Esplorazione preliminare degli effetti anti-fatica e pro-riproduttivi della Cistanche Tubulosa e screening della sua attività e del meccanismo tonico del rene-Yang e di potenziamento sessuale.

Scopo:

Deficit di rene-yangè un tipo di sintomo del raffreddore causato dal declino dello yang e dell'energia dei reni. Le manifestazioni cliniche sono dolori alla vita e alle ginocchiaperdita di libido. impotenza, ecc., con conseguente declino della funzione riproduttiva maschile, a cui è correlataSindrome dell'affaticamento cronicoEdisfunzione sessuale maschile nella medicina moderna. Cistanches Herbahasè diventato uno dei primi medicinali selezionati pertonificante dei renia causa del suofunzioni di rinvigorimento dello yang dei reniEbeneficiando dell'essenza e del sangue. È anche la medicina tradizionale cinese più frequentemente utilizzata nelle antiche prescrizioni cinesi per aumentare la forza. Moderni studi farmacologici lo hanno dimostratoCistanche tubulose(Schenk) R. Wight (C. Tubulosa) può promuovere il rilascio di ormoni correlati nel corpo regolando la funzione dell'asse ipotalamo-ipofisi-ghiandola bersaglio, mantenendo l'omeostasi secretoria del corpo, migliorando l'immunità e l'affaticamento e quindi migliorando la capacità riproduttiva dei pazienti. Pertanto, questo esperimento inizia con la sindrome da stanchezza cronica e la disfunzione sessuale maschile, che sono strettamente correlate alla carenza di rene-yang. Attraverso la creazione di due tipi di modelli di fatica dei modelli di danno centrale e sportivo e riproduttivo di ratti e topi, il metodo di combinare l'osservazione comportamentale e il rilevamento dei livelli ormonali correlati nella circolazione è stato utilizzato per schermare l'attività farmacodinamica degli oligosaccaridi di C. tubulosa (Oligose), polisaccaridi di C. tubulosa (Glycan) e glicosidi feniletanolo daC. tubulosa(CPhG). E ulteriormente combinato con esperimenti in vivo e in vitro per esplorare inizialmente il potenziale meccanismo attivo e le caratteristiche terapeutiche delle sue principali parti attive per promuovere la riproduzione, per fornire una base sperimentale per la divulgazione di C.fubulosa e il successivo sviluppo di farmaci.

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Metodi:

1. Screening delle parti con effetto antifatica di C. tubulosa

L'esperimento sulla fatica centrale: i topi sono stati divisi casualmente in gruppi di controllo, di privazione del sonno (SD), di oligosi, di glicani e di CPhGs. È stato preparato un modello di fatica centrale utilizzando la privazione del sonno per 48 ore, seguita da un labirinto a otto bracci e da un esperimento di evitamento del buio per testare le capacità di apprendimento e memoria dei topi, e un test radioimmunologico è stato utilizzato per determinare la serotonina 5- idrossitriptamina ({ {3}}HT), norepinefrina (NE), epinefrina (E) nella corteccia cerebrale e nell'ipotalamo, nonché livelli plasmatici dell'ormone adrenocorticotropo (ACTH), dell'ormone di rilascio della corticotropina (CRH) e del cortisolo (CORT). L'esperimento sull'affaticamento da esercizio: i topi sono stati divisi casualmente in gruppi di controllo, nuoto forzato (FS), oligosio, glicani e CPhG. Il modello di fatica da esercizio è stato preparato nuotando forzato per 9 giorni, quindi i topi sono stati sottoposti a un esperimento di esaurimento del nuoto con carico per valutare la loro resistenza e il glicogeno epatico, la malondialdeide (MDA) e la superossido dismutasi (SOD) nel fegato. Sono stati misurati i livelli di glicogeno muscolare, succinato deidrogenasi (SDH), acido lattico (LD), azoto ureico nel sangue (BUN), lattato deidrogenasi (LDH), MDA. Sulla base dei metodi di cui sopra, vengono esaminati gli effetti antifatica di tre diverse parti di estrazione di C. tubulosa.

2. Screening delle parti che promuovono l'effetto riproduttivo di C. tubulosa

Per facilitare la raccolta delle caratteristiche rilevanti della carenza di rene-yang, i ratti sono stati utilizzati come oggetti sperimentali. I ratti sono stati divisi casualmente in gruppi di controllo, modello di danno riproduttivo (modello), oligosio, glicano e CPhG. Iniezione intramuscolare di idrocortisone per 14 giorni per preparare un modello di danno riproduttivo nel ratto, misurando la latenza di erezione, gli indicatori della capacità di accoppiamento (latenza di cattura/eiaculazione, numero di catture/eiaculazioni), peso umido dell'organo e contenuto di fruttosio nel plasma seminale. valore plasmatico di adenosina monofosfato ciclico/guanosina monofosfato ciclico (cAMP/cGMP), livelli sierici di ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH), ormone follicolo-stimolante (FSH), ormone luteinizzante (LH), estradiolo (E2) e testosterone (T). La colorazione con ematossilina-eosina (HE) è stata utilizzata per osservare i cambiamenti patologici del testicolo. Sulla base dei metodi di cui sopra, sono stati esaminati gli effetti di tre diverse parti estraenti del danno riproduttivo di C. tubulosa.

