Piante tailandesi con alti livelli di antiossidanti, attività di scavenging dei radicali liberi, attività anti-tirosinasi e anti-collagenasi

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Moragot Chatatikun1 e Anchalee Chiabchalard2

Astratto

Sfondo:La radiazione ultravioletta della luce solare induce una sovrapproduzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) con conseguente fotoinvecchiamento della pelle e disturbi dell'iperpigmentazione. Nuovi composti sbiancanti e antirughe da prodotti naturali sono diventati di recente di crescente interesse. Lo scopo di questo studio era trovare prodotti che riducano i ROS in 14 estratti vegetali tailandesi.

Metodi:Per determinare il totale fenolico eflavonoidecontenuto,antiossidanteattività,anti-tirosinasiattività e attività anti collagenasi, abbiamo confrontato estratti di 14 piante tailandesi preparate utilizzando diversi solventi (etere di petrolio, diclorometano ed etanolo).Antiossidantele attività sono state determinate dai saggi DPPH e ABTS.

Risultati:Il contenuto fenolico totale dei 14 estratti di piante thailandesi è stato trovato ai livelli più alti in etanolo seguito rispettivamente da estratti di diclorometano ed etere di petrolio, mentreflavonoidecontenuto si trovava normalmente nella frazione diclorometano. L'attività di scavenging variava dal 7 al 99 percento di scavenging, come valutato dai saggi DPPH e ABTS. L'estratto di foglie di etanolo di Ardisia elliptica Thunb. aveva il più alto contenuto fenolico, attività antiossidante e inibizione della collagenasi, mentre Cassia alata (L.) Roxb. l'estratto era il più riccoflavonoidecontenuto. È interessante notare che tre estratti vegetali, che erano le frazioni etanoliche di Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. e Senna alata (L.) Roxb. aveva altoantiossidantecontenuto e attività e inibisce significativamente entrambitirosinasie collagenasi.

Conclusione:I nostri risultati mostrano che le frazioni di etanolo di Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. e Senna alata(L.) Roxb. si mostra promettente come potenziali ingredienti per prodotti cosmetici come agenti antirughe e prodotti sbiancanti per la pelle.

Parole chiave:Ardisia ellittica Thunb.,Antiossidantecontenuto, attività di Scavenging,Antitirosinasiattività, Attività anti-collagenasi

Il flavonoide è uno degli elementi dicistance

Sfondo

La radiazione ultravioletta (UVR) dalla luce solare è il fattore di rischio più significativo per i tumori non melanoma e melanomaskin [1]. La sovraesposizione alla luce solare, in particolare UVA e UVB, induce la sovraespressione di specie di ossigeno reattivo (ROS) che danneggiano lipidi, proteine ​​e acidi desossiribonucleici. Il collagene è il principale fondamento della matrice extracellulare nello strato dermico della pelle. Un eccesso di ROS aumenta l'espressione della collagenasi, una proteasi che degrada il collagene che può provocare fotoinvecchiamento e rughe della pelle [2]. Inoltre, l'esposizione ai raggi UV induce la produzione di melanina con conseguente iperpigmentazione.tirosinasiè l'enzima chiave che avvia la pigmentazione della pelle. In primo luogo, la L-tirosina viene idrossilata per formare 3,4-diidrossifenilalanina (L-DOPA) dalla tirosinasi. Successivamente, la L-DOPA viene ossidata a DOPA chinone dalla tirosinasi. Il DOPA chinone viene ulteriormente convertito in DOPAcromo che può essere convertito in acido 5,6-diidrossiindolo(DHI) o 5,{8}}diidrossiindolo-2-acido carbossilico (DHICA)[3]. Gli attuali trattamenti per l'invecchiamento cutaneo coinvolgono l'idrossiacido per spellare lo strato epidermico, i retinoidi per ridurre la pelle ruvida e il filler cutaneo somministrato iniettando collagene nella pelle. Tuttavia, questi trattamenti hanno effetti avversi, come iperpigmentazione, infiammazione, citotossicità, irritazione e infezione batterica [4]. L'agente sbiancante per la pelle più popolare è l'idrochinone, che inibiscetirosinasi,ma i suoi effetti collaterali includono dermatite, edema, reazioni allergiche e ocronosi [5]. Recentemente, i ricercatori si sono concentrati su prodotti naturali che inibiscono i ROS indotti dai raggi UV, sopprimono gli enzimi e riducono la formazione di melanina come alternative ai trattamenti attuali. Ad esempio, fitocomposti attivi, come arbutina, aloesina, acido gentisico,flavonoidi, esperidina, liquirizia, niacinamide, derivati ​​del lievito e polifenoli, inibiscono la melanogenesi senza citotossicità dei tomelanociti [6]. Pertanto, le piante possono ridurre la formazione di rughe e l'iperpigmentazione causata dall'esposizione alla luce solare.

