Glicosidi feniletanoidi di Cistanche sul modello di sindrome della menopausa nei topi

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ShuoTian, ​​Mingsan Miao, MingBai, Zhenzhen Wei

Dipartimento di Farmacologia, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, Cina Disponibile online dal 10 maggio 2017.

Astratto

Cistanche è l'erboristeria cinese tradizionale e preziosa, con duemila anni di storia d'uso in Cina. Ha l'effetto di tonificare i reni, fornisce forti integratori al fegato e ai reni e ricostituisce l'essenza e il sangue, noto come "ginseng del deserto". Qui, abbiamo esplorato il meccanismo diGlicosidi feniletanoidi di Cistanche(PGC) ai topi modello disindrome della menopausa, nonché l'effetto terapeutico e le caratteristiche del PGC alsindrome della menopausa. In questo studio, i topi KM sono stati riprodotti mediante la resezione completa delle ovaie su entrambi i lati della schiena per stabilire i topi modello delsindrome della menopausa(MPS) e hanno ricevuto rispettivamente acqua distillata o farmaci. I topi modello hanno ricevuto acqua distillata. I topi hanno ricevuto alte dosi di 200 mg/(kg al giorno).Glicosidi feniletanoidi di Cistanche(HPGC), 100 mg/(kg al giorno) dosi medie diGlicosidi feniletanoidi di Cistanche(MPGC) e 50 mg/(kg al giorno) basse dosi diGlicosidi feniletanoidi di Cistanche(LPGC). Dopo 21 giorni, potrebbe determinare il numero di attività indipendenti e il numero di persone in piedi, il periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura e il numero elettrico. Ha anche calcolato l'indice dei visceri dell'utero, del timo, della milza, ha misurato i livelli di estradiolo (E2), testosterone (T), ormone luteinizzante (LH) e ormone follicolo-stimolante (FSH) nel siero. Inoltre, ha osservato i cambiamenti patologici dell'utero, del timo, della milza e dell'ipofisi dei topi. I risultati hanno mostrato che gli indicatori comportamentali: rispetto al gruppo modello (MG), HPGC, MPGC, LPGC potrebbero aumentare le attività indipendenti (P ​​< 0.01);="" hpgc,="" mpgc="" potrebbero="" aumentare="" il="" numero="" di="" persone="" in="" piedi,="" il="" periodo="" di="" latenza="" del="" primo="" ingresso="" nella="" camera="" oscura,="" e="" ridurre="" il="" numero="" elettrico="" (p="">< 0.01);="" lpgc="" potrebbe="" aumentare="" il="" numero="" di="" persone="" in="" piedi="" (p="">< 0.05);="" indice="" dei="" visceri:="" rispetto="" a="" mg,="" hpgc,="" mpgc="" potrebbe="" aumentare="" l'indice="" dei="" visceri="" dell'utero,="" del="" timo,="" della="" milza="" (p="">< 0.01);="" lpgc="" potrebbe="" aumentare="" l'indice="" dei="" visceri="" dell'utero="" (p=""><0,05); indice="" sierico:="" rispetto="" a="" mg,="" tutti="" i="" gruppi="" potrebbero="" diminuire="" i="" livelli="" di="" lh="" nel="" siero="" (p=""><0,01); hpgc,="" mpgc="" potrebbero="" migliorare="" i="" livelli="" di="" e2,="" t="" e="" diminuire="" i="" livelli="" di="" lh,="" fsh="" nel="" siero="" (p=""><0,01); lpgc="" potrebbe="" migliorare="" i="" livelli="" di="" e2="" e="" diminuire="" i="" livelli="" di="" fsh="" nel="" siero="" (p=""><0,05). nel="" frattempo,="" ha="" avuto="" la="" tendenza="" a="" migliorare="" i="" livelli="" di="" t="" nel="" siero.="" cambiamenti="" patologici:="" rispetto="" a="" mg,="" hpgc="" potrebbe="" migliorare="" significativamente="" i="" cambiamenti="" patologici="" dell'utero,="" del="" timo,="" della="" milza="" e="" dell'ipofisi="" dei="" topi;="" anche="" altri="" gruppi="" hanno="" un="" certo="" effetto.="" i="" risultati="" hanno="" indicato="" che="" la="" pgc="" potrebbe="" migliorare="" il="" disturbo="" degli="" ormoni="" sessuali="" della="" mps="" e="" ripristinare="" la="" funzione="" dell'utero,="" del="" timo="" e="" della="" milza,="" con="" un="" migliore="" effetto="" terapeutico="" sulla="">

astratto grafico

Parole chiave: PGC;Sindrome da menopausa; Topi

Abbreviazioni

MPSsindrome della menopausaPGCPolietilenglicosidi di CistancheHPGCalte dosi diGlicosidi feniletanoidi di CistancheMPGCdosi medie di Glicosidi feniletanoidi di CistancheLPGCdosi basse diGlicosidi feniletanoidi di CistancheTtestosteroneE2EstradioloLHOrmoni luteinizzanti ormone follicolo-stimolante

