Nuovi glicosidi da Cistanche Salsa

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Li Lei^a, Yong Jiang^aet al

Sei nuoviglicosidi, i lati della salsa A – F (1–6, risp.), sono stati isolati dai gambi diCistanche salsa, insieme a sette composti glicosidici noti. Le loro strutture sono state chiarite mediante idrolisi degli esteri e derivatizzazione chimica, analisi spettroscopiche NMR approfondite e spettrometriche di massa e confrontandole con i dati della letteratura di composti correlati. Il nuovoglicosidisono a base di bD-glucosio (Glc) e al-ramnosio (Rha), che trasportano sostituenti acetile (Ac), benzile (Bn), fenetile, cumaroile (Cou) e caffeoile (Caf).

La salsa Cistanche ha molti effetti

introduzione

– Cistanche salsa(CA MEY.) G. BECK, una delle specie di HerbaCistanche, è una piccola pianta parassitaria delle Orobanchaceae originaria della Cina nord-occidentale. Come importante tonico nella medicina tradizionale cinese (MTC), i gambi di Herba Cistanche sono stati a lungo utilizzati da cinesi e giapponesi contro la carenza renale, l'infertilità femminile, la leucorrea morbosa, la nevrastenia e la stitichezza senile dovuta all'inerzia del colon, ecc. [1 ]. Proprio come in altre piante di Cistanche, a base fenetileglicosidisono i principali costituenti attivi di C. salsa. È stato segnalato che questi composti hanno attività neuroprotettiva contro la tossicità dopaminergica indotta da 1-metil-4-fenil-1,2,3,{5}}tetraidropiridina (MPTP) nei topi C57 [{{ 8}}]. Ci sono solo pochi studi fitochimici riguardanti C. salsa, i primi risalgono a ca. 20 anni [5-8]. Nel 1995 Moriya et al. [9] [10] hanno riferito che il materiale vegetale diCistanche salsaera stato identificato falsamente quando ha indagato sulle fonti di HerbaCistancheda un mercato medico giapponese [9] [10]. Pertanto, è necessario riesaminare i costituenti chimici di C. salsa.

Nel presente lavoro suCistanche salsa, riportiamo l'isolamento e la delucidazione della struttura di sei nuoviglicosidi, salsa lati AF (1-6), con diversi sostituenti, inclusi residui di acetile (Ac), benzile (Bn), caffeoile (Caf) e cumaroile (Cou). Dallo stesso estratto erano anche isolati i seguenti sette notiglicosidi:tubuloside B [11], acteoside [6], isoacteoside [11], 2'-acetylacteoside [7], echinacoside [6], cistanoside C [7] e cistanoside D [7].

Risultati e discussione

– Il composto 1 è stato isolato come polvere amorfa e la sua formula molecolare è stata dedotta come C28H34O13 da HR-ESI-MS (m/z 596.2348([M più NH4] più ; calc. 596.2343). I dati 1 H-NMR di 1 (Tabella 1) mostravano segnali caratteristici di un gruppo caffeoile (Caf) configurato (E), con segnali aromatici di tipo ABX a d(H) 7.07 (br. s), 6.76 (br. d, J=8.5 Hz) e 7.03 (d, J=8.5 Hz), due atomi H olefinici a d (H) 7,51 (d, J=16.0) e 6,34 (d, J=16.0 Hz) e una frazione Bn con cinque risonanze aromatiche e due atomi H non equivalenti a d(H) 4,59, 4,77 (2d, J{34}},0 Hz ciascuno), il che suggeriva che 1 fosse un composto Bn-sostituito [12].