Lo scopo di questo studio era di analizzare 14 piante tailandesi estratte con tre diversi solventi per i loro potenziali ingredienti antirughe e sbiancanti per la pelle. Il numero diantiossidantefenoli eflavonoidiè stato valutato per una correlazione con le attività di scavenging dei radicali liberi e con l'anti-collagenasi eantitirosinasiattività. Gli estratti avevanoantiossidantiche ha spazzato via i radicali liberi e inibito gli enzimi coinvolti nella formazione di rughe e pigmenti. Identifichiamo Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L. e Senna alata (L.) Roxb è un candidato molto promettente per l'uso nei prodotti cosmetici.

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Metodi

Sostanze chimiche e reagenti

Reagente fenolico di Folin Ciocalteu, carbonato di sodio (Na2CO3), acido gallico, quercetina, 10 percento di cloruro di alluminio, etanolo, 2, 2-difenil{5}}picrylidrazyl (DPPH), acido ascorbica, 2,2′-azino- bis(3-etilbenztiazolina-6-acido solfonico)(ABTS), persolfato di potassio, acido cogico, tirosinasi dei funghi (EC 1.14.18.1), 3,4-diidrossi-L-fenilalanina (L- DOPA), N-[3-(2-furyl) acriloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), collagenasi da Clostridium histolyticum (EC3.4.24.3), epigallocatechina gallato (EGCG) , cloruro di sodio, cloruro di calcio e dimetilsolfossido (DMSO) sono stati acquistati da Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). L'etere di petrolio, il diclorometano, l'etanolo assoluto, il metanolo, il disodio idrogeno fosfato e il sodio diidrogeno fosfato sono stati acquistati da Merck (Darmstadt, Germania). Tutte le sostanze chimiche ei reagenti erano di grado analitico.

Materiali vegetali ed estrazione

Tredici specie di foglie tailandesi sono state raccolte dall'HRH Princess Sirindhorn Herb Garden, provincia di Rayong, Thailandia. I mangostani sono stati ottenuti dalla provincia di Chanthaburi, in Thailandia. Queste piante sono state autenticate e depositate presso l'Erbario, Dipartimento di Botanica, Facoltà di Scienze, Università di Chulalongkorn, Thailandia. I nomi scientifici, i numeri dei voucher e le parti delle piante sono mostrati nella Tabella 1. Le piante sono state estratte utilizzando l'apparato Soxhlet. In breve, 10 g della pianta essiccata sono stati estratti separatamente con etere di petrolio, diclorometano ed etanolo. I solventi sono stati rimossi utilizzando un evaporatore rotante sotto vuoto a pressione ridotta utilizzando il concentratore MiVac Quattro. I campioni concentrati sono stati disciolti in DMSO a 100 mg/ml e conservati a -20 gradi fino al momento dell'uso. Le rese degli estratti secchi sono presentate nella Tabella 1 come percentuale p/p di materiali vegetali secchi.

