La stabilizzazione simultanea del citoscheletro di actina in più cellule specifiche del nefrone protegge il rene da diverse lesioni Ⅱ

La stabilizzazione farmacologica dell’actina corticale tramite la dinamina migliora l’AKI.

La perdita dell’orletto a spazzola dei tubuli renali dovuta al disassemblaggio della corteccia di actomiosina è una caratteristica predominante dell’AKI2,29. Un farmaco antitumorale ampiamente utilizzato che spesso porta all’AKI è il cisplatino30. Una conseguenza fondamentale del danno da cisplatino nelle cellule renali è un aumento del livello delle specie reattive dell’ossigeno (ROS).31. Inoltre, l’aumento dei livelli di ROS porta ad una diminuzione della dinamica dell’actina32, che provoca la rottura della membrana mitocondriale; questo ulteriormenteesacerba i ROSproduzione33,34. Pertanto, abbiamo esaminato se la stimolazione farmacologica della dinamina's la capacità di reticolazione è sufFiefficace per contrastare il danno indotto dal cisplatino.

Come visto prima dei 35 anni, il cisplatino ha ridotto l'altezza delle cellule MDCK, il numero e la lunghezza dei microvilli e ha influenzato la polarità cellulare senza influenzare l'endocitosi (Tabella 1, Figura 7a-d supplementare). L'analisi TEM ha suggerito che questi fenotipi potrebbero essere attribuiti alla perdita di F-actina indotta dal cisplatino (Fig. 4a). L'aggiunta di Bis-T- 23 prima del cisplatino ne ha annullato gli effetti stabilizzando la corteccia di actomiosina contro il danno indotto dal cisplatino (Fig. 4a-c). Fenotipi simili sono stati osservati nei suinitubulo prossimale del rene(LLC-PK1) celle (Figura 8 supplementare). Insieme, questi dati forniscono la prova che Bis-T-23 preserva la corteccia di actomiosina dal disassemblaggio indotto dal cisplatino.

In un approccio complementare fisiologicamente rilevante36, Bis T-23 ha contrastato la capacità del cisplatino di ridurre la resistenza elettrica transepiteliale (TER) misurata attraverso il monostrato epiteliale vivo utilizzando un sistema di coltura transepiteliale (Fig. 4d). Poiché TER misura l'integrità delle giunzioni strette nella coltura cellulare, questi dati stabiliscono ulteriormente l'effetto benefico di Bis-T-23 sull'integrità delle cellule epiteliali in caso di lesione.

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Poiché la dinamica alterata dell'actina può migliorare ulteriormente la produzione di ROS, abbiamo successivamente esaminato se la stabilizzazione della rete di actina da parte di Bis-T-23 può contrastare lo stress ossidativo nelle cellule danneggiate dal cisplatino. Abbiamo scelto di valutare lo stato dei carbonili della biomolecola cellulare, un biomarcatore stabile del danno ossidativo prodotto da alti livelli di ROS, utilizzando il nostro sensore fluorescente TFCH37 recentemente sviluppato (Fig. 4e). In effetti, l'aggiunta di Bis-T-23 prima del cisplatino ha parzialmente diminuito l'aumento della carbonilazione indotto dal cisplatino (Fig. 4f). Tendenze simili riguardo alla carbonilazione sono state osservate dopo il trattamento con Bis-T-23 e il depolimerizzatore di actina LatA (Figura 9a supplementare). Insieme, questi dati forniscono la prova che la stabilizzazione delle reti di actina può contrastare il circolo vizioso tra lo stress ossidativo e lo stato dell’actina nelle cellule danneggiate.

Un ratto ex vivomodello renaleè stato successivamente utilizzato per visualizzare la preservazione guidata dal BisT-23-della corteccia di actomiosina sul bordo della spazzola. Il cisplatino ha indotto una significativa perdita di colorazione dell'F-actina sul bordo della spazzola dei tubuli prossimali (Fig. 4g). Una perdita simile di F-actina all'orletto a spazzola all'insorgenza di un grave danno da ischemia-riperfusione è stata recentemente osservata utilizzando l'imaging intravirale38. Il pretrattamento con Bis-T-23 proteggeva parzialmente la perdita di F-actina indotta dal cisplatino sull'orletto a spazzola dei tubuli renali (Fig. 4g), dimostrando ulteriormente l'effetto di Bis-T-23 sull'actomiosina corteccia sulla membrana apicale delle cellule epiteliali renali. Come visto nella coltura cellulare, Bis-T-23 non ha influenzato l'endocitosi nelle fette di tessuto (Figura 9b supplementare), dimostrando ulteriormente che Bis-T-23 non influenza il ruolo della dinamina nell'endocitosi nei reni tubuli prossimali.

