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Discussione

In questo studio, i glicosidi feniletanoidi ottenuti daCistanche tubulose non ha influenzato la vitalità cellulare sulle cellule RBL{{0}}H3 e KU812 ai trattamenti di 1.0-10.0 µg/mL. Ma,acteosideera citotossico al trattamento di 100,0 µg/mL (Fig. 2B), come riportato da Saracoglu et al. [30] che lo hanno dimostratoacteosideIsolato daArmeniaca flomicae Scutellaria salviifolia hanno mostrato effetti citotossici sulle linee cellulari dRLh-84, S-180, P-388/D1 con l'IC₅₀30-221 µg/mL con numeri cellulari diversi. Il nostro risultato ha suggerito che l'effetto di inibizione diacteosidesulla vitalità cellulare a 100 µg/mL di trattamento, può essere influenzato dalla sua attività apoptotica.

La reazione allergica di tipo immediato è coinvolta in molte malattie allergiche come l'asma, la rinite allergica e la sinusite. I mastociti svolgono un ruolo cruciale nelle risposte infiammatorie e allergiche immediate. I nostri dati mostrano che l'acteoside ha il più alto effetto inibitorio sul rilascio di -esosaminidasi da cellule RBL-2H3 sensibilizzate con IgE e stimolate dall'antigene rispetto ad altri glicosidi feniletanoidi a 1.0 ug/mL di trattamento ( Fig. 3). L'effetto di inibizione dell'acteoside sul rilascio di -esosaminidasi a 10.0 ug/mL di trattamento era inferiore a quello a 1,0 ug/mL di trattamento. Come Sugisawa et al. [31] dimostrato, questo può essere contribuito a H₂O₂induzione ad alte concentrazioni di acteoside_,che potrebbero essere i segnali regolati del calcio e la degranulazione sulle cellule RBL{{0}}H3 [32], influenzati dal rilascio di -esosaminidasi a 10,0 ug/mLacteosidetrattamento.

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La degranulazione dei mastociti è strettamente correlata a [Ca^{2 più}]i. L'inibizione di Ca^{2 più}l'afflusso di farmaci antiallergici gioca un ruolo cruciale nella soppressione della degranulazione nei mastociti. [33-34]. I nostri risultati indicano che il [Ca^{2 più}]i il livello era inferiore nelle cellule RBL-2H3 trattate con acteoside e stimolate con DNP-BSA (Fig. 4), che è coerente con altri rapporti [34-35], e questi risultati concordano con quelli di Fig. 3. Da queste osservazioni consideriamo che la diminuzione del [Ca intracellulare^{2 più}]i è coinvolto nell'effetto inibitorio diacteosidesul rilascio di -esosaminidasi. Ossido nitrico (NO) e H₂O₂sono le due principali specie reattive dell'ossigeno (ROS) note nella regolazione del segnale del calcio e nella degranulazione dei mastociti. I ROS sono necessari per la secrezione di -esosaminidasi e l'afflusso di calcio e la nicotinamide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) ossidasi è principalmente responsabile della produzione di ROS nelle cellule RBL-2H3 mediate da IgE [29, 32]. L'aumento sostenuto del calcio citosolico attraverso l'ingresso di calcio operato dal negozio è stato totalmente abolito quando la produzione di ROS è stata bloccata. Inoltre, ROS ha qualche relazione con la ß-esosaminidasi e il rilascio di istamina da parte dell'attivazione della proteina chinasi C (PKC) e della stimolazione delle IgE nelle cellule RBL-2H3 [34]. Inoltre Suzuki et al. [36] hanno scoperto che esisteva una correlazione significativa tra gli effetti di inibizione sul rilascio di istamina e 1, 1-difenil-2-pirateria l-idrossile (DPPH) o attività di scavenging dei radicali anioni superossido dell'antiossidante correlato alla curcumina composti. D'altro canto,acteosideha proprietà di scavenging dei radicali liberi sui radicali NO e DPPH [9, 37]. Inoltre, l'acteoside ha mostrato attività di scavenging nei leucociti umani attivati ​​[38]. Una delle possibilità è che l'effetto di inibizione dell'acteoside sul rilascio intracellulare di calcio possa essere influenzato dalle sue attività di scavenging dei radicali liberi delle attività della NADPH ossidasi.

