;13:460–469.
22. Kuwata H, Matsumoto M, Atarashi K, et al. IkappaBNS inibisce l'induzione di un sottoinsieme di geni dipendenti dal recettore Toll-like e limita l'infiammazione. Immunità. 2006;24:41–51.
23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G, et al. Squilibri nelle citochine proinfiammatorie sieriche e nei loro recettori solubili: un ruolo presunto nella progressione della nefropatia idiopatica da IgA (IgAN) e della nefrite da porpora di Henoch Schönlein e un potenziale bersaglio della terapia con immunoglobuline? Clin Exp Immunol. 1998;114:468–476.
24. Suzuki H, Raska M, Yamada K, et al. Le citochine alterano la glicosilazione O-IgA1 disregolando gli enzimi C1GalT1 e ST6GalNAc-II. J Biol Chem. 2014;289:5330–5339.
25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M, et al. L'inibizione della segnalazione di STAT3 riduce la produzione di autoantigene IgA1 nella nefropatia da IgA. Rene Int. Rep. 2017;2:1194–1207.
26. Schneider P, MacKay F, Steiner V, et al. BAFF, un nuovo ligando della famiglia dei fattori di necrosi tumorale, stimola la crescita delle cellule B. J Exp Med. 1999;189: 1747–1756.
27. Kiryluk K, Li Y, Scolari F, et al. La scoperta di nuovi loci di rischio per la nefropatia da IgA implica geni coinvolti nell'immunità contro i patogeni intestinali. Nat Genet. 2014;46:1187–1196.
28. Han SS, Yang SH, Choi M, et al. Il ruolo del membro della superfamiglia del TNF 13 nella progressione della nefropatia da IgA. J Am Soc Nephrol. 2016;27:3430– 3439.
29. Hiki Y, Odani H, Takahashi M, et al. La spettrometria di massa dimostra la glicosilazione sotto-O di IgA1 glomerulare nella nefropatia da IgA. Rene int. 2001;59: 1077–1085.
30. Allen AC, Bailey EM, Brenchley PE, et al. L'IgA1 mesangiale nella nefropatia da IgA mostra una aberrante O-glicosilazione: osservazioni in tre pazienti. Rene int. 2001;60:969–973.
31. Hiki Y. Oligosaccaridi legati all'O della regione della cerniera IgA1: ruoli della sua struttura aberrante nell'insorgenza e/o nella progressione della nefropatia da IgA. Clin Exp Nephrol. 2009;13:415–423.
32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z, et al. Ruolo della glicosilazione aberrante delle molecole di IgA1 nella patogenesi della nefropatia da IgA. Rene Blood Press Res. 2008;31:29–37.
33. McCarthy DD, Kujawa J, Wilson C, et al. I topi che sovraesprimono BAFF sviluppano una nefropatia commensale flflora-dipendente, associata a IgA. JClin Invest. 2011;121:3991–4002.
34. Muto M, Manfroi B, Suzuki H, et al. La stimolazione del recettore 9 toll-like induce l'espressione aberrante di un ligando che induce la proliferazione da parte delle cellule B del centro germinale tonsillare nella nefropatia da IgA. J Am Soc Nephrol. 2017;28:1227–1238.
35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A, et al. Segnali TLR9 dopo la traslocazione dall'ER al DNA CpG nel lisosoma. Immunolo naturale. 2004;5:190–198.
36. Hornung V, Rothenfusser S, Britsch S, et al. Espressione quantitativa dell'mRNA del recettore toll-like 1-10 in sottoinsiemi cellulari di cellule mononucleate del sangue periferico umano e sensibilità agli oligodeossinucleotidi CpG. J Immunol. 2002;168:4531–4537.
37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S, et al. Sottoinsiemi di precursori di cellule dendritiche umane esprimono diversi recettori toll-like e rispondono a diversi antigeni microbici. J Exp Med. 2001;194:863–{5}}.
38. He B, Xu W, Santini PA, et al. I batteri intestinali attivano il passaggio di classe dell'immunoglobulina A(2) indipendente dalle cellule T inducendo la secrezione di cellule epiteliali della citochina APRILE. Immunità. 2007;26:812–826.
39. Mackay F, Schneider P. Cracking del codice BAFF. Nat Rev Immunol. 2009;9: 491–502.
40. Kunimoto DY, Nordan RP, Strober W. IL-6 è un potente cofattore di IL-1 nella sintesi di IgM e di IL-5 nella sintesi di IgA. J Immunol. 1989;143:2230–2235.
41. Beagley KW, Eldridge JH, Lee F, et al. Sintesi di interleuchine e IgA. L'interleuchina 6 umana e murina induce la secrezione di IgA ad alta velocità nelle cellule B impegnate con IgA. J Exp Med. 1989;169:2133–2148.
42. Ramsay AJ, Marito AJ, Ramshaw IA, et al. Il ruolo dell'interleuchina-6 nelle risposte degli anticorpi IgA della mucosa in vivo. Scienza. 1994;264:561–563.
43. Nurieva RI, Chung Y, Martinez GJ, et al. Bcl6 media lo sviluppo delle cellule T helper follicolari. Scienza. 2009;325:1001–1005.
44. Poholek AC, Hansen K, Hernandez SG, et al. Regolazione in vivo dello sviluppo delle cellule helper follicolari Bcl6 e T. J Immunol. 2010;185: 313–326.
45. Jain S, Park G, Sproule TJ, et al. L'interleuchina 6 accelera la mortalità favorendo la progressione della malattia simil-lupus eritematoso sistemico dei topi BXSB.Yaa. PLoS uno. 2016;11:e0153059.
46. Litinskiy MB, Nardelli B, Hilbert DM, et al. Le DC inducono il passaggio della classe di immunoglobuline CD40-indipendente tramite BLyS e APRIL. Immunolo naturale. 2002;3:822–829.
47. Castigli E, Wilson SA, Scott S, et al. TACI e BAFF-R mediano la commutazione dell'isotipo nei linfociti B. J Exp Med. 2005;201:35–39.
48. Jourdan M, Chen M, Robert N, et al. IL-6 supporta la generazione di plasmacellule umane a vita lunga in combinazione con APRIL o fattori solubili nelle cellule stromali. Leucemia. 2014;28:1647–1656.
49. Chu VT, Fröhlich A, Steinhauser G, et al. Gli eosinofili sono necessari per il mantenimento delle plasmacellule nel midollo osseo. Immunolo naturale. 2011;12: 151–159.
50. Suzuki H, Suzuki Y, Aizawa M, et al. Polarizzazione Th1 nella nefropatia murina da IgA diretta da cellule derivate dal midollo osseo. Rene int. 2007;72: 319–327.
51. Chintalacharuvu SR, Emancipatore SN. La glicosilazione delle IgA prodotte dai linfociti B murini è alterata dalle citochine Th2. J Immunol. 1997;159:2327–2333.
52. Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Nuovo approccio indipendente dalla lectina per rilevare IgA1 carenti di galattosio nella nefropatia da IgA. Trapianto di quadrante di nefrolo. 2015;30:1315–1321.
53. Katafuchi R, Kiyoshi Y, Oh Y, et al. Punteggio glomerulare come prognosticatore nella nefropatia da IgA: sua utilità e limitazione. Clin Nephrol. 1998;49:1–8.
54. Ballardie FW, Roberts IS. Studio prospettico controllato di prednisolone e citotossici nella nefropatia progressiva da IgA. J Am Soc Nephrol. 2002;13: 142–148.
