Parte Ⅱ: I glicosidi feniletanoidi di Cistanche Tubulosa inducono l'apoptosi delle cellule di carcinoma epatocellulare per via mitocondriale e MAPK e migliorano l'effetto antitumorale attraverso la combinazione con il cisplatino

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abbiamo ulteriormente valutato l'effetto immunostimolante del CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) sui topi. Dopo iniezione ip, iniezione sc e somministrazione ig di CTPG (200 e 400 mg/kg), non vi è stato alcun cambiamento significativo nello stato dei topi rispetto al gruppo non trattato. Anche il peso corporeo dei topi non presentava differenze significative tra i gruppi trattati con CTPG e i gruppi non trattati (Figura 7A). Gli indici di cuore, fegato, milza, polmone, rene e timo dei topi erano simili tra tutti i gruppi tranne gli indici della milza dei topi nel gruppo di iniezione ip di 400 mg/kg di CTPG (Tabella 1). I risultati hanno suggerito che le dosi selezionate di CTPG non avevano effetti collaterali nei topi. La milza è un importante organo di difesa immunitaria nei mammiferi e il suo sviluppo influisce direttamente sulla funzione immunitaria dell'individuo e sulla capacità di resistere alle malattie. L'indice dell'organo immunitario riflette lo sviluppo e la funzione immunitaria degli organi immunitari. La milza contiene una varietà di cellule immunitarie, tra cui cellule T, cellule B, cellule natural killer (cellule NK), macrofagi, cellule dendritiche (DC) e altre, che svolgono un ruolo importante nel sistema immunitario.30 È stato riportato che i polisaccaridi possono aumentare il numero di cellule immunitarie per migliorare quello del corpoimmunità.31 Poiché l'iniezione ip di CTPG ha aumentato significativamente l'indice della milza (aumento di 0.55 volte), abbiamo ulteriormente analizzato il numero di varie cellule immunitarie nella milza. I risultati hanno mostrato che l'iniezione ip di CTPG ha aumentato significativamente il numero di cellule T (CD3 più cellule CD19-) (aumento di 0.49 volte), cellule B (cellule CD3-CD19 più) (aumento di 0 .49 volte) e cellule NK (CD3-CD19-CD49b più cellule) (aumentate di 1,63 volte) rispetto al gruppo non trattato. Le cellule T CD4 plus e CD8 plus, in quanto principali sottotipi di cellule T, svolgono un ruolo importante nella risposta immunitaria cellulare antigene-specifica.32 Pertanto, abbiamo ulteriormente analizzato il numero e lo stato di attivazione delle cellule T CD4 plus e CD8 plus nel milza. I risultati hanno indicato che l'iniezione ip di CTPG non solo ha aumentato significativamente il numero di cellule T CD4 plus e CD8 plus (aumentato di 0.55 e 0.34 volte, rispettivamente), ma ha anche migliorato lo stato di attivazione di Cellule T CD4 più (cellule CD4 più CD44 più) (aumentate 0.84 volte) (Figura 7B), questi risultati suggeriscono che CTPG aveva una funzione di potenziamento immunitario.

La combinazione di CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) e il cisplatino hanno mostrato un potente effetto antitumorale sul modello murino del tumore H22

È generalmente accettato che la chemioterapia o la radioterapia possano portare a una prognosi sfavorevole e indurre numerosi eventi avversi, che possono essere dovuti alla soppressione del sistema immunitario e al danneggiamento di tessuti e organi normali. I polisaccaridi della MTC hanno effetti di potenziamento immunitario e alleviano il danno degli organi immunitari e delle cellule immunitarie causato dalla chemioterapia, ad esempio il chitosano33 e i polisaccaridi Lycium barbarum.34 Il risultato sopra ha mostrato che il CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) potrebbe migliorare gli effetti collaterali del cisplatino sul sistema immunitario. Pertanto, l'effetto antitumorale del CTPG combinato con il cisplatino è stato valutato nel modello murino del tumore H22. Come mostrato nella Figura 8A, il solo CTPG, il solo cisplatino e la combinazione di CTPG e cisplatino (CTPG più cisplatino) hanno significativamente soppresso la crescita del tumore H22 rispetto al gruppo di controllo. CTPG più cisplatino ha mostrato un effetto inibitorio più forte rispetto a quello del CTPG e del solo cisplatino. Al 20° giorno, i volumi del tumore nei gruppi di controllo, cisplatino da solo, CTPG da solo e CTPG più cis platino erano rispettivamente di circa 1707,8, 722,5, 1033,8 e 367,5 mm3. Lo stesso giorno, i tumori sono stati raccolti per l'osservazione visiva (Figura 8B) e il confronto del peso (Figura 8C). CTPG più cisplatino hanno mostrato effetti terapeutici migliori sul modello murino di tumore H22 rispetto a CTPG o cisplatino da soli. Il peso del tumore nel gruppo CTPG più cisplatino era inferiore a quello degli altri gruppi. Questi risultati suggeriscono che l'attività antitumorale di CTPG e cisplatino determina effetti sinergici.