L'idrolisi acida totale di 1 ha fornito ramnosio (Rha) e glucosio (Glc). I dati NMR di 1 erano simili a quelli del tubuloside B [11], tranne per il fatto che i segnali di un'unità 3,4-diidrossifeniletanolo sono stati sostituiti da quelli di un gruppo Bn. Nello spettro HMBC di 1, correlazioni tra i due atomi H non equivalenti a d(H) 4,59, 4,77 (a-CH2 di aglicone) e d(C) 101,7 (C(1') di Glc), di entrambi d(H ) 4,40 (br. d, J=11.5 Hz, 1 H di CH2(6')) e 4,23 (m, 1 H di C H2(6')) con d(C) 166,6 (C( a') di estere), e di d(H) 5.04 (br. s, HC(1'')) e d(C) 80.8 (C(3' )) stabilirono i legami tra l'aglicone, l'estere e lo zucchero frazioni.

Cistanche salsa

Sulla base dell'evidenza spettroscopica di cui sopra, in combinazione con i dati 2D-NMR, la struttura di 1 è stata chiarita come benzile 6-O-[(E)-3-(3,{7}}diidrossi fenil)-prop-2-enoil]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glucopiranoside1) e denominato lato salsa A.

Il composto 2 è stato isolato come polvere amorfa e la sua formula molecolare è stata determinata come C28H34O13 mediante HR-ESI-MS (m/z 596,2345 ([M più NH4] più)). L'unica differenza tra 1 e 2 era che la parte Caf era attaccata in posizione 4' in posizione 2 invece che in posizione 6'. Ciò era evidente nello spettro HMBC di 2, dove il segnale a d(H) 4,96 (t, J=9.0 Hz, HC(4' )) era correlato con d(C) 167,3 ( C=O di Caf), e ulteriormente corroborato dal confronto con i dati NMR del 2'-acetilacteoside [4]. Pertanto, il composto2 è stato identificato come benzile 4-O-[(E)-3-(3,4-diidrossifenil)prop-2-enoil]-3-Oa-Lrhamnopiranosile -bD-glucopiranoside e denominato salsa lato B.

La salsaside C(3) è stata isolata come polvere amorfa e la sua formula molecolare è stata chiarita come C28H34O12 da HR-ESI-MS (m/z 561.1958 ([MH]; calc.561.1972)). I dati NMR di 3 erano simili a quelli di 2, tranne per il fatto che i segnali del gruppo Caf sono stati sostituiti da quelli di una frazione (E/Z)-cumaroile (Cou) (vedi tabella 1). La presenza di una miscela (E/Z) come indicato dalle risonanze NMR split (2.38: 1) nonché dal raddoppio del picco nel cromatogramma HPLC, un fenomeno riportato in precedenza in alcuni fenetileglicosidi[13] [14]. Nello spettro HMBC di 3, correlazioni tra le due risonanze di aglicone a-CH2 non equivalenti a d(H)4,62, 4,87 (2d, J{{1{25}}}},5 Hz ciascuna) e d(C) 103,2 ( C(1')), tra d(H) 4,75/4,71 (t, J=7,5 Hz, HC(4' )) e d(C) 168,3/166,0 (C=O di Cou), e tra d(H) 5,02 (br. s, HC(1'')) e d(C) 80,8 (C(3' )) stabilirono i legami tra l'aglicone, l'estere e le frazioni di zucchero . Pertanto, la struttura del composto 3 è stata chiarita come benzile 4-O-[(E/Z)-3-(4-idrossifenil)prop-2-enoile]-3- OaL-rhamnopyranosyl-b-Dglucopyranoside e chiamato salsa side C.

