Studio sulle proprietà estrattive e antiossidanti dei flavonoidi in Cistanche

Per ulteriori informazioni:ali.ma@wecistanche.com

Canzone Yang

(Istituto per la supervisione e l'ispezione della qualità dei prodotti Anshan, Anshan 114006, Liaoning)

Astratto: Il totaleflavonoidiinCistanchesono stati estratti con il "metodo di vibrazione ad ultrasuoni" e il "metodo di estrazione Soxhlet" e il loro contenuto eantiossidantesono state analizzate le proprietà. I risultati della determinazione hanno mostrato che il contenuto del totaleflavonoidiinCistancheestratta con il metodo di vibrazione ultrasonica era superiore a quella estratta con il metodo di estrazione Soxhlet. Il tasso di recupero determinato dagli esperimenti è del 96,85 percento -99, 46 percento, la precisione è elevata e la soluzione del campione è molto stabile entro 2 ore, il che indica che la spettrofotometria UV-Vis ha un'elevata precisione, una piccola deviazione e facile controllo delle condizioni sperimentali. Analizzare e determinare ilantiossidanteattività diflavonoidiinCistanchecon il metodo della fluorescenza, il tasso di clearance era del 91,5 percento, indicando che ilflavonoidiinCistancheavere forteantiossidanteproprietà. Nell'esperimento, è stato riscontrato che l'utilizzo dell'analisi della fluorescenza per determinare ilantiossidantecapacità totaleflavonoidinell'estratto presenta i vantaggi di rapidità, semplicità, elevata sensibilità e buona riproducibilità.

Parole chiave: Cistanche; flavonoidi; ultrasuoni; Antiossidante

Numero di classificazione della biblioteca cinese: TQ028 Codice di identificazione del documento: A Numero articolo: 1004-0935 (2013) 01-0013-03

Cistanche

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Cistancheè ampiamente usato come medicinale tonico. La ricerca sugli effetti farmacologici e le componenti chimiche diCistancheha fatto grandi progressi negli ultimi anni. Mongolia Interna AlxaCistancheGroup ha sviluppato una serie di Cistanche che nutre lo yin e lo yang, idrata l'intestino, migliora la funzione immunitaria umana, regola il sistema endocrino e ritarda l'invecchiamento. Liquore,cistanceliquido sanitario. In Giappone, l'ernia della carne è usata come agente migliorativo o terapeutico per la disfunzione sessuale e l'amnesia. Negli Stati Uniti, l'echinacea viene anche trasformata in prodotti per la salute per migliorare l'immunità del corpo. Su questa base, dovremmo condurre una ricerca approfondita sui principi attivi dei suoi effetti farmacologici e sul loro meccanismo d'azione. Con la premessa di garantire l'efficacia, dovremmo migliorare i preparati della medicina tradizionale cinese, migliorare il livello di controllo della qualità e sviluppare effetti curativi definiti, un uso sicuro e una qualità controllabile. Nuovi prodotti della medicina tradizionale cinese; d'altra parte, dovremmo anche rafforzare la ricerca sulla tecnologia di coltivazione di Cistanche, realizzare la semina standardizzata e la produzione industrializzata di Cistanche, piantare artificialmente la cistanche e stabilire una base di coltivazione industrializzata della cistanche e delle sue piante ospiti e risolvere il problema della carenza di risorse. Allo stesso tempo, sarà ulteriormente realizzata la governance ambientale nell'area desertica occidentale. Con la continua ricerca approfondita in vari aspetti, questa medicina tradizionale cinese del nostro Paese sarà sicuramente promossa al mercato internazionale e accelererà la modernizzazione della medicina cinese.