Infine, abbiamo esaminato l'effetto renoprotettivo di Bis-T-23 in un modello murino di AKI39 indotto da cisplatino. Ai topi BL6 è stato iniettato Bis-T-23 o DMSO una volta al giorno a partire da 24 ore prima dell'iniezione di cisplatino. Come visto in precedenza40, i livelli di creatinina sierica (SCr) e di azoto urinario nel sangue (BUN) sono aumentati significativamente 3 giorni dopo l'iniezione di cisplatino (Fig. 4h). Il DMSO ha mostrato una lieve protezione renale come visto in precedenza41, grazie alla sua capacità di eliminare gli ossidanti42. La somministrazione giornaliera di Bis-T-23 ha sovraperformato il DMSO per quanto riguarda la protezione renale (Fig. 4h). Poiché tutti gli animali sono stati sacrificati il ​​giorno 5 a causa della tossicità sistemica del cisplatino (Figura 9c supplementare), non abbiamo potuto esaminare i benefici a lungo termine di Bis-T-23 sufunzione renale. Insieme, questi studi dimostrano in modo convincente che preservare l’integrità delle cellule renali attraverso la stabilizzazione della corteccia di actomiosina sulla membrana apicale contrasta la nefrotossicità indotta dal cisplatino.

La stabilizzazione delle reti di actina contrasta l’AKI indotto dallo ioexolo.

Sebbene l’esatto meccanismo dell’AKI indotto dal mezzo di contrasto non sia completamente decifrato, rimane una delle cause principali dell’AKI acquisito in ospedale43. Fisiologicamente, il mezzo di contrasto aumenta il carico osmotico, diminuisce il flusso sanguigno renale e induce la costrizione dell'arteria renale44. A livello cellulare, i ROS sono un attore fondamentale in contrasto con l’AKI45 indotto dal colorante. Dato il ruolo dei ROS nella regolazione del citoscheletro di actina e la nostra ipotesi che la stabilizzazione della corteccia di actomiosina possa contrastare il danno ossidativo, abbiamo esaminato gli effetti di Bis-T-23 su un AKI46 indotto da colorante di contrasto, ioexolo.

Gli effetti cellulari dello ioexolo sono stati esaminati nell'uomotubulare prossimale del rene(HK-2) celle. Come visto per il cisplatino, lo ioexolo ha indotto la perdita di F-actina, che è stata accompagnata da un aumento significativo del livello di molecole carbonilate, una conseguenza irreversibile di elevati livelli di ROS (Fig. 5a, b). Entrambi i fenotipi sono stati parzialmente neutralizzati dal pretrattamento con Bis-T-23, stabilendo ulteriormente la sinergia tra lo stato del citoscheletro di actina e il livello di stress ossidativo in queste cellule. Complementare ai test cellulari, la somministrazione giornaliera di Bis T-23 ha preservato la funzione renale in base ai livelli di Scr e BUN nei topi BL6 stimolati con colorante di contrasto (Fig. 5c). Una risposta molto ambita di miglioramento del tasso di sopravvivenza è stata osservata anche negli animali che hanno ricevuto Bis-T-23 insieme al colorante di contrasto (Fig. 5d).

Abbiamo recentemente dimostrato che elevati livelli sierici del recettore solubile dell'attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi (suPAR) sensibilizzano il rene all'AKI47 indotto da iohexolo. Successivamente abbiamo studiato se la protezione mediata dalla dinamina delle cellule tubulari può anche fornire protezione renale nei topi BL6 che esprimono alti livelli di suPAR dal tessuto adiposo (suPAR-Tg)48. Come previsto47, i topi suPAR-Tg hanno mostrato una diminuzione della funzionalità renale 24-48 ore dopo l'iniezione di iohexolo (Fig. 5e). Al contrario, gli animali che hanno ricevuto una dose giornaliera di Bis-T-23 hanno mostratofunzione renale significativamente migliorenonostante la sfida del colorante a contrasto (Fig. 5e). In particolare, è stata osservata una diminuzione significativa del tasso di mortalità nella coorte di topi che ha ricevuto Bis-T-23 (Fig. 5f). Come anticipato, l'entità del danno ossidativo (carbonilazione della biomolecola) nelle cellule HK-2 trattate contemporaneamente con Bis-T-23 era significativamente inferiore rispetto alle cellule che avevano ricevuto solo una combinazione di suPAR e Ioexolo (Fig. 9d).