La salsaside D (4) è stata ottenuta come polvere amorfa e la sua formula molecolare è stata determinata come C31H38O15 mediante HR-ESI-MS (m/z 668,2563 ([M più NH4] più ; calc.668,2554). Lo spettro 1H-NMR di 4 (Tabella 2) mostrava segnali caratteristici di un gruppo (E)-Caf e di un gruppo (4-idrossifenil)etossi [d(H) 2,65 (m, 2 H), 3,55 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 6,64 (d, J=8.0 Hz, 2 H), 6,97 (d, J=8.{{58} } Hz, 2 H)]. L'idrolisi acida totale di 4 ha fornito Rha e Glc. Il picco ionico del frammento osservato nello spettro di massa FAB negativo a m/z 43 e i segnali NMR a d(H) 1,95 (s, 3 H ), e in d(C) 169.3 e 20.7, indicava la presenza di un gruppo Ac. I dati 1H- e 13C-NMR erano molto simili a quelli della siringalide A 3'-aL-rhamnopyranoside, ad eccezione di un segnale Ac aggiuntivo [ 15]. Nello spettro HMBC di 4, il segnale a d(H) 4,68 (t, J{57}}.0 Hz, HC(2')) era correlato con d(C) 169,3 (C{{62} }O di Ac), che indicava che la parte Ac era collegata a C(2) di Glc. Pertanto, la struttura e del composto 4 è stato chiarito come 2-(4-idrossifenil)etile 2-O-acetile-4-O-[(E)-3-(3,{{ 73}}diidrossi fenil)prop-2- enoil]-3-Oa-ramnopiranosil-bD-glucopiranoside e denominato salsa lato D.

Il contenuto diCistanche salsa

Il composto 5 è stato isolato come polvere amorfa e la sua formula molecolare è stata determinata come C32H40O16 mediante HR-ESI-MS (m/z 679.2228 ([MH]; calc. 679.2238). L'1H- e 13C- I dati NMR di 5 (Tabella 2) erano molto simili a quelli di 4, ad eccezione dei segnali della frazione fenetile. Nello spettro 1H-NMR di 5, c'era un sistema AMX [d(H) 6,63 (d, J{ {22}}.0 Hz, 1 H), 6,69 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 6,77 (br. s, 1 H)] e un Segnale MeO a d(H) 3,85 (s, 3 H). Nello spettro HMBC, il segnale MeO era correlato con d(C) 148,7 (C(3)), che, a sua volta, correlava con d(H) 6,69 ( d, J=8.0 Hz, HC(5)) e 6,77 (br. s, HC(2)). Pertanto, il sostituente MeO era a C(3) della parte fenetile, come confermato dal confronto con i dati della letteratura [7].Quindi, la struttura del composto 5 è stata chiarita come 2-(4-idrossi-3-metossifenil)etil2-O-acetile{55}} O-[(E)-3-(3,4-diidrossi fenil)prop-2-enoil]-3-OaL-ramnopiranosil-bD-glucopiranoside e lato salsa E.

Il composto 6 è stato isolato come polvere amorfa e la sua formula molecolare è stata determinata come C31H38O15 mediante HR-ESI-MS (m/z 668,2543 ([M più NH4] più ; calc. 668,2554)). Lo spettro 1H-NMR di 6 ha mostrato segnali caratteristici di un gruppo (E)-Cou [d(H)6,35 e 7,46 (2d, J{{20}}.0 Hz ciascuno, 1 H ciascuno), 6,69 (d, J=7,5 Hz, 2 H), 7,45 (d, J{{30}},5 Hz, 2 H)], di un (3,4-diidrossifenile) frazione etossica [d(H) 6,31 (br. d, J{37}}.0 Hz, 1 H), 6,46 (br. s, 1 H), 6,49 (br. d, J=8. 0 Hz, 1 H), 2,49 (m,CH2), 3,41 e 3,72 (2m, 1H ciascuno)], e di due risonanze anomeriche [d(H) 4,45 (d, J=8.5 Hz, HC (1')), 4.55 (be. s, HC(1''))]. Come in 4 e 5, c'era anche un gruppo AcO presente in 6 [d(H) 1,88 (s, 3 H); d(C) 169.2, 20.6], che era in C(2') della frazione Glc, come determinato da HMBCexperiments. Nello spettro HMBC sono state osservate correlazioni tra i segnali di CH2(6') e d(C) 166,6 (C=O di Cou), tra d(H) 3,41, 3,72 (2 m, a-CH2 di aglicone ), e d(C) 99,5 (C(1')), e tra d(H) 4,55 (br. s, HC(1'')) e d(C) 68,8 (C(3')), da cui sono stati stabiliti tutti i collegamenti. Pertanto, la struttura del composto 6 è stata determinata come 2-(3,4-diidrossi fenil) etile 2-O-acetile-6-O-[(E){{105} }(4-idrossifenil)prop-2-enoil]-3-OaL-rhamnopyranosyl-bD-glucopiranoside e denominato lato salsa F.