1 Parte sperimentale

1.1 Strumento sperimentale

Bagnomaria a temperatura costante con riscaldamento elettrico di tipo H, H, S, 21- (fabbrica di strumenti medici n. 5 di Shanghai); TG328A bilancia analitica elettro-ottica (Shanghai Tianping Instrument Factory); Setaccio da 40 mesh (fabbrica di strumenti Zhejiang Hongxing) Estrattore ad ultrasuoni KQ-250B (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Estrattore Soxhlet (fabbrica di strumenti Zhejiang Hongxing); Modello 766-2 essiccamento a raggi infrarossi lontani (Shanghai Sunshine Instrument Co., Ltd.); Modello HX-200Una fabbrica di medicinali per frantumatore di medicinali cinesi ad alta velocità (Xi'an Hardware, Zhejiang Yongkang); Spettrofotometro UV TU-1201 (Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd.); Misuratore di acidità digitale di precisione PHS-3C (prodotto da Shanghai Tianda Instrument Co., Ltd.); Spettrofotometro a fluorescenza (VARIAN)

1.2 Reagenti sperimentali e farmaci

Cistanche(fornito in laboratorio); etanolo assoluto (purezza analitica) (Shenyang Xinhua Reagent Factory); rutina (standard) (fornita in laboratorio); 50 g/L di soluzione di nitrito di sodio (fatta in casa); 100g/L di soluzione di nitrato di alluminio (fatta in casa); 40 g/L di soluzione di idrossido di sodio (fatta in casa); PH=6.5 soluzione mista di fosfato: 0.1mol/L disodio idrogeno fosfato, 0,1mol/L di potassio diidrogenofosfato; Soluzione di acido benzoico: 0.400 0 g di acido benzoico (AR Shenyang Reagent Factory), sciolto in una soluzione mista di fosfato con pH=9.5, diluire con acqua fino a 100 ml e conservare al buio per uso successivo; Soluzione di Cu*: 1,0 x IO"g/mL; Perossido di idrogeno (AR, Shenyang No. 1 Reagent Factory): 30 percento; 0,1 MoVL di fosfato misto (idrogeno fosfato disodico, AR, Shenyang Xincheng Chemical Plant; potassio diidrogeno fosfato, AR, Shenyang Hefu Chemical Reagent Distribution ) Soluzione; L'acqua è acqua distillata due volte.

1.3 Estrazione dei flavonoidi totali in Cistanche

1.3.1 Estrazione di flavonoidi da Cistanche deserticola (metodo ad ultrasuoni)

Pesare con precisione 2.000 g (passando un 40-setaccio a rete) diCistanchein un matraccio conico da 100 ml, aggiungere il 95 percento di reagente etanolo a temperatura ambiente con un rapporto solido-liquido di 1:15 ed eseguire ogni volta l'estrazione ad ultrasuoni. Dopo 30 minuti, eseguire la filtrazione per aspirazione, recuperare il residuo del filtro, aggiungere il 95% di reagente etanolo per l'agitazione ad ultrasuoni, la filtrazione per aspirazione, l'estrazione ad ultrasuoni 3 volte, combinare i 3 filtrati per ottenere l'estratto desiderato, aggiungere il 95% di reagente etanolo per rendere il volume costante Mettere in un matraccio tarato da 100 ml e mettere da parte.

1.3.2 Estrazione di flavonoidi da Cistanche (metodo di estrazione Soxhlet) P]

Pesare accuratamente 10.000 Og (passato attraverso un 40-setaccio a rete) di purea di melanzane, avvolgerlo con carta da filtro sgrassata, legare un'estremità e metterlo nel tubo di estrazione dell'estrattore Soxhlet. Aggiungere il reagente etanolo al 95 percento dell'estrattore nel flacone di estrazione per ca. È 1/2 del volume, quindi installare l'estrattore Soxhlet, utilizzare un bagnomaria a temperatura costante leggermente superiore al punto di ebollizione dell'estrattore (etanolo) per l'estrazione Soxhlet per 4 ore, quindi raffreddare, eseguire l'evaporazione rotante, la concentrazione e utilizzare il reagente etanolo al 95 per cento per determinare metterlo in un matraccio tarato da 100 ml e mettere da parte.