Glicosidi feniletanoidi di Cistanche sulla sindrome della menopausa

1. Introduzione

Cistanche, gli steli carnosi essiccati con foglie squamose di Cistanche deserticola YC Ma e C. tubulosa (Schrenk) Wight (Chen et al., 2013), è una droga famosa e ampiamente utilizzata da migliaia di anni. È originato dal "Shen Nong's Herbal Classic" (Liu et al., 2013), di sapore salato e di natura calda. Ha l'effetto di tonificare i reni, integratori forti per fegato e reni, ricostituire l'essenza e il sangue, inumidire l'intestino per alleviare la stitichezza e altra efficacia. Viene utilizzato principalmente per trattare la carenza di rene-yang (che porta all'impotenza), prospermia, sperma freddo e sterilità dovuta al freddo nell'utero, costipazione, enuresi, frequenza della minzione e un'altra malattia. La ricerca moderna mostra che può migliorare l'immunità umana, la memoria e la capacità di apprendimento con effetti anti-invecchiamento, antinfiammatori, anti-fatica e altri (Li et al., 2010, Rashid et al., 2017).

La MPS è una sindrome da disfunzione del sistema nervoso autonomo causata da un disturbo della secrezione di estrogeni e accompagnata da sintomi neuropsichiatrici. Presenta diversi gradi di vampate di calore, irritabilità, vertigini, acufeni, palpitazioni, insonnia, ecc., con osteoporosi visibile, perdita di memoria, deterioramento cognitivo, malattie cardiovascolari e cerebrovascolari nel periodo tardivo. Il motivo principale è il graduale declino e scomparsa della funzione ovarica (Ia, 2016). Attualmente, l'uso principale della terapia ormonale sostitutiva (TOS) per il trattamento della MPS, l'integrazione diretta di estrogeni, la TOS a lungo termine può causare sanguinamento vaginale, dolorabilità mammaria, cancro dell'endometrio, cancro al seno e altri effetti avversi. Inoltre, l'effetto non è ancora soddisfacente: la dose di estrogeni sul sistema immunitario ha ancora un effetto inibito (Ma et al., 2016, Nawaz et al., 2017). Soprattutto la recente scoperta mostra che può aumentare il rischio di malattie cardiovascolari e cerebrovascolari e altri gravi effetti collaterali limitando significativamente l'applicazione clinica. Nell'urgente domanda del mercato, sempre più attenzione da parte della medicina tradizionale cinese (MTC) alla ricerca del trattamento dei farmaci MPS (Halim e Phang, 2017, Mustafa et al., 2017). La MTC tratta la MPS con una lunga storia (Zhang e Miao, 2011), regolando l'asse ipotalamo-ipofisi-ovaio (HPOA), il recupero della funzione ovarica e il ritardo dell'invecchiamento ovarico. È stato riscontrato che la maggior parte dei farmaci del rene yang ha un migliore effetto terapeutico sulla MPS (Wei e Miao, 2013).

Cistancheè la più alta frequenza di farmaci che reintegrano lo yang renale nelle dinastie passate (Tu et al., 2011). I principali componenti efficaci diCistanchesono glicosidi feniletanoidi, con effetto androgeno. È l'incarnazione del rene yang della medicina moderna (Zhao e Pan, 2013), con i più alti principi attivi nel Cistanche (Yan et al., 2012). È principalmente attraverso due modi di funzionare (Wumaierjiang e Yao, 2016). In primo luogo, ha la funzione di rafforzare la funzione ipotalamo-ipofisi-surrene e promuovere il rilascio di neurotrasmettitori e ormoni nel corpo; in secondo luogo, ha la funzione di anti-fatica, migliorando la funzione del corpo. L'effetto del rene ricostituente di Cistanche è diverso dai farmaci renali generali come Epimedium brevicornum Maxim, Morinda officinalis How.Cistanchenon danneggia lo yin ma riempie il rene. Non appare con equità, secchezza delle fauci e altri sintomi per l'uso a lungo termine.

2. Materiale e metodi

2.1. Materiale e reagenti

Cistanche(Lotto n. 20130501) è stato acquistato da Anhui, Dechang Pharmaceutical Pieces Co., Ltd. I campioni sono stati identificati dal professor Chen Suiqing (l'Università di medicina cinese di Henan, identificazione della disciplina cinese della droga) come gli steli carnosi essiccati con foglie squamose diCistanchedeserticolaY. C. Ma, così come gli steli carnosi essiccati con foglie squamose di C. tubulosa (Schrenk) Wight, rispettivamente. GC (Lotto n. 120303) è stato fornito da Shanxi star Pharmaceutical Co., Ltd.; La sostanza di riferimento dell'echinacoside (Lotto n.111670-200503) è stata fornita dall'Istituto nazionale per il controllo dei prodotti farmaceutici e biologici; La resina ad assorbimento macroporosa AB-8 (Lotto n. 20130618) è stata fornita dal Tianjin Guangfu dell'Istituto dell'industria chimica superfine; Sodio carbossimetilcellulosa (lotto n. 20120418, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Co., Ltd.), benzilpenicillina sodica per iniezione (lotto n. c1206807, North China Pharmaceutical Co., Ltd., specifica: 4 milioni di unità), 0,9 percento di sodio Iniezione di cloruro (lotto n. 1301265303, Chen Xin Pharmaceutical Co., Ltd; specifiche: 250 ml), cloralio idrato (lotto n. 20120827, Tianjin Institute of Fine Chemical Industry), kit di test E2 ELISA (lotto n. 20131001A, sistemi di ricerca e sviluppo Cina), kit di dosaggio T ELISA (batch n. 20131001A, R&D Systems China), kit di dosaggio LH ELISA (batch n. 20131001A, R&D Systems China), kit di dosaggio FSH ELISA (batch n. 20131001A, R&D Systems China).