Nei composti 1–6, la configurazione al centro anomerico del residuo Glc è stata dedotta essere b da valori J di 7,5 – 8,5 Hz. Nel caso dei residui di Rha, la configurazione anomerica è stata derivata confrontando i dati relativi al 13C-NMR con quelli forniti in letteratura [6]. Le configurazioni assolute degli zuccheri, DGlc e L-Rha, sono state determinate mediante analisi GC di derivati ​​chirali (vedi Exper. Part) rispetto ai monosaccaridi standard [16].

Questo studio è stato finanziato dal National Natural Science Funds of China (n. 30070887). Ringraziamo gentilmente il dottor Haiming Shi per l'aiuto durante la preparazione del manoscritto.

Cistanche salsaprodotti

Parte sperimentale

Generale. Gel di silice (200–300 mesh; Qing Dao Hai Yang Chemical Group, Co.), Sephadex LH-20 (Pharmacia), resina D101 (Tianjin Chemical, Co.) e ODS (100 – 200 mesh; Fuji Sylisia Chemical, Ltd.) sono state utilizzate per la cromatografia su colonna (CC). Prepara. L'HPLC è stata eseguita su uno strumento Waters-600, utilizzando una colonna RP-C18 (10 M 250 mm id; Alltech) a una portata di 2,5 ml/min (rilevamento UV a 330 nm). L'analisi GC è stata eseguita su un gascromatografo Agilent-6890N, utilizzando una colonna capillare HP-5 (28 m M 0,32 mm d.i.), un rivelatore FID a 260 gradi e una colonna temp. di 180 gradi, con un gas di trasporto N2 e una portata di 40 ml/min. Gli spettri UV sono stati registrati su uno spettrometro Shimadzu; λmax (log e) in nm. Le rotazioni ottiche sono state determinate su un polarimetro digitale Perkin-Elmer 243B. Gli spettri IR sono stati registrati su uno spettrometro FT-IR Nicolet Avatar-360; in cm-1. Gli spettri NMR sono stati registrati in CD3OD o (D6)DMSO su uno spettrometro Bruker AM-500; d in ppm rel. a Me4Si, J in Hz. Gli spettri di massa FAB e HR-ESI sono stati registrati su spettrometri di massa KYKY-ZHP-5 e Bruker APEX, risp.

Materiale vegetale. Gli steli diCistanche salsasono stati raccolti da Yanchi, nella regione autonoma di Ningxia Hui, in Cina, ad aprile. La pianta è stata identificata dal Prof. Peng-Fei Tu, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University. Un esemplare di voucher è stato depositato presso l'Erbario del Centro di ricerca moderna per la medicina tradizionale cinese dell'Università di Pechino.