Anti età

1.3 Determinazione del contenuto di materiale estratto e esperimento del tasso di recupero

1.3.1 Determinazione del contenuto e esperimento di recupero

Prendere sei matracci tarati da 25 ml, aspirare 0.10, 0.20 e 0,30 ml dal liquido campione di carne Shuangrong estratto con il metodo ad ultrasuoni nel primo 3 matracci tarati, aggiungere la stessa quantità di liquido campione agli ultimi 3 matracci tarati, quindi aggiungere rispettivamente 1,0 ml della soluzione standard di rutina, aggiungere 1 ml di soluzione di nitrito di sodio 50 g/l ai 6 matracci tarati, agitare bene , e lasciare riposare per 7 minuti; aggiungere 1 mL di 100 g/L di soluzione di nitrato di alluminio, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; aggiungere 10 ml di soluzione di idrossido di sodio da 40 g/l, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; diluire fino al segno con una soluzione di etanolo al 95 percento, agitare bene e lasciare riposare per 15 min; La soluzione in bianco del toner è un riferimento, l'assorbanza A è misurata a 503 nm e la concentrazione è calcolata dalla curva standard

Tabella 1 Il contenuto diflavonoidi In Cistanche

Prendi sei matracci tarati da 25 ml, preleva 15 ml dal metodo di estrazione Soxhlet di striata: soluzione campione di purea e riempi il volume in un matraccio tarato da 100 ml e pipetta 0 .40, 0,50 e 0,60 ml da esso. In 3 matracci tarati, aggiungere la stessa quantità di soluzione campione agli ultimi 3 matracci tarati, quindi aggiungere 1,0 ml di soluzione standard, aggiungere 1 ml di soluzione di nitrito di sodio 50 g/l, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; Quindi aggiungere 1 ml di soluzione di nitrato di alluminio da 100 g/l, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; quindi aggiungere 10 ml di soluzione di idrossido di sodio 40 g/l, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; diluire fino al segno con una soluzione di etanolo al 95 percento, agitare bene, riposare per 15 minuti, utilizzare la soluzione in bianco come riferimento, misurare l'assorbanza A a 503 nm e calcolare la concentrazione C dalla curva standard.

1.3.2 Determinazione della stabilità sperimentale

Pipettare 0,2 ml di soluzione campione, aggiungere 1 ml di soluzione di nitrito di sodio con 50 g/l di reagente colorato, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; aggiungere 1 mL di 100 g/L di soluzione di nitrato di alluminio, agitare bene e lasciare riposare per 7 min; aggiungere 10 mL di 40 g/L di soluzione di idrossido di sodio, e anche agitare bene e lasciar riposare per 7 min; diluire fino al segno con una soluzione di etanolo al 95 percento, agitare bene e lasciare riposare per 15 min; prendere la soluzione in bianco con lo sviluppatore come riferimento, quindi misurare con uno spettrofotometro ultravioletto-visibile, il tempo è stato impostato per 2 h e si è riscontrato che l'assorbanza della soluzione campione era stabile entro 2 h e rimaneva sostanzialmente invariata.

Tabella 2 Il contenuto diflavonoidia Cistanche

1.4 Analisi dell'attività antiossidante dei flavonoidi in Cistanche cistanche, determinazione fluorimetrica cinetica catalitica del tasso di scavenging della fitoterapia cinese sui radicali liberi idrossilici

1.4.1 Metodo sperimentale

Aggiungere la soluzione di acido benzoico a una serie di provette colorimetriche da 25 ml, quindi aggiungere una certa quantità di Co? più e perossido di idrogeno, a sua volta, si diluisce con una soluzione mista di fosfato di pH=6.5 a un volume costante di 25 ml, agitare bene e mettere in acqua bollente Dopo essere rimasto nel bagno per 45 minuti, la fluorescenza è stata misurata l'intensità di ciascuna soluzione.

1.4.2 Determinazione della velocità di scavenging del campione in radicali idrossilici

Preparazione della soluzione del campione: pesare accuratamente 1.000 Og di un campione con una dimensione delle particelle di 450 μm e, a temperatura ambiente, estrarre ad ultrasuoni 3 volte con 60 ml di etanolo assoluto, utilizzando 20 ml di reagente ogni volta, con un intervallo di tempo di 10 min. Combinare le 3 estrazioni Filtro e diluire il filtrato con etanolo assoluto in un matraccio tarato da 100 ml.