3. Valutazione dell'efficacia di diverse dosi di CPhG nel promuovere la riproduzione

Per risparmiare la quantità di farmaci e tenere conto della completezza dei tipi di anticorpi, come soggetti sperimentali sono stati selezionati i topi. I topi sono stati divisi casualmente in Controllo, Modello, testosterone propionato (TP) positivo al farmaco e CPhG a bassa dose (CPhGs-1), dose media di CPhG (CPhGs-m), dose alta di CPhG ( gruppi CPhGs-h). L'idrocortisone è stato somministrato per via intragastrica per 14 giorni per preparare un modello murino di danno riproduttivo e sono stati rilevati la latenza di erezione, gli indicatori della capacità di accoppiamento (latenza di cattura/eiaculazione, numero di catture/eiaculazioni), il peso umido degli organi, l'ormone LH sierico e i livelli .E cambiamenti patologici del testicolo sono stati osservati mediante colorazione con HE. Sulla base dei metodi di cui sopra, l'efficacia dei CPhG a livelli bassi, medi e alti è stata valutata dagli aspetti della morfologia dei testicoli e della funzione riproduttiva del topo

4. Meccanismi in vivo e in vitro di aumento dei CPhG

Livello T e promozione della riproduzione Il metodo Western blot (WB) è stato utilizzato per rilevare la proteina regolatrice acuta steroidogenica (StAR), l'enzima di scissione della catena laterale del colesterolo del citocromo P450 (P450scc / CYP11A1) e i livelli di espressione della 3p-idrossisteroide deidrogenasi (3p-HSD) nella sintesi del T. percorso del tessuto testicolare. La colorazione con immunofluorescenza (IF) è stata utilizzata per l'analisi qualitativa e quantitativa per verificare ulteriormente l'effetto promotore dei CPhG sull'espressione di 3B-HSD nel testicolo. Allo stesso tempo, il modello cellulare a bassa espressione di CYP11A1 costruito con siRNA trasfettato in vitro è stato successivamente intervenuto con diverse concentrazioni di: soluzione CPhGs (50, 100, 200 ug/mL) per determinare il livello di CYP11A1 mediante WB. Verificare se i CPhG regolano direttamente il CYP11A1 per promuovere la biosintesi del T.

Risultati:

1. Screening delle parti con effetto antifatica di C. tubulosa

Le tre diverse parti di estrazione di C. tubulosa hanno un certo effetto di miglioramento sulla capacità di apprendimento e di memoria dei topi affaticati. Tra questi, l'Oligosio può prolungare significativamente il periodo di incubazione e ridurre il numero di errori nell'esperimento di evitamento dell'oscurità, abbreviare il tempo per completare il labirinto a otto bracci e ridurre il numero di errori, raggiungere i livelli di 5-HT , NE ed E nell'ipotalamo e nella corteccia cerebrale dei topi modello di fatica centrale sono inferiori a quelli del gruppo SD e i livelli di CRH, ACTH e CORT sono vicini al livello normale nella circolazione sanguigna. Allo stesso tempo, l'Oligosio può prolungare significativamente il tempo di esaurimento del nuoto nei topi modello di fatica da sforzo, in cui può ridurre significativamente l'accumulo dei metaboliti plasmatici LD, BUN e MDA. Inoltre, l'Oligosio può aumentare significativamente le riserve di glicogeno epatico e muscolare. . Tuttavia, il glicano da solo ha un effetto significativo sul miglioramento degli indicatori di fatica sportiva e i CPhG non hanno alcun effetto evidente. Pertanto, i risultati di cui sopra suggeriscono che l'Oligosio ha l'effetto migliore nel migliorare l'affaticamento centrale e da sforzo nei topi

2. Screening delle parti che promuovono l'effetto riproduttivo di C. tubulosa

Le tre diverse parti di estrazione di C. tubulosa hanno determinati effetti sul comportamento sessuale e sugli indici biochimici del sangue dei ratti modello di danno riproduttivo. I CPhG hanno l’effetto più significativo. La prestazione specifica è: i CPhG possono ripristinare il valore plasmacAMP/CGMP, che è una delle caratteristiche del deficit di rene-yang, per ridurre significativamente l'erezione, la latenza di cattura e aumentare il numero di catture. Aumentando il peso umido dei testicoli e delle vescicole seminali e il contenuto di fruttosio e zinco nel plasma seminale. Può aumentare significativamente il livello di T nel siero, mantenere la stabilità dei livelli di FHSGnRH, E2 e LH e migliorare significativamente la morfologia patologica dei testicoli. Mentre il glicano regola solo i livelli di FSH, LH ed E2, l'effetto dell'oligosio non è quindi molto evidente , i risultati sperimentali di cui sopra mostrano che: I CPhG hanno l'effetto migliore nel migliorare la capacità riproduttiva dei ratti.