Fig. 4 L'agonista della dinamina protegge i tubuli renali dal danno indotto dal cisplatino stabilizzando la corteccia di actomiosina sulla membrana apicale. un'immagine PR-EM del lamellipodio in cellule MDCK trattate con DMSO (0,1%) o Bis-T-23 (5 µM, 0,1% DMSO) per 1 ora prima all'aggiunta di cisplatino (35 µM) per 23 ore. La corteccia dell'actomiosina era colorata di giallo. b Immagini ad ingrandimento maggiore delle regioni inscatolate in (a). Livelli distinti di spessore sono codificati a colori. I pannelli superiore e inferiore mostrano reti formate rispettivamente da filamenti più corti e filamenti più lunghi. c Grafico raffigurante la densità dei filamenti di actina sul bordo anteriore (riquadro giallo in (a); 18–20 aree contate). d Grafico a barre raffigurante la resistenza elettrica transepiteliale relativa (%) in cellule MDCK vive trattate come indicato in (a) ad eccezione delle concentrazioni di cisplatino (50 µM) e Bis-T-23 (30 µM) (12 letture per campione). I dati sono tracciati come media ± SEM (***P <0,001, ****P <0,0001, test t a due code non accoppiato). ns, non significativo. e Rappresentazione schematica del rilevamento della carbonilazione indotta dallo stress ossidativo mediante il test TFCH. f Immagini che mostrano i livelli di carbonili della biomolecola determinati da TFCH. Le cellule sono state trattate come descritto in (a) ad eccezione della concentrazione di cisplatino (5 µM). Barra della scala, 20 µm. Grafico raffigurante i livelli relativi di fluorescenza TFCH associati ai carbonili della biomolecola per cellula (punti dati (n)=83–116; ogni punto rappresenta l'intensità media di 4–9 cellule). g Rattofette di renecolorato con anticorpi anti-actina.Fette di renesono stati incubati in tampone, DMSO (0,1%) o Bis-T-23 (30 µM) per 1 ora prima di aggiungere cisplatino (200 µM) o tampone per 8 ore. Le regioni quadrate bianche sono state ingrandite. Barre di scala, 40 µm. Grafico che mostra l'intensità della F-actina al bordo della spazzola per tubulo (100-236). Per c, f, g, i dati sono tracciati come media ± SD (i valori P sono riportati nella Figura, ANOVA unidirezionale con il test di confronto multiplo di Tukey). h Diagrammi a punti di dispersione che mostrano l'AKI indotto dal cisplatino determinato dal livello di azoto ureico nel sangue (BUN) o di creatinina sierica (SCr). Agli animali è stato iniettato DMSO (1%) o Bis-T-23 (20 mg/kg) (n=12, per condizione per SCr; n=17, per condizione per BUN) una volta al giorno iniziando 24 ore prima dell’iniezione di cisplatino (15 mg/kg). Le misurazioni sono state eseguite nei tempi indicati. I dati sono tracciati come media ± SEM (i valori P sono riportati nella Figura, test t a due code non accoppiato). ns, non significativo.

A differenza del danno cellulare mediato dai ROS causato dal cisplatino e dallo ioexolo, il suPAR promuove il danno cellulare tubulare in parte aumentando il tasso di consumo di ossigeno (OCR)47. Per collegare l'effetto fisiologico di Bis-T-23 nei topi transgenici suPAR al suo effetto sul metabolismo cellulare, abbiamo esaminato se la stabilizzazione della rete di actina tramite la dinamina riduce l'OCR guidato da suPAR. L'OCR è stato misurato in tempo reale nelle cellule HK-2 in condizioni basali e in risposta a iniezioni sequenziali di inibitori mitocondriali utilizzando un analizzatore di flusso extracellulare Seahorse XFe24 (Fig. 5g). L'aggiunta di un anticorpo anti-suPAR o Bis-T-23 ha migliorato gli aumenti guidati da suPAR nella respirazione basale mitocondriale, nella produzione di ATP, nella frequenza massima di respirazione e nella capacità respiratoria di riserva (Fig. 5f). Questi dati dimostrano gli effetti positivi di Bis-T-23 sul metabolismo cellulare in caso di lesione. Insieme, questi studi affermano ulteriormente la fattibilità della protezione contro diversi tipi di AKI e quindi del miglioramento del tasso di sopravvivenza nei modelli di roditori tramite la dinamina come proxy.