Determinazione del contenuto fenolico totale

Il contenuto fenolico totale degli estratti vegetali è stato valutato utilizzando il metodo Folin-Ciocalteu [7]. In breve, 50 ul di estratti a 1 mg/ml in acqua distillata sono stati miscelati con 50 ul di reattivo Folin-Ciocalteu al 10% e 50 ul di Na2CO3 0,1 M. La miscela di reazione è stata incubata per 1 ora a temperatura ambiente al buio. L'assorbanza a 750 nm è stata misurata con un lettore di micropiastre (Biotek, USA). Come standard è stato utilizzato acido gallico da 1,56 a 100 ug/ml. Il contenuto fenolico totale degli estratti è espresso in mg di acido gallico equivalenti (GAE) per g di materiale vegetale secco. Tutti i campioni sono stati analizzati in triplicato.

Determinazione del contenuto di flavonoidi

Totaleflavonoidecontenuto (TFC) è stato determinato utilizzando il dosaggio colorimetrico del cloruro di alluminio (AlCl3) [7]. In breve, 50 ul degli estratti a 1 mg/ml in etanolo all'80 percento sono stati miscelati con 50 ul di una soluzione di AlCl3 al 2 percento nel pozzetto di una piastra da parete 96. La piastra è stata incubata per 15 minuti a temperatura ambiente. L'assorbanza a 435 nm è stata misurata utilizzando un lettore di micropiastre. La quercetina da 1,56 a 100 ug/ml è servita come standard. Il contenuto totale di flavonoidi è espresso in mg di quercetina equivalenti (QE) per g di materiale vegetale secco. I campioni sono stati analizzati in triplicato.

Attività di scavenging di DPPH

Il test dell'attività di scavenging del DPPH è stato eseguito come descritto da Yamasaki et al. [8]. La soluzione di DPPH è stata preparata al momento per ogni dosaggio. In breve, 100 estratti ug/ml o uno standard di acido ascorbico da 1,56 a 100 ug/ml in metanolo assoluto sono stati miscelati con 180 ul di reagente DPPH in una piastra da 96 pozzetti. La miscela di reazione è stata incubata per 30 minuti a temperatura ambiente al buio. Quindi, l'assorbanza a 517 nm è stata misurata con un lettore di micropiastre. Gli esperimenti sono stati intrapresi in triplicato. L'assorbanza a 517 nm di DPPH era 0,70 ± 0,02 e l'attività di scavenging misurata con l'assorbanza diminuiva. La capacità di scavenging è stata calcolata come attività di scavenging ( percentuale )=100 percentuale × [(훥A517 del controllo - 훥A517 del campione)/ 훥A517 del controllo]. Le percentuali di attività di scavenging di DPPH degli estratti sono state confrontate con quelle dell'acido ascorbico e sono espresse come mg di vitamina C equivalenteantiossidantecapacità (VCEAC) per gmateriale vegetale secco. IC50 è stato determinato da un grafico della percentuale di inibizione rispetto alla concentrazione (da 0,78 a 100 ug/ml di ciascun estratto).

Attività di scavenging di ABTS

L'attività di scavenging dei radicali liberi ABTS è stata eseguita come precedentemente descritto [9]. Il reagente di lavoro ABTS• plus è stato preparato miscelando 7 mM di ABTS• e 2,45 mM di persolfato di potassio con un rapporto volume/volume di 8:12. La soluzione di lavoro è stata mantenuta per 16-18 h a temperatura ambiente al buio. La soluzione ABTS• plus è stata diluita con etanolo assoluto per fornire un'assorbanza a 734 nm di 0,70 ± 0,02. Quindi, 100 ug/ml di estratti o 1,56-100 ug/ml standard di acido ascorbico in etanolo assoluto sono stati aggiunti a 180 ul di ABTS• più reagente di lavoro nei pozzetti di una piastra da 96 pozzetti. La piastra è stata incubata per 45 minuti a temperatura ambiente e l'assorbanza è stata misurata a 734 nm. Gli esperimenti sono stati condotti in triplicato. La capacità di scavenging è stata calcolata come attività di scavenging ( percentuale )=100 × [(훥A734 del controllo - 훥A734 del campione)/ 훥A734 del controllo]. Le percentuali di attività di scavenging dell'ABTS degli estratti sono state confrontate con quelle dell'acido ascorbico e sono presentate come mg di vitamina C equivalenteantiossidantecapacità (VCEAC)per g di materiale vegetale secco. IC50 è stato determinato da un grafico della percentuale di inibizione rispetto alla concentrazione (da 15,62 a 1000 ug/ml di ciascun estratto).