2.2. preparazione del campione

2.2.1. Metodi di preparazione

La procedura per la preparazione del campione era la seguente: Con i metodi della letteratura (Gu et al., 2011), eravamo sotto la guida di Feng Suxiang (disciplina del corso di analisi farmaceutica, Henan University of Chinese Medicine). IlCistanchefrantumato alla farina, con i metodi di estrazione a riflusso per estrarre 2 volte con la quantità di alcol etilico (il contenuto dell'alcol etilico era del 70 percento). Il tempo di estrazione del reflusso è stato di 1,5 h per una volta, quindi ha combinato il liquido di estrazione dell'alcool 2 volte. Il liquido di estrazione è stato decompresso e arricchito senza l'aroma dell'alcol e l'acqua distillata è stata utilizzata per disperdersi (la concentrazione è 0,5 g/ml, come soluzione del campione. La soluzione del campione è stata installata nella resina AB-8 con flusso (il rapporto tra la soluzione del campione e la resina era 1:10), dopo aver lasciato riposare per 5 ore fino a quando la soluzione del campione non è stata completamente adsorbita. E poi, prima con 10 volte il volume della colonna di acqua distillata per lavare l'AB{{12} } resina con la soluzione campione, si abbandonava all'acqua; In secondo luogo, con 10 volte il volume della colonna dell'alcol etilico (il contenuto dell'alcol etilico è del 10 per cento), le impurità sono state rimosse; In terzo luogo, con 7 volte di il volume della colonna dell'alcol etilico (il contenuto dell'alcol etilico era del 60 per cento) ad eluizione, si raccoglieva l'eluato e si essiccava l'eluato, cioè la polvere diGlicosidi feniletanoidi di Cistanche.

Glicosidi feniletanoidi di Cistanche sulla sindrome della menopausa

2.2.2. Selezione della lunghezza d'onda determinante

Selezionare {{0}},5 ml di soluzione del prodotto di controllo e aggiungere 1 ml di soluzione di nitrito di sodio al 5% al ​​prodotto di controllo. Quindi agitare e mettere in silenzio per 6 min. Successivamente, aggiungere il 10 percento di soluzione di nitrato di alluminio alla miscela di cui sopra. Quindi, agitare e lasciare in silenzio per 6 min. Aggiungere il 10 percento di idrossido di sodio 10 mL alla miscela di cui sopra, il volume della miscela è stato fissato a 25 mL con l'acqua. Agitare e lasciare in silenzio per 18 minuti, come soluzione del prodotto di controllo. Scegli 0,5 mlGlicosidi feniletanoidi di Cistanchesoluzione, come configurazione del metodo sopra, come soluzione di prova. Il campione in bianco era la soluzione in bianco ad eccezione della soluzione del prodotto di controllo e della soluzione del campione, come la configurazione del metodo sopra. Nello spettrofotometro UV con una gamma di lunghezze d'onda di 200–800 nm, è stata utilizzata l'intera lunghezza d'onda per scansionare le 3 soluzioni di cui sopra. La soluzione del prodotto di controllo e la soluzione campione avevano il picco di assorbimento massimo a 507 nm, quindi la lunghezza d'onda di 507 nm è stata determinata come lunghezza d'onda di assorbimento.

Dopo ilGlicosidi feniletanoidi di Cistanchesoluzione (1) e la sostanza di riferimento Echinacoside (2) (contrasto di sovrapposizione), è apparso il colore (vedi figura successiva)

2.2.3. Metodo di rilevamento del contenuto

Pesare con precisione 1 ml in attesa della determinazione della soluzione, aggiungere 1 ml di soluzione di nitrito di sodio al 5 percento al prodotto di controllo, agitare e lasciare in silenzio per 6 min. E quindi aggiungere il 10 percento di soluzione di nitrato di alluminio alla miscela di cui sopra. Agitare e posizionare in silenzio per 6 min. Aggiungere 10 mL di idrossido di sodio al 10 percento alla miscela di cui sopra e il volume della miscela è stato fissato a 25 mL con l'acqua. Agitare e posto tranquillo per 18 min; la soluzione in bianco è stata preparata con lo stesso metodo con il campione in bianco senza soluzione campione. Con la spettrofotometria UV per determinare alla spettrofotometria di 507 nm.

2.2.4. Esame metodologico

2.2.4.1. Preparazione della soluzione di controllo e della soluzione campione

Preparazione della soluzione di controllo: pesare con precisione 3.06 mg di echinacoside con l'essiccazione a peso costante come sostanza di riferimento e metterlo nel matraccio graduato da 25 ml. Quindi utilizzare una soluzione di etanolo al 70 percento diluita sulla scala e agitare la miscela, come soluzione di controllo. Il contenuto della soluzione di controllo era 0,1224 mg/ml.

Preparazione della soluzione campione: Pesare con precisione 5 mgGlicosidi feniletanoidi di Cistanchee metterlo nel misurino da 10 ml. Quindi utilizzare una soluzione di etanolo al 70 percento diluita sulla bilancia e agitare la miscela, come soluzione campione.