Stabilizzazione simultanea dell'actina incellule renali distinteattenua il danno nefronale. Abbiamo precedentemente dimostrato che l'attivazione farmacologica della polimerizzazione dell'actina guidata dalla dinamina ha ripristinato la struttura e la funzione dei podociti in diversi modelli murini di CKD12. In questo studio, abbiamo dimostrato la capacità della dinamica di preservare l'integrità delle cellule tubulari in caso di danno acuto reticolando il citoscheletro di actina. Insieme, queste intuizioni ci hanno portato a immaginare la possibilità di contrastare simultaneamente sia il danno glomerulare che quello tubulare, prendendo di mira farmacologicamente la dinamina.

Per verificare questa ipotesi, abbiamo esaminato se Bis-T-23 potesse ritardare la perdita difunzione renalenel modello murino della sindrome di Alport (AS). AS è una forma ereditata diinsufficienza renale progressivaa causa di mutazioni nei geni COL4A3, COL4A4 o COL4A5 che insieme codificano il collagene di tipo IV, un componente importante della membrana basale glomerulare (GBM)49,50. Sebbene il difetto primario nell'AS sia l'eliminazione del processo del piede e la proteinuria.

Per verificare questa ipotesi, abbiamo esaminato se Bis-T-23 potesse ritardare la perdita difunzione renalenel modello murino della sindrome di Alport (AS). AS è una forma ereditata diinsufficienza renale progressivaa causa di mutazioni nei geni COL4A3, COL4A4 o COL4A5 che insieme codificano il collagene di tipo IV, un componente importante della membrana basale glomerulare (GBM)49,50. Sebbene il difetto primario nell'AS sia l'eliminazione del processo del piede e la proteinuria.

Discussione Dall'identificazione delle interazioni dirette dinamina-actina10, un numero crescente di prove sta stabilendo che questa GTPasi è uno dei principali regolatori del citoscheletro di actina nella cellula. A differenza degli ABP canonici, i meccanismi attraverso i quali la dinamina influenza l'actina sono altamente versatili e specifici per il tipo di cellula. Ciò è dovuto alla combinazione dei molteplici stati di oligomerizzazione della dinamica e alla sua capacità di legare l'F-actina mediante due diversi siti di legame. Le interazioni dell'F-actina con gli anelli e le eliche dinaminiche attraverso il suo PRD C-terminale danno luogo a fasci e iper-fasci di actina, che sono stati implicati nella formazione di filopodi56 e sporgenze di membrana durante la fusione dei mioblasti28. Le interazioni tra il dominio medio della dinamica e la F-actina sono state implicate nella regolazione delle reti di actina nella lamellipodia26, nell'organizzazione del citoscheletro postsinaptico e nello sviluppo della giunzione neuromuscolare27, nella rigidità del fascio di actina negli endosomi durante la fusione dei mioblasti25 e nella formazione dei processi del piede dei podociti12. Mentre la formazione dei processi del piede è guidata dalla polimerizzazione dell'actina stimolata dalla dinamina, questo studio suggerisce che il meccanismo molecolare attraverso il quale la dinamina influenza questi altri processi guidati dall'actina potrebbe essere in parte dovuto alla sua capacità di reticolare la F-actina in reti ramificate . Il nostro attuale studio espande il ruolo della formazione della rete dipendente dalla dinamina per includere la formazione della corteccia di actomiosina sulla membrana apicale delle cellule epiteliali polarizzate e l'instaurazione della rigidità cellulare.