Il peso corporeo dei topi è stato misurato per riflettere lo stato di salute dei topi. Il peso corporeo è notevolmente diminuito dopo il trattamento con cisplatino, suggerendo una grave tossicità sistemica indotta da cisplatino.35 In confronto, il CTPG combinato con il cisplatino ha migliorato significativamente la perdita di peso corporeo indotta dal cisplatino, mentre il CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) da solo non ha avuto effetti significativi sul peso corporeo dei topi (Figura 8D). Anche gli organi inclusi milza, cuore, fegato, polmone, rene e timo sono stati isolati per calcolare gli indici degli organi. Rispetto al gruppo non trattato, gli indici della milza erano significativamente diminuiti e aumentati rispettivamente dal cisplatino e dal CTPG. CTPG più cisplatino ha recuperato gli indici della milza rispetto al solo cisplatino. Altri indici di organi non hanno mostrato differenze significative tra tutti i gruppi (Tabella 2).CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) In combinazione con Cisplatino Enhanced theImmunitàdi topi tumorali.

I risultati di cui sopra hanno mostrato che CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) migliorato l'immunitàdi topi e ha inibito l'apoptosi degli splenociti indotta dal cisplatino. Abbiamo ulteriormente studiato se l'effetto antitumorale di CTPG più cisplatino fosse correlato a una maggiore immunità. Nel processo di insorgenza e sviluppo del tumore, il sistema immunitario del corpo svolge un'importante funzione di sorveglianza immunitaria e l'immunità cellulare mediata dai linfociti T gioca un ruolo chiave. I linfociti T CD4 più hanno la funzione di coadiuvare l'immunità cellulare e la risposta immunitaria umorale, mentre i linfociti T CD8 più sono le principali cellule effettrici di una risposta immunitaria, che possono uccidere specificamente le cellule bersaglio e svolgere un ruolo importante nell'immunità tumorale e nell'immunità antivirale.32 Le milze di topi portatori di tumore sono state raccolte per rilevare il numero di cellule T e cellule B mediante citometria a flusso. Le frequenze e il numero di cellule T comprese le cellule T CD4 plus e CD8 plus nel gruppo CTPG più cisplatino erano significativamente più elevate rispetto a quelle del controllo (aumento di 0.55 e 0.7 volte, rispettivamente) e gruppi di cisplatino (aumentati di 0,92 e 1,16 volte, rispettivamente) (Figura 9A e B). Rispetto al gruppo di controllo, anche il CTPG da solo ha in parte aumentato il numero di cellule T CD4 plus e CD8 plus sebbene non vi fosse alcuna differenza significativa. Le frequenze e il numero dei linfociti B non presentavano differenze significative tra tutti i gruppi.

Le cellule soppressorie di derivazione mieloide (MDSC) e le cellule T regolatorie (Treg) si espandono nei tumori e inibiscono le risposte immunitarie antitumorali; sopprimono l'attivazione e l'espansione delle cellule T CD4 plus, la funzione delle cellule T effettrici, l'attivazione e/o la proliferazione e la formazione di citochine delle cellule T CD4 plus e CD8 plus, la proliferazione delle cellule B e la produzione di immunoglobuline e il cambio di classe, le funzioni citotossiche delle cellule NK e natural killer T (NKT) e la funzione e la maturazione delle DC.36-38 Le frequenze e il numero di MDSC (CD11b più Gr-1 più), macrofagi (CD11b più Gr -1-) e Treg (Treg naturali: CD4 più CD25 più Foxp3 più; Treg indotte: CD4 più CD25-Foxp3 più) nella milza di topi tumorali sono stati analizzati mediante citometria a flusso. Rispetto al gruppo di controllo, le frequenze e il numero di MDSC sono diminuiti significativamente dopo l'iniezione con cisplatino da solo (diminuito di 1,56 volte) o in combinazione con CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) (diminuito 0,62 volte). Anche il numero di CD11b più Gr-1- macrofagi è diminuito in modo significativo sebbene non vi siano stati cambiamenti significativi nelle loro frequenze (Figura 9C). Inoltre, CTPG(Cistanche Tubulosa Glicosidi feniletanoidi) da solo e il trattamento con CTPG più cisplatino hanno ridotto significativamente le frequenze delle Treg indotte (diminuite {0}}.33 e 0,37 volte, rispettivamente) (Figura 9D). Questi risultati hanno suggerito che l'effetto antitumorale di CTPG più cisplatino potrebbe essere correlato con l'immunità potenziata caratterizzata dall'aumento del numero di cellule T e dal numero ridotto di MDSC e Treg.