2.2.4.2. Preparazione della curva standard

Disegna con precisione la soluzione di controllo di {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10 }}, 5.0 e 6,0 ml, in base alla "Selezione della determinazione della lunghezza d'onda", e ha misurato l'assorbanza. L'equazione di regressione è stata ottenuta utilizzando la concentrazione per l'assorbanza: Y=20.296X - 0,0015 (r=0.9994) e l'intervallo lineare era 4,90–29,4 ug/ml.

2.2.4.3. Prova di precisione

Parallelamente ha determinato l'assorbanza della soluzione campione 6 volte secondo il punto del "Metodo di rilevamento del contenuto". Dopo aver calcolato la deviazione standard relativa dell'assorbanza, l'assorbanza era 0.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0 .297 e 0.297 e l'assorbanza media era 0.298, con RSD=0.330 percento (n=6).

2.2.4.4. Prova di stabilità

Determinare l'assorbanza della soluzione campione dopo che la soluzione è stata completamente colorata per {{0}}, 15, 30, 50 e 60 min secondo la voce "Metodo di rilevamento dei contenuti". Dopo aver calcolato la deviazione standard relativa dell'assorbanza, l'assorbanza era 0,300, 0,296, 0,295 e 0,295 e l'assorbanza media era 0,299, con RSD=1,362 percento (n {{17 }}).

Glicosidi feniletanoidi di Cistanche sulla sindrome della menopausa

2.2.4.5. Test ripetitivi

Preparare 6 soluzioni campione secondo il punto "Preparazione della soluzione campione" e calcolare l'assorbanza e il contenuto secondo il punto "Metodo di rilevamento del contenuto". I contenuti erano rispettivamente del 65,2%, 65,6%, 66,7%, 67,2% e 66,5% e il contenuto medio era del 66,2%, con RSD=1.142% (n=6).

2.2.4.6. Prova del tasso di recupero del campione

Pesare con precisione 9 pezzi della soluzione campione di cui si conosceva il contenuto e ogni pezzo era di 0,5 ml. Aggiungere rispettivamente 200, 250 e 300 ul di soluzione standard nella soluzione campione. Calcolare il tasso di recupero e la relativa deviazione standard diGlicosidi feniletanoidi di Cistanchee le percentuali di recupero erano 101,45 percento, 99,26 percento, 98,94 percento, 101,83 percento, 99,05 percento, 99,47 percento, 98,72 percento, 99,17 percento e 100,64 percento. Il tasso di recupero medio è stato del 99,84 percento , con RSD=1, 164 percento (n=9).

2.2.5. Determinazione del contenuto del campione

Preparare 3 soluzioni campione secondo il punto "Preparazione della soluzione campione". Quindi, calcolare l'assorbanza in base alla voce di "Metodo di rilevamento del contenuto" alla spettrofotometria di 507 nm e calcolare il contenuto. La tabella 1 mostra i risultati.

Tabella 1. Risultato diGlicosidi feniletanoidi di Cistanchecontenuto.

2.3. Animali da esperimento

I topi femmina KM (20–25 g) sono stati acquistati dal Wuhan Institute of Biological Products. Numero di permesso per animali: 42000400000611, certificato di laboratorio n. SYXK (Henan) 2010-001.

2.4. Strumento sperimentale

Centrifuga da tavolo ad alta velocità, fabbrica di strumenti scientifici Anting di Shanghai, modello: TGL-168; Bilancia elettronica analitica, Ohaus (Shanghai), modello: AR1140/C; Strumento per il test delle attività autonome dei topi, Chengdu Taming Science and Technology Limited Company, modello: ZZ-6; Strumento mouse scuro, Chengdu Taming Technology Co., Ltd., Modello: BA-200; Strumento per marcatura enzimatica, USA BIO-RAD, Modello: 680; Microscopio elettrico, azienda giapponese OLYMPUS, modello: BX61.

2.5. Modello animale sperimentale

100 topi KM (23-25 ​​g) sono stati pesati e iniezione intraperitoneale del 10 percento di idrato di cloro aldeide (0,03 ml/10 g), fissazione addominale dopo l'anestesia. 12 topi sono stati selezionati casualmente come gruppo di controllo in bianco (BC), con l'operazione fittizia; altri sono stati condotti con il modello MPS. Sotto la parte posteriore dell'ultima costola del topo, tagliare i peli dei topi all'intersezione della linea ascellare mediana e la distanza dalla colonna vertebrale laterale di circa 1 cm. Dopo aver disinfettato, aprire la pelle e il muscolo della schiena di circa 0,5-1 cm, abbiamo trovato una massa grassa bianco latte nel campo visivo dell'incisione e l'ovaio era incorporato nel grasso. Estrarre delicatamente il grasso dall'incisione con le pinzette e separare il grasso, si potrebbe riscontrare che il filo sottile è irregolare dell'ovaio giallo-rosso. In primo luogo, le ovaie erano sotto la tuba di Falloppio (compreso il grasso) con un filo sottile legato, quindi rimuovevano le ovaie. Dopo l'operazione, l'utero è stato rimesso nella cavità addominale. Cucire i muscoli e la pelle e le ovaie bilaterali sono state rimosse con lo stesso metodo. Alimentazione attenta dopo l'intervento chirurgico, iniezione intramuscolare di penicillina 200 mila U/kg, in caso di infezione, una volta al giorno per 3 giorni. Dopo l'intervento chirurgico per 5 giorni, gli strisci vaginali dei topi sono stati testati, una volta al giorno per 5 giorni, al fine di determinare se le ovaie erano state completamente rimosse.