Preparazione del reagente: pesare 7,16 g di disodio idrogeno fosfato e aggiungere 200 ml di acqua per ottenere una soluzione di 0,1 mol/L; pesare 2,72 g di potassio diidrogeno fosfato e aggiungere 200 ml di acqua per ottenere una soluzione da 0,1 mol/l. Mescolare le due soluzioni e utilizzare un pHmetro per preparare un fosfato misto con pH=6.5; pesare 0.{13}} g di acido benzoico (AR Shenyang Reagent Factory), scioglierlo con una soluzione mista di fosfato con pH=9.5 e diluire a volume con acqua WOmL, conservata al buio per dopo uso; Pesare 0,1547 g Ci/ e scioglierlo con] mol/L di acido cloridrico per preparare 100 mL di 1 mol/L di soluzione di Cu*. Preparare una soluzione di perossido di idrogeno al 30 percento.

Prendere 0,2 ml della soluzione campione in una provetta colorimetrica da 25 ml, aggiungere acido benzoico, perossido di idrogeno e occhi di Cu in sequenza, diluire a 25 ml con una soluzione mista di fosfato a pH=6. 5, agitare bene e misurare secondo la formula del tasso di eliminazione. Ottenere il tasso di scavenging del campione in radicali idrossilici.

1.4.3 Risultati del calcolo

Tabella 3 Risultati del calcolo

Conclusione: I flavonoidi in Cistanche hanno forti proprietà antiossidanti.

i flavonoidi in cistanche hanno un effetto antietà

2 Risultati e discussione

(1) Utilizzo del "metodo ad ultrasuoni" e del "metodo di estrazione Soxhlet" per estrarre il totaleflavonoidiinCistanche desertiche, il confronto di questi due metodi mostra che il metodo ad ultrasuoni riduce notevolmente il tempo di estrazione e migliora la velocità di estrazione degli ingredienti efficaci. Il tasso di utilizzo consente quindi di risparmiare materie prime. Al contrario, il metodo di estrazione Soxhlet è lungo e laborioso e l'effetto di estrazione non è buono. Pertanto, l'estrazione ad ultrasuoni del totaleflavonoidiè il miglior processo di estrazione, che ha un forte significato pratico.

(2) L'analisi qualitativa del totaleflavonoididalla spettroscopia UV ha mostrato che la rutina è un prodotto standard molto adatto. Il calcolo sperimentale mostra che il contenuto del totaleflavonoidiinCistancheè molto alto, con alta precisione e il tasso di recupero è del 96,85% ~ 99,46%, il campione è rimasto stabile entro 2 ore.

(3) L'analisi antiossidante e la determinazione del totaleflavonoidinelCistanchedeserto sono stati effettuati con il metodo della fluorescenza. Conclusione: il tasso di eliminazione calcolato era del 91,5 percento, indicando che ilcistancela pasta stessa ha un forte effetto antiossidante, che può eliminare i radicali liberi e inibire i lipidi. L'ossidazione, ecc., è di grande valore nella ricerca di antinvecchiamento, cancerogenesi, infiammazione, ischemia tissutale da radiazioni e altre malattie in campo medico.

Riferimenti:

[1] Cheng Xiyu, Guo Bin, Ni Wen, Liu Chunchao. Avanzamento della ricerca diCistanche[J]. Ricerca e sviluppo di prodotti naturali, 2005, 17 (2): 235-240.

[2] Hou Dongyan, Hui Ruihua, et al. Analisi spettrale del totaleflavonoidinel caprifoglio e determinazione dell'attività antiossidante [J]. Test analitico, 2004, 23 (11): 52-55.

[3] Zhou Gui, Deng Guanghui, Liang Dawen.'Studio sull'estrazione diflavonoidida foglie di biancospino con metodo ultrasonico[J]. Journal of Southwest Agricultural University, 2005, 27 (5): 605-607.