Estrazione e isolamento. Gli steli essiccati diCistanche salsa(8.0 kg) sono stati estratti con il 75 percento aq. EtOH (80l) a rt per percolazione. Il solvente è stato rimosso, il residuo è stato sospeso in H2O (4 l) ed estratto con etere di petrolio (PE; 12 l), AcOEt (12 l) e BuOH (12 l) per ottenere, dopo la rimozione del solvente, 1{{ 27}}0 g di PE-, 99 g di AcOEt- e 1{{60}}0 g di estratto solubile BuOH, risp. Parte dell'estratto solubile in AcOEt (90 g) è stata sottoposta a CC (SiO2; CHCl3/MeOH 0: 1→1: 2) per ottenere 75 frazioni (Fr.). Fr. 51 – 53 (6,0 g) sono stati combinati (=Fr. A) e ricromatografati (Sephadex LH-20; MeOH/H2O 1: 1) per ottenere undici sottofrazioni (Fr. A1 –A11). Fr. A6 e p. A7 sono stati combinati (2,5 g; Fr. B) e nuovamente sottoposti a CC (ODS; MeOH/H2O 1: 9 – 5: 5) per fornire 35 ulteriori frazioni (Fr. B1 – B35). Fr. B16 – B25 sono stati combinati (0,5 g; Fr. C) e ricromatografati (Sephadex LH-20; quindi preparare HPLC, MeCN/MeOH/H2O 10 : 18 : 75) per fornire tubuloside B [11] (55 mg ). Fr. B26 – B32 (0,35 g) sono stati combinati (0,35 g, Fr. D) e ricromatografati (Sephadex LH-20; 20 percento aq. MeOH) per produrre sette frazioni (Fr. D1 –D7). Fr. D1 (70 mg) è stato purificato mediante preparazione. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 10: 26: 72) per fornire 2 (23 mg), 3 (8 mg) e cistanoside C [7] (12 mg). Fr. D3 (45 mg) è stato purificato mediante preparazione. HPLC (MeCN/MeOH/H2O 10 : 20 : 70) per fornire 6 (22 mg). Fr. D4 (36 mg) è stato purificato mediante preparazione. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 9 : 18 : 73) per fornire 5 (20 mg). Fr.D5 (55 mg) è stato purificato mediante preparazione. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 10: 24: 66) per fornire 1 (28 mg). Fr. D7 (40 mg) è stato purificato mediante preparazione. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 10 : 16 : 74) per fornire 4 (18 mg). L'originale Fr.54 e Fr. 55 sono stati combinati e purificati mediante CC ripetuta (Sephadex LH-20) per ottenere acteoside [6] (0,1 g) e 2'-acetilacteoside (8,9 mg) [10]. Fr. 56 – 58 sono stati combinati e purificati mediante CC ripetuta (Sephadex LH-20 e ODS) per fornire isoacteoside (25 mg) [11] e cistanoside D (32 mg) [7]. Fr. 59 – 64 sono stati combinati e purificati mediante CC ripetuta (Sephadex LH-20) e prep. HPLC(MeCN/MeOH/H2O 10: 15: 84) per fornire echinacoside (33 mg) [6].

SalsasideA(=Benzile6-O-[(E)-3-(3,4-Diidrossifenil)prop-2-enoile]-3-OaL-ramnopiranosilb -D-glucopiranoside; 1). Polvere amorfa. UV (MeOH): 328 (3,50). [a]20D=35.6 (c=0.1, MeOH).IR (KBr): 3421, 1690, 1628, 1605, 1520. 1H- e 13C-NMR: vedere la tabella 1. FAB-MS: 577 ([MH]-). HRESI-MS: 596.2348 ([M più NH4] più , C28H38NO più 13 ; calc. 596.2343).

SalsasideB(=Benzile4-O-[(E)-3-(3,4-Diidrossifenil)prop-2-enoile]-3-OaL-ramnopiranosilb -D-glucopiranoside; 2). Polvere amorfa. UV (MeOH): 332 (3,20). [a] 20D=35.6 (c=0.1, MeOH).IR (KBr): 3411, 1692, 1630, 1600, 1514. 1H- e 13C-NMR: vedere Tabella 1. HR-ESI-MS: 596.2345([M più NH4] più , C28H38NO più 13 ; calc. 596.2343).

SalsasideC(=4-O-[(E/Z)-3-(4-Idrossifenil)prop-2-enoil]-3-OaL-ramnopiranosil-bD-glucopiranoside; 3 ). Polvere amorfa. UV (MeOH): 315 (3,23), 225 (1,80). IR (KBr): 3432, 1689, 1628,1609, 1519. 1H- e 13C-NMR: vedere la tabella 1. HR-ESI-MS: 561.1958 (([MH]-), C28H33O-12 ; calc. 561.1972).