2.6. Raggruppamento sperimentale

I topi hanno avuto il periodo estrale a causa degli strisci vaginali sono stati abbandonati e 72 topi con castrazione completamente sono stati divisi casualmente in cinque gruppi (n=12 per gruppo), vale a dire gruppo modello (MG), GC, HPGC, MPGC e LPGC.

2.7. Metodo di erogazione

{{0}},5 percento CMC: sodio carbossimetilcellulosa 4 g, con acqua distillata come 800 ml. La dose del farmaco di HPGC, MPGC e LPGC era rispettivamente di 200, 100 e 50 mg/kg (volume di dosaggio: 0,1 ml/10 g). Pesare il PGC di 2000 mg, 1000 mg e 500 mg, sciolto con una piccola quantità di 0,5 percento CMC. Quindi impostare il volume a 100 ml e mescolare la sospensione. La dose di farmaco di GC era di 675 mg/kg, con 9 compresse di GC disciolte con una piccola quantità di 0,5 percento di CMC. Quindi impostare il volume a 40 ml e miscelare la sospensione.

2.8. Somministrazione di farmaci

Gli animali di ciascun gruppo sono stati somministrati in corrispondenza dei farmaci il 10o giorno dopo l'intervento chirurgico. Al gruppo GC è stata somministrata una sospensione di GC a 675 mg/kg e ai gruppi HPGC, MPGC e LPGC è stata somministrata una sospensione di HPGC, MPGC, LPGC a 200 mg/kg, 100 mg/kg e 50 mg/kg. BC e i gruppi MG sono stati somministrati con lo stesso volume di soluzione di CMC allo 0,5%, una volta al giorno per 21 giorni.

2.9. Determinazione delle attività indipendenti e del numero di standing

I topi in ogni gruppo somministrati per 18 giorni sono stati inseriti nello strumento di attività indipendente, adattarsi all'ambiente per 1 min. Quindi determinare il numero di attività indipendenti e in piedi entro 5 min.

2.10. Determinazione del periodo di latenza del primo ingresso in camera oscura e del numero elettrico

I topi in ciascun gruppo sono stati somministrati per 19 giorni, facendo in modo che la coda del topo fosse rivolta verso la piccola porta della camera oscura nella casella di determinazione. Dopo 24 h (somministrato per 20 giorni), determinare il periodo di latenza del primo ingresso in camera oscura e il numero elettrico entro 5 min.

2.11. Calcolo dell'indice dei visceri

Topi dopo l'ultima somministrazione di 2 h (a digiuno per 12 h). Dopo aver prelevato il sangue, i topi sono stati sacrificati e sezionati. Rimuovere il timo, la milza e l'utero e pesare il peso umido dell'organo. Quindi calcolare l'indice dei visceri (indice dei visceri=peso umido dell'organo mg/peso corporeo g).

2.12. Misurazione del contenuto di E2, T, LH, FSH

I topi, dopo l'ultima somministrazione di 2 h (a digiuno per 12 h), sono stati pesati e poi prelevati il ​​sangue. Separare il siero e determinare il contenuto di E2, T, LH e FSH nel siero come da specifica.

2.13. Osservazione dei cambiamenti morfologici dell'utero

Secondo i cambiamenti dei topi sperimentali dell'endometrio, delle ghiandole e dello strato muscolare, i criteri semiquantitativi sono stati utilizzati per misurare l'utero. La morfologia dell'organizzazione patologica poteva essere suddivisa in quattro livelli: il livello di "-" significava che le cellule epiteliali endometriali, le ghiandole e lo strato muscolare erano normali; il livello di "più" la piccola parte delle cellule epiteliali e delle ghiandole endometriali era atrofia e lo strato muscolare era normale; il livello di "più più" significava che parte delle cellule epiteliali e delle ghiandole endometriali erano atrofizzate e lo strato muscolare presentava una piccola atrofia; il livello di "plus plus plus" significava che le cellule epiteliali e le ghiandole endometriali erano significativamente atrofizzate e lo strato muscolare era atrofia.

2.14. Misurazione dello spessore della corteccia timica

Lo spessore medio della corteccia timica è stato misurato dal micrometro ai topi.

2.15. Misurazione dello spessore del nodulo splenico

Lo spessore del nodulo splenico di entrambi i lati è stato misurato al micrometro con l'arteria centrale come centro. Quindi calcolare la media come lo spessore del nodulo splenico.

2.16. Calcolo del numero della cellula basofila e della cellula dell'ipofisi anteriore

Calcola il numero della cellula basofila e della cellula dell'ipofisi anteriore in un'area di 10, 000 μm2 di cornici rettangolari quadrate sotto un campo visivo ad alta potenza.