L'acteoside ha inibito in modo dose-dipendente il rilascio di istamina su A23187 più cellula KU812 stimolata da PMA (Fig. 4A).Atteosidiinibito il Ca intracellulare indotto dal glutammato^{2 più}afflussi con conseguente sovrapproduzione di NO e ridotta formazione di ROS [37]. Sia PKC che Ca^{2 più}le vie di segnalazione sono necessarie per il rilascio di istamina e leucotrieni dai mastociti e dai sistemi di roditori [39]. Lo abbiamo ipotizzatoacteosidepuò avere un effetto inibitorio sul rilascio di istamina attraverso il Ca^{2 più}afflusso. A questo scopo, abbiamo utilizzato A21387 più PMA per stimolare le cellule KU812 e abbiamo dimostrato l'effetto di inibizione del rilascio di istamina conacteoside. Questo risultato ha supportato la nostra ipotesi che l'acteoside possa ridurre il rilascio di istamina dalle cellule KU812 mediante l'inibizione di Ca^{2 più}afflusso o attivazione PKC.

Si ritiene senza dubbio che la stimolazione dei mastociti con il composto 48/80 avvii l'attivazione di una via di trasduzione del segnale, che porta al rilascio di istamina. Senyshyn et al. [40] hanno identificato l'attivazione della fosfolipasi D ricombinante marcatamente sinergizzata dal composto 48/80 in cellule basofile permeabilizzate. La secrezione indotta del composto 48/80-è associata a un aumento transitorio del Ca citosolico^{2 più}. Questa secrezione è stata bloccata dal chelante del calcio e dall'inibitore della PKC. Nel presente studio, lo abbiamo osservatoacteosideha inibito la degranulazione indotta dal composto 48/80- dalle cellule basofile. Tuttavia, l'effetto di inibizione dell'acteoside sul rilascio di istamina a 0.1 ug/mL di trattamento era superiore a quello di 1.0-10.0 ug/mL di trattamento (Fig. 4B). Come Lau et al. [41] hanno dimostrato l'effetto inibitorio diacteosidesul composto 48/80 il rilascio di istamina indotto può essere coinvolto nell'effetto antinfiammatorio dell'acteoside contro l'edema associato alla permeabilità vascolare. Possibilmente, ilacteosidepuò avere diversi modi per inibire il rilascio del mediatore chimico dalle cellule basofile, suggerendo la complessità della sua azione. Tuttavia, al fine di rivelare il meccanismo di inibizione del rilascio di istamina di questa prescrizione, dovrebbero essere condotti ulteriori studi.

Tra le citochine prodotte dalle cellule basofile, TNF- , IL-4, IL-13 e IL-5 sono le molecole chiave. La riduzione delle citochine pro-infiammatorie dai mastociti o dalle cellule basofile è uno degli indicatori chiave della riduzione dei sintomi allergici [42]. Per quanto riguarda il TNF- , la produzione è regolata principalmente da Ca^{2 più}afflusso, ma il processo di rilascio è regolato da meccanismi aggiuntivi che possono implicare l'attivazione di PKC nelle cellule KU812. Inibizione di [Ca^{2 più}]i l'afflusso è coinvolto nell'espressione delle citochine nei mastociti e nelle cellule basofile [34, 43]. Il nostro risultato ha mostrato che 1.0 e 10.0 µg/mLacteosideridotta produzione di TNF- e IL-4 da A23187 più cellule KU812 stimolate da PMA dopo il trattamento per 16 ore. L'acteoside potrebbe inibire la produzione di TNF- e IL-4 diminuendo il [Ca^{2 più}] I livello in A23187 più cellule KU812 stimolate da PMA. Inoltre, i nostri risultati hanno suggerito che ilacteosideha un effetto antiallergico nella fase tardiva. La conferma dell'effetto dell'acteoside utilizzando FcεRI che esprimono mastociti o cellule basofile è necessaria per il futuro.

In conclusione, riportiamo per la prima volta che acteoside, echinacoside, ecistanosideUn estratto daCistanche tubulose può inibire il rilascio di -esosaminidasi da cellule RBL-2H3 stimolate da BSA sensibilizzate con IgE. Inoltre, l'acteoside può inibire il rilascio di istamina, la produzione di TNF- e IL-4 in modo dose-dipendente su cellule KU812 stimolate da A23187 più PMA. Questi risultati lo suggerisconoacteosidepotrebbe essere un buon candidato per il trattamento terapeutico di varie malattie allergiche. Il meccanismo dettagliato alla base dell'effetto antiallergico dell'acteoside è oggetto di uno studio futuro.

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Estratto di Cistanche tubulosa