SalsasideD(=2-(4-Idrossifenil)etile2-O-acetile-4-O-[(E)-3-(3,4-diidrossifenile) prop-2-enoil]-3-OaL-ramnopiranosil-bD-glucopiranoside;4). Polvere amorfa. UV (MeOH): 328(3,40). [a]20D=58.3 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3397, 1720, 1692, 1630, 1596, 1512. 1 H- e 13C-NMR: vedere la tabella 2. FAB-MS: 649 ([MH]-), 443 ([MH-Ac-Caf] -). HR-ESI-MS: 668.2563 ([M più NH4] più , C31H42NOþ 15 ; calc. 668.2554).

SalsasideE(=2-(4-Idrossi-3-metossifenil)etile2-O-acetile-4-O-[(E)-3-(3,{ {9}}diidrossifenil)-prop-2-enoil]-3-OaL-ramnopiranosil-bD-glucopiranoside;5). Polvere amorfa. UV (MeOH): 330 (3,21). [a]20D=33.3 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3370, 1721, 1690, 1630, 1600, 1514. 1H- e 13CNMR: vedere la tabella 2. FAB-MS: 679 ([MH]-), 533 [MH-Rha]-). HR-ESI-MS: 679.2228 ([MH]- , C32H39O-16; calc. 679.2238).

SalsasideF(=2-(3,4-Diidrossifenil)etil2-O-acetil-6-O-[(E)-3-(4-idrossifenile) prop-2-enoil]-3-OaL-ramnopiranosil-bD-glucopiranoside; 6). Polvere amorfa. UV (MeOH): 315(3,28). [a]20D=38.5 (c=0.1, MeOH). IR (KBr): 3416, 1725, 1690, 1630, 1600, 1510. 1H- e 13C-NMR: vedere la tabella 2. FAB-MS: 649 ([MH]-). HR-ESI-MS: 668.2543 ([M più NH4] più , C31H42NO più 15 ; calc. 668.2554).

Idrolisi acida e determinazione della configurazione assoluta dello zucchero. Il composto (3 mg) è stato posto in una provetta sigillata e idrolizzato con 2N aq. CF3COOH (5 ml) riscaldando a bagnomaria per 3 h [16]. Dopo raffreddamento, la miscela è stata diluita con H2O (15 ml) ed estratta con CHCl2 (3 M 5 ml). L'aq. lo strato è stato ripetutamente evaporato a secco con MeOH, fino a neutralità. Gli zuccheri sono stati identificati mediante co-TLC con campioni autentici, eluendo con BuOH/AcOH/H2O 4 : 2: 1, e rilevati spruzzando con anisaldeide/H2SO4, seguito da riscaldamento. I valori Rf di glucosio (Glc) e ramnosio (Rha) erano 0.54 e 0.69, risp.

Gli addominali. le configurazioni dello zucchero sono state determinate come segue. A un sole. del residuo zuccherino in piridina (60 ml), ottenuto dall'idrolisi, sono stati aggiunti L-cisteina metil estere cloridrato ed esametildisilazano/Me3SiCl 3: 1. La miscela è stata agitata a 608 per 30 min. Il precipitato risultante è stato rimosso mediante centrifugazione e il surnatante è stato concentrato e ripartito tra esano e H2O. L'org. lo strato è stato quindi analizzato mediante GC. Rispetto ai monosaccaridi standard, D-Glc (tR 12,45 min) e L-Rha (5,32 min) sono stati identificati per 1–6.

Cistanche salsaestratto

Da: ' NuovoGlicosididaCistanche salsa' di Li Lei^a, Yong Jiang^ae altri ---2007 Verlag Helvetica Chimica Acta AG, Zurigo

--- Helvetica Chimica Acta – Vol. 90 (2007)

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