2.17. analisi statistica

Tutti i dati sono stati analizzati dal pacchetto statistico SPSS 17.0 per l'analisi statistica dei dati medici. I dati di misurazione sono stati utilizzati per sommare e sottrarre media la deviazione standard. (^-x± s). I gruppi sono stati confrontati utilizzando l'analisi a fattore singolo (ANOVA) della varianza e l'omogeneità della varianza è stata utilizzata i metodi di analisi LSD, l'eterogeneità della varianza è stata utilizzata il Games-Howell e la data per i dati del voto è stata utilizzata il test Ridit .

3. Risultati

3.1. L'effetto delle attività indipendenti e il numero di stare in piedi nei topi

Fig. 1, Fig. 2 mostrano i dati delle attività indipendenti e il numero di standing. Dimostra che i topi MG sono notevolmente ridotti rispetto al BC (P < 0.01),="" riflettendo="" che="" la="" curiosità="" per="" l'ambiente="" fresco="" è="" ridotta.="" i="" topi="" in="" gc,="" hpgc,="" mpgc="" e="" lpgc="" possono="" migliorare="" notevolmente="" le="" attività="" indipendenti="" rispetto="" a="" mg="" (p="">< 0.01);="" quelli="" in="" gc,="" hpgc="" e="" mpgc="" possono="" migliorare="" le="" attività="" indipendenti="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><0,01); quelli="" in="" lpgc="" possono="" migliorare="" leggermente="" il="" numero="" di="" persone="" in="" piedi="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 1. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sulle attività indipendenti nei topi. Le attività indipendenti sono registrate come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

Fig. 2. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sul numero di persone in piedi nei topi. Il numero di persone in piedi viene registrato come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

3.2. Effetto del periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura e del numero elettrico

Come mostrato in Fig. 3, Fig. 4, i dati del periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura e il numero elettrico hanno dimostrato che i topi MG sono notevolmente ridotti rispetto al BC (P <0.{{4} }}1),="" che="" riflette="" il="" declino="" della="" memoria="" nei="" topi="" mps.="" i="" topi="" in="" gc,="" hpgc="" e="" mpgc="" possono="" aumentare="" notevolmente="" il="" periodo="" di="" latenza="" del="" primo="" ingresso="" nella="" camera="" oscura="" e="" ridurre="" il="" numero="" elettrico="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><0,01), oltre="" a="" migliorare="" la="" memoria.3.2.="" effetto="" del="" periodo="" di="" latenza="" del="" primo="" ingresso="" nella="" camera="" oscura="" e="" del="" numero="">

Come mostrato in Fig. 3, Fig. 4, i dati del periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura e il numero elettrico hanno dimostrato che i topi MG sono notevolmente ridotti rispetto al BC (P <0.{{4} }}1),="" che="" riflette="" il="" declino="" della="" memoria="" nei="" topi="" mps.="" i="" topi="" in="" gc,="" hpgc="" e="" mpgc="" possono="" aumentare="" notevolmente="" il="" periodo="" di="" latenza="" del="" primo="" ingresso="" nella="" camera="" oscura="" e="" ridurre="" il="" numero="" elettrico="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><0,01), oltre="" a="" migliorare="" la="">

Fig. 3. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sul periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura nei topi. Il periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura viene registrato come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

Fig. 4. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sul numero elettrico nei topi. Il numero elettrico è riportato come media ± SE Per ogni gruppo,^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01 rispetto al gruppo di modelli, utilizzando ANOVA con l'analisi LSD.

3.3. Effetto dell'indice dei visceri

Come mostrato in Fig. 5, i dati dell'indice dei visceri di utero, timo e milza dimostrano che i topi MG sono notevolmente ridotti rispetto al BC (P < 0.01),="" riflettendo="" l'utero="" e="" l'organo="" immunitario="" dei="" topi="" mps="" sono="" atrofizzati.="" i="" topi="" in="" gc,="" hpgc="" e="" mpgc="" possono="" migliorare="" notevolmente="" l'indice="" dei="" visceri="" di="" utero,="" timo="" e="" milza="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><{5}}.01). i="" topi="" in="" lpgc="" hanno="" leggermente="" migliorato="" l'indice="" dei="" visceri="" dell'utero="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 5. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sull'indice dei visceri nei topi. Gli indici dei visceri sono registrati come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

3.4. Effetto del contenuto di E2, T, LH e FSH

Come mostrato in Fig. 6, i dati del livello di E2 e T dimostrano che i topi MG sono notevolmente ridotti e i dati del livello di LH e FSH dimostrano che i topi MG sono notevolmente aumentati rispetto al BC (P < 0.01),="" rifletteva="" che="" i="" livelli="" di="" ormoni="" sessuali="" nel="" siero="" sono="" alterati="" nei="" topi="" mps.="" tutti="" i="" gruppi="" di="" topi="" sono="" significativamente="" ridotti="" con="" il="" livello="" di="" lh="" nel="" siero="" rispetto="" al="" bc="" (p="">< 0.01).="" i="" topi="" in="" gc,="" hpgc="" e="" mpgc="" possono="" migliorare="" notevolmente="" e2,="" t="" e="" diminuire="" il="" livello="" di="" lh,="" fsh="" nel="" siero="" rispetto="" all'mg="" (p=""><0,01). i="" topi="" in="" lpgc="" possono="" migliorare="" leggermente="" l'e2="" e="" diminuire="" il="" livello="" di="" fsh="" nel="" siero="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 6. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC su E2, T, LH, FSH nei topi. I livelli di E2, T, LH e FSH sono registrati come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