3. Valutazione dell'efficacia di diverse dosi di CPhG nel promuovere la riproduzione

Hanno due livelli di dose di CPhG (145, 289 mg/kg).alcuni effetti sulla funzione erettile, capacità di accoppiamento, peso umido dell'organo, livelli sierici di ormoni LH e T e cambiamenti della morfologia patologica testicolare nei topi modello di danno riproduttivo. I CPhG a basso dosaggio (72 mg/kg) non hanno alcun effetto protettivo evidente sul danno riproduttivo causato dall’idrocortisone. I CPhG ad alte dosi hanno effettivamente ridotto la latenza di erezione, cattura ed eiaculazione dei topi modello e aumentato il numero di catture ed eiaculazioni. Allo stesso tempo, alte dosi di CPhG possono aumentare il peso umido dei testicoli, dell'epididimo, delle vescicole seminali e del pene e aumentare i livelli di T e del suo ormone a monte LH, migliorando significativamente la patologia del testicolo. Il TP positivo del farmaco può migliorare significativamente il comportamento sessuale dei topi modello di danno riproduttivo, ma ha aumentato bruscamente il livello di T nel sangue dei topi, superando di gran lunga il livello normale, e non c'è stato alcun evidente effetto di miglioramento sulla riduzione del livello di LH causato dall'idrocortisone , né potrebbe alleviare lo stato di danno patologico del testicolo. I risultati sperimentali di cui sopra suggeriscono che i CPhG possono migliorare la capacità riproduttiva dei topi aumentando il livello di T, ed è quantitativamente dipendente. L'effetto ad alte dosi è il migliore, la manifestazione principale è un moderato aumento dei livelli circolanti di T nei topi con problemi riproduttivi e il suo meccanismo d'azione è diverso da quello del TP.

4. Meccanismi in vivo e in vitro dei CPhG per aumentare il livello di T e promuovere la riproduzione

Esperimenti in vivo, i risultati del WB hanno mostrato che i CPhG possono aumentare significativamente l'espressione degli enzimi produttori di steroidi CYP11A1 e deidrogenasi 3P-HSD ​​nella via della Tsintesi nel tessuto testicolare, ma non è un effetto evidente per la proteina di trasporto StARA, un farmaco di controllo positivo. TP ha inibito l'espressione di CYP11A. L'IF è stato ulteriormente utilizzato per il rilevamento qualitativo e quantitativo dell'espressione 3p-HSD. I risultati erano coerenti con quelli mostrati in WB. L'espressione di 3p-HSD era significativamente aumentata dopo il trattamento con CPhG ad alte dosi. Esperimenti in vitro, i risultati del WB hanno mostrato che i CPhG (50 ug/mL) possono aumentare significativamente l'espressione di CYPl1A1 nelle cellule normali. Rispetto a ciò, i CPhG sono stati somministrati dopo la trasfezione di siRNA, i CPhG possono ancora aumentare significativamente l'espressione di CYP11Al, ma l'effetto è alquanto ridotto. I risultati di cui sopra indicano che i maiali possono regolare direttamente l'enzima chiave CYP11A1 nel percorso di sintesi del T per promuovere l'espressione del suo 3-HSD a valle, aumentando così il livello del T.

Conclusioni:

Esaminare e valutare l'efficacia di oligosio, glicani e CPhG in modelli animali per gli effetti anti-fatica e riproduttivi. I risultati hanno mostrato che l'oligosio può regolare il rilascio di neurotrasmettitori centrali, mantenere livelli stabili di ormoni nel sangue correlati all'asse ipotalamo-ipofisi-surrene, migliorare la capacità di stoccaggio del glicogeno nel fegato e nei muscoli scheletrici e ridurre l'accumulo di metaboliti. Inoltre, migliora la memoria di apprendimento e la capacità di esercizio dei topi modello di fatica. I CPhG possono proteggere il testicolo dai danni dell'idrocortisone e aumentare il peso umido del testicolo e dei suoi organi sessuali accessori. mantenere stabili i livelli degli ormoni nel sangue legati all’asse ipotalamo-ipofisi-gonadi. Aumenta significativamente l'espressione degli enzimi produttori di steroidi CYP11A1 e deidrogenasi 3p-HSD nella reazione enzimatica della sintesi del T dopo che il colesterolo entra nei mitocondri regolando direttamente il livello di CYP1lAI nella via di sintesi del T. promuovendo così la biosintesi del T, migliorando la capacità riproduttiva dei topi e svolgendo il ruolo di tonificare il rene-yang.

PAROLE CHIAVE:glicosidi feniletanoidi, polisaccaridi, oligosaccaridi,antistanchezza, Cistanche tubulose, carenza di rene-yang, danni riproduttivi

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