Discussione Dall'identificazione delle interazioni dirette dinamina-actina10, un numero crescente di prove sta stabilendo che questa GTPasi è uno dei principali regolatori del citoscheletro di actina nella cellula. A differenza degli ABP canonici, i meccanismi attraverso i quali la dinamina influenza l'actina sono altamente versatili e specifici per il tipo di cellula. Ciò è dovuto alla combinazione dei molteplici stati di oligomerizzazione della dinamica e alla sua capacità di legare l'F-actina mediante due diversi siti di legame. Le interazioni dell'F-actina con gli anelli e le eliche dinaminiche attraverso il suo PRD C-terminale danno luogo a fasci e iper-fasci di actina, che sono stati implicati nella formazione di filopodi56 e sporgenze di membrana durante la fusione dei mioblasti28. Le interazioni tra il dominio medio della dinamica e la F-actina sono state implicate nella regolazione delle reti di actina nella lamellipodia26, nell'organizzazione del citoscheletro postsinaptico e nello sviluppo della giunzione neuromuscolare27, nella rigidità del fascio di actina negli endosomi durante la fusione dei mioblasti25 e nella formazione dei processi del piede dei podociti12. Mentre la formazione dei processi del piede è guidata dalla polimerizzazione dell'actina stimolata dalla dinamina, questo studio suggerisce che il meccanismo molecolare attraverso il quale la dinamina influenza questi altri processi guidati dall'actina potrebbe essere in parte dovuto alla sua capacità di reticolare la F-actina in reti ramificate . Il nostro attuale studio espande il ruolo della formazione della rete dipendente dalla dinamina per includere la formazione della corteccia di actomiosina sulla membrana apicale delle cellule epiteliali polarizzate e l'instaurazione della rigidità cellulare.

Questo è ormai assodatoCKD e AKI, sebbene meccanicamente distinti, sono strettamente interconnessi, con l'AKI riconosciuto come un fattore di rischio per lo sviluppo e la progressione della malattia renale cronica66. Ad oggi, l'AKI rimane non farmacologica67. Ciò è particolarmente rilevante alla luce dell’attuale pandemia di coronavirus 2019 (COVID-19), in cui i pazienti ospedalizzati con COVID-19 e un livello plasmatico suPAR elevato sviluppano AKI a tassi allarmanti. Livelli elevati di suPAR sono stati collegati sia all’AKI47 che alla CKD69, rafforzando ulteriormente il legame molecolare tra questi duemalattie renali distinte. Pertanto, sta diventando sempre più essenziale sviluppare terapie in grado di proteggere da una serie di danni renali su più tipi di cellule70. Qui riportiamo l'effetto renoprotettivo di un agonista della dinamina in un modello genetico di AS, che presenta lesioni sia ai podociti che alle cellule tubulari. Il nostro studio stabilisce un approccio completo per lo sviluppo di nuove terapie che interagiscono con la rete di actina in più tipi di cellule all'interno del nefrone e trattano una miriade dimalattie renaliindipendentemente dal luogo della lesione.

Metodi Coltura cellulare. Cellule MDCK (rene canino Madin-Darby) (ATCC CCL-34) e cellule del dotto collettore midollare interno di topo (mIMCD-3) (ATCC CRL-2123) sono state coltivate in DMEM/F12 (ThermoFisher Scientific) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS) e 1X antibiotico-antimicotico (penicillina, streptomicina e amfotericina B; Gibco). Le cellule LLC-PK1 (Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1) (ATCC CL- 101) sono state coltivate in DMEM con 4,5 g/L di glucosio, L-glutammina, piruvato di sodio (Corning), 10% FBS e 1X Antibiotico -Antimicotico. Le cellule MDCK e LLC-PK1 sono state coltivate rispettivamente per ~ 24 ore e ~ 72 ore prima di iniziare gli esperimenti. Hong Kong-2 (Rene umano 2) cellule tubulari prossimali (ATCC CRL-2190) sono state coltivate in terreno F12 di DMEM/Ham (Corning) contenente 10% FBS, 100 U/ml di penicillina e 100 ug/ml di streptomicina quando utilizzati per esperimenti bioenergetici. Per analizzare lo stato del citoscheletro di actina e della carbonilazione cellulare, le cellule HK-2 sono state coltivate in DMEM F-12 (ATCC) contenente il 10% di FBS, 1X antibiotico-antimicotico e 1X ITS (insulina, transferrina e selenito di sodio) supplemento per terreni liquidi (Sigma-Aldrich). Per stabilire la linea cellulare knock-down della dinamina 2 (Dyn2) (mIMCD Dyn2KD), le cellule sono state infettate con lentivirus portatori di shRNA che codifica il gene DNM2 (5′CGGCCTAGTGGACATGACAATGAACTCGAGTTCATTGTCATGTC CACTAGGTTTTTG3')10 o shRNA codificato (Sigma-Aldrich) in terreni completi contenenti polibrene (8 mg/ml). Dopo 24 ore, i mezzi sono stati sostituiti a giorni alterni con mezzi contenenti puromicina per selezionare trasfettanti stabili. L'entità dell'abbattimento di Dyn2 è stata valutata mediante Western Blot. Tutte le linee cellulari sono state coltivate su vetrini di vetro rivestiti di collagene.