3.5. Osservazione dei cambiamenti morfologici patologici dell'utero

Come mostrato in Fig. 7, Fig. 8, con la scala micrometrica, i cambiamenti morfologici dell'utero dimostrano che i topi MG hanno cambiamenti patologici significativi nell'utero rispetto al BC (P < 0.0="" 1).="" i="" topi="" in="" gc,="" hpgc="" possono="" migliorare="" notevolmente="" i="" cambiamenti="" morfologici="" patologici="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><{6}}.01). i="" topi="" in="" mpgc="" possono="" migliorare="" i="" cambiamenti="" morfologici="" patologici="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 7. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sui cambiamenti morfologici patologici dell'utero nei topi. I cambiamenti della morfologia patologica sono riportati come foto per ogni gruppo.

Fig. 8. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sui cambiamenti morfologici patologici nei topi. I cambiamenti della morfologia patologica sono riportati come criteri semiquantitativi per misurare l'utero, e la morfologia dell'organizzazione patologica può essere suddivisa in quattro livelli per ciascun gruppo e calcolare il numero di topi.

I cambiamenti della morfologia patologica sono riportati come criteri semiquantitativi per misurare l'utero, e la morfologia dell'organizzazione patologica può essere suddivisa in quattro livelli per ciascun gruppo e calcolare il numero di topi.

3.6. Misurazione dello spessore della corteccia timica

Come mostrato in Fig. 9, Fig. 10, con la scala micrometrica, la data dello spessore della corteccia timica dimostra che i topi MG sono significativamente ridotti rispetto al BC (P <0. 01),="" indicando="" che="" il="" volume="" del="" timo="" è="" diminuito="" dopo="" aver="" stabilito="" i="" topi="" modello="" mps.="" i="" topi="" in="" hpgc="" possono="" aumentare="" notevolmente="" lo="" spessore="" della="" corteccia="" timica="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><0,01). i="" topi="" in="" mpgc="" possono="" aumentare="" lo="" spessore="" della="" corteccia="" timica="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 9. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sui cambiamenti morfologici patologici del timo nei topi. I cambiamenti della morfologia patologica sono riportati come foto per ogni gruppo.

Fig. 10. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sullo spessore della corteccia timica nei topi. Lo spessore della corteccia timica viene registrato come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

3.7. Misurare lo spessore del nodulo splenico

Come mostrato in Fig. 11, Fig. 12, con la scala micrometrica, la data dello spessore del nodulo splenico dimostra che i topi MG sono significativamente ridotti rispetto al BC (P < 0.01="" ),="" indicando="" che="" il="" volume="" della="" milza="" è="" diminuito="" dopo="" aver="" stabilito="" i="" topi="" modello="" mps.="" i="" topi="" in="" hpgc="" possono="" aumentare="" notevolmente="" lo="" spessore="" del="" nodulo="" splenico="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><{6}}.01). i="" topi="" in="" mpgc="" possono="" aumentare="" lo="" spessore="" del="" nodulo="" splenico="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 11. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sui cambiamenti morfologici patologici della milza nei topi. I cambiamenti della morfologia patologica sono riportati come foto per ogni gruppo.

Fig. 12. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sullo spessore dei noduli splenici nei topi. Lo spessore del nodulo splenico viene registrato come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

3.8. Calcolo del numero della cellula basofila e della cellula dell'ipofisi anteriore

Come mostrato in Fig. 13, Fig. 14, la data del numero della cellula basofila e della cellula dell'ipofisi anteriore dimostrano che i topi MG sono significativamente ridotti rispetto al BC (P < 0.0="" 1),="" indicando="" che="" il="" numero="" della="" fonte="" cellulare="" della="" gonadotropina="" secretoria="" è="" diminuito="" dopo="" aver="" stabilito="" i="" topi="" modello="" mps.="" tutti="" i="" gruppi="" di="" farmaci="" ricevuti="" possono="" aumentare="" notevolmente="" il="" numero="" della="" cellula="" basofila="" rispetto="" alla="" mg="" (p=""><{6}}.01). i="" topi="" in="" gc,="" hpgc="" e="" mpgc="" possono="" aumentare="" notevolmente="" il="" numero="" della="" cellula="" pituitaria="" anteriore="" rispetto="" al="" mg="" (p=""><>

Fig. 13. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sui cambiamenti morfologici patologici dell'ipofisi nei topi. I cambiamenti della morfologia patologica sono riportati come foto per ogni gruppo.

Fig. 14. Effetti di GC, HPGC, MPGC e LPGC sul numero di cellule basofile e sulla cellula dell'ipofisi anteriore nei topi. Il numero di cellule basofile e della cellula dell'ipofisi anteriore viene registrato come media ± DS per ciascun gruppo. Rispetto al gruppo modello^☆P < 0.05 e^☆☆P < 0.01, ha utilizzato l'ANOVA con i metodi di analisi dell'LSD.

4. Discussione

Registri delsindrome della menopausanei libri antichi sono principalmente sparsi nella descrizione della "malattia del giglio", della sindrome dello "zigzag", della "melancolia", delle "mestruazioni anormali" e altri (Chen et al., 2015, Ma e Chen, 2015). Per la donna di oltre quarant'anni, lo Yin Qi è stato tagliato a metà; Tiangui si è prosciugato; il Qi del rene è stato gradualmente ridotto; lo Yin Jing era carente; l'equilibrio di Yin e Yang andò perso. La sua performance principale è stata quando compaiono i disturbi mestruali o la menopausa come febbre e sudorazione mareale, irritabilità emotiva, irrequietezza, palpitazioni e insonnia, mal di schiena, edema del viso e degli arti, vertigini, acufene e sensazione della pelle come una formica. Il forte calo del Qi del rene è la ragione intrinseca dell'arrivo o dell'interruzione delle mestruazioni. La carenza renale è la ragione principale delsindrome della menopausa(Tan et al., 2013), e il rene è l'origine della vita umana, chiamata "fondazione congenita". L'ascesa e la caduta dell'essenza renale dominano la crescita e la funzione riproduttiva della maturità e del declino (Wang e Huang, 2011). Gli studi hanno dimostrato che il declino della funzione ovarica è l'essenza della sindrome da insufficienza renale e lo squilibrio dello Yin e dello Yang del rene è strettamente correlato al disturbo della secrezione endocrina e alla disfunzione del sistema nervoso autonomo. Il cambiamento di E2, FSH e LH è un'espressione di carenza renale e squilibrio renale Yin e Yang (Shi et al., 2007). I farmaci tonificanti renali yang vengono utilizzati per regolare il livello ormonale nell'asse ipotalamo-ipofisi ovarico o svolgono un ruolo diretto nella regolazione della funzione ovarica. La medicina cinese moderna ritiene che l'eziologia e la patogenesi disindrome della menopausaè una carenza renale (Razali e Said, 2017).

Lo studio ha utilizzato la resezione completa delle ovaie su entrambi i lati della schiena per riprodurre il modello di topo MPS. Il 90% degli estrogeni delle femmine è stato secreto dall'ovaio e l'ovaio è stato rimosso. Ha causato artificialmente il livello di estrogeni che è stato ridotto all'improvviso e quindi per simulare l'MPS. Questo modello era il modello classico, con un alto tasso di successo, stabilità e affidabilità, e così via. Attraverso attività indipendenti e il numero di stare in piedi, il periodo di latenza del primo ingresso in camera oscura e il numero elettrico, abbiamo osservato il miglioramento della funzione di apprendimento e memoria e la curiosità dell'ambiente fresco da parte della medicina. La funzione ovarica è stata ridotta con la secrezione dell'ormone sessuale diminuita. Inoltre, la gonadotropina è stata aumentata con i pazienti con MPS. I livelli di E2, T nel siero erano inferiori rispetto a quella persona senza sintomi MPS, mentre i livelli di LH, FSH erano significativamente più alti rispetto a quella persona senza sintomi MPS. Pertanto, attraverso la misurazione dei livelli sierici di E2, T, FSH e LH, potrebbero essere utilizzati gli indicatori visivi per l'identificazione della MPS, che riflettono l'effetto dei farmaci sulla malattia della MPS. Lo studio ha mostrato che il declino della funzione ovarica era la connotazione di carenza renale e il cambiamento di E2, T, FSH e LH era una sorta di espressione di carenza renale (Li et al., 2014, Cheng e Tian, ​​2012).Cistancheera attraverso l'effetto di ricostituire il rene per migliorare l'immunità (Zhang et al., 2009, Shareef et al., 2017).

Abbiamo usato il medicinale per il ripristino dei reni per il trattamento della MPS, che era innovativo. I risultati hanno anche mostrato che il PGC potrebbe migliorare il livello dell'ormone del disturbo dei topi MPS e aumentare i livelli di E2, T, LH e FSH nel siero. Nel frattempo, potrebbe migliorare i cambiamenti patologici dell'utero, del timo, della milza e dell'ipofisi dei topi, in accordo con la letteratura secondo cui la carenza renale è fondamentale nella MPS.

5. conclusione

I risultati del nostro studio hanno indicato che il PGC ha avuto un buon effetto terapeutico per MPS: potrebbe aumentare le attività indipendenti e il numero di persone in piedi, il periodo di latenza del primo ingresso nella camera oscura, i visceri del timo, della milza e dell'utero, E2, T come oltre a ridurre il numero elettrico, LH e FSH. I glicosidi feniletanoidi sono stati selezionati inCistancheper l'elevata efficienza e convenienza della ricerca MPS per migliorare il trattamento delsindrome perimenopausale. I suoi standard di qualità sono facili da controllare e favoriscono la ricerca innovativa e lo sviluppo dell'industrializzazione dei farmaci. Fornisce un nuovo modo di pensare per il trattamento della MPS.

Conflitto d'interesse

Gli autori non hanno conflitti di interesse da segnalare.

Ringraziamenti

Questa ricerca è stata supportata dalla National Natural Science Foundation of China (81274154); Team di innovazione scientifica e tecnologica dell'Henan (2012IRTSTHN011); il team di innovazione scientifica e tecnologica della città di Zhengzhou (131PCXTD612); il Laboratorio Medico chiave per la trasformazione della Medicina Cinese della città di Zhengzhou (121PYFZX1820).

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Da: Saudi Pharmaceutical Journal

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