Fig. 6 L'attivazione farmacologica della dinamina prende di mira simultaneamente il citoscheletro di actina in due cellule distinte del nefrone. a Topi Col4a3−/− sono stati iniettati DMSO (1%) o Bis-T-23 (20 mg/kg) una volta al giorno quando avevano 42 giorni (giorno 0). È stato utilizzato un numero uguale di topi trattati con DMSO o Bis-T-23 (n=10 per ACR; n=8 per BUN). Il diagramma a punti di dispersione mostra il livello di proteinuria (rapporto albumina/creatinina, ACR) elesione renaledeterminato dal livello di BUN. Barre di errore, media ± DS (i valori P sono riportati nella Figura, test t a due code non accoppiato). b È stato eseguito il test Log-Rank (Mantel-cox) per analizzare le curve di sopravvivenza dei due gruppi di trattamento. c Istopatologia rappresentativa del rene determinata mediante colorazione con acido periodico di Schiff (PAS) e H&E su campioni ottenuti da topi Col4a3−/− descritti in (a). Gli animali avevano 62 giorni (giorno 20 del trattamento con Bis-T-23 o DMSO). La glomerulopatia negli animali trattati con Col4a3−/− DMSO era caratterizzata da espansione mesangiale osservata sulla colorazione PAS (freccia nera), aumento della cellularità e aumento dello spazio di Bowman. I cambiamenti degenerativi nei tubuli includevano la formazione di cilindri (*) e la presenza di sclerosi tubulare. Il trattamento con Bis-T-23 per 20 giorni ha parzialmente preservato la morfologia dei glomeruli (diminuita espansione mesangiale) e dei tubuli (assenza di cilindri). d Schemi del nefrone (immagine accreditata al National Institute of Diabetes and Digestive andMalattie renali, National Institutes of Health) e il meccanismo coinvolto nella protezione renale regolata dalla dinamica. Nelle cellule epiteliali polarizzate dei tubuli renali, la dinamina stabilisce la polarità cellulare reticolando i filamenti di actina in reti (questo studio). La capacità della dinamina di reticolare i filamenti in fasci è implicata nella formazione dei microvilli. Il danno acuto aumenta la produzione di ROS, altera il metabolismo cellulare e perturba la dinamica dell'actina, che aumenta ulteriormente la produzione di ROS portando a un danno ossidativo cellulare più pronunciato (carbonilazione della biomolecola). Un aumento della capacità di reticolazione della dinamina nella corteccia dell'actomiosina preserva l'integrità delle cellule tubulari, che le protegge parzialmente dall'insulto ossidativo. Inoltre, la dinamina è essenziale per la struttura e la funzione dei podociti. L'attivazione farmacologica della dinamina ripristina i processi del piede inducendo la polimerizzazione dell'actina. Il nostro studio mostra che l'attivazione farmacologica dell'oligomerizzazione della dinamina mostra un duplice effetto benefico sul nefrone prendendo di mira due distinti meccanismi molecolari: conservazione dell'integrità dei podociti (polimerizzazione dell'actina) e delle cellule tubulari renali (reticolazione dei filamenti di actina).

Riferimenti

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5. Vicente-Manzanares, M., Ma, X., Adelstein, RS & Horwitz, AR La miosina non muscolare II è al centro dell'adesione e della migrazione cellulare.Naz. Rev. Mol. Biolo cellulare. 10, 778–790 (2009). 

6. Chugh, P. et al. L’architettura della corteccia di actina regola la tensione superficiale cellulare.Naz. Biolo cellulare. 19, 689–697 (2017). 7. Nguyen, LT & Hirst, LS Polimorfismo di reti F-actina altamente reticolate: indagine su scale di lunghezza multiple.Fis. Rev. E Stat. Fisica della materia molle Nonlin. 83, 031910 (2011).

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