Determinazione dell'inibizione della tirosinasi dei funghi

Il metodo del dopacromo è stato eseguito con lieve modifica [10]. In breve, 20 ul di estratti vegetali o DMSO (come controllo), 20 ul di 203,3 unità/ml di tirosinasi di funghi e 140 ul di tampone fosfato 20 mM atpH 6,8 sono stati preincubati per 10 minuti a 25 gradi. Dopo la pre-incubazione, sono stati aggiunti 20 ul di L-DOPA 2,5 mM e i campioni sono stati quindi incubati per altri 20 minuti a 25 gradi. La quantità di dopacromo è stata misurata a 492 nm con un lettore di micropiastre. L'acido kojico (KA) fungeva da controllo positivo per l'inibizione. La percentuale di inibizione dell'attività della tirosinasi (percentuale) è stata espressa in percentualetirosinasiinibizione {{0}} × [(훥A492 del controllo –훥A492 del campione)/ 훥A492 del controllo]. Le concentrazioni finali degli estratti e dell'acido cogico erano rispettivamente di 1 e 0,1 mg/ml. IC50 è stato determinato da un grafico percentualetirosinasiinibizione della concentrazione (da 15,62 a 1000 ug/ml di ciascun estratto).

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Determinazione dell'inibizione della collagenasi

L'inibizione della collagenasi è stata determinata con un metodo precedentemente descritto [11]. In breve, 40 ul di collagenasi da Clostridium histolyticum a 0.25 unità/ml in tampone Tricine 50 mM contenente CaCl2 10 mM e NaCl 400 mM, e 10 ul di tampone Tricine 50 mM sono stati miscelati con 10 ul degli estratti o DMSO (come controllo). Come controllo positivo è stato utilizzato l'epigallocatechina gallato (EGCG). Dopo un 15-min incubazione a temperatura ambiente, sono stati aggiunti 50 ul di N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA). L'assorbanza è stata misurata a 340 nm immediatamente e continuamente per 20 minuti. L'attività enzimatica è stata valutata dalla diminuzione dell'assorbanza durante l'intervallo di tempo. La percentuale di inibizione dell'attività della collagenasi è stata calcolata come 100 × [(Attività del controllo – Attività del campione)/ Attività del controllo]. Le concentrazioni finali degli estratti e dell'epigallocatechina gallato erano rispettivamente di 1 e 0,1 mg/ml. IC50 è stato determinato da un grafico della percentuale di inibizione della collagenasi rispetto alla concentrazione (da 15,62 a 1000 ug/ml di ciascun estratto).

analisi statistiche

Tutti gli esperimenti sono stati condotti in triplicato e i risultati sono espressi come media ± errore standard. Il coefficiente di correlazione (R2) traantiossidantei contenuti e le attività antiossidanti sono stati determinati utilizzando il software SigmaPlotversione 12.2. La differenza tra le due medie è stata valutata utilizzando il test t di Student. Le differenze sono state considerate significative quando il valore P era inferiore a 0.05.

Risultati

Rendimenti estrattivi

La tabella 1 mostra i nomi scientifici, i numeri dei voucher e le parti vegetali delle 14 piante thailandesi utilizzate in questo studio. La resa percentuale degli estratti variava da 0,73% a 31,11% in peso (Tabella 1). Ardisia ellittica Thunb. aveva la resa più alta negli estratti di etere di petrolio (19,89 percento) e etanolo (31,11 percento), mentre Garcinia mangostanaL. ha avuto la resa percentuale più alta dall'estrazione di diclorometano (11,07 percento).

Contenuto fenolico di 14 piante tailandesi

Pertanto, il contenuto fenolico totale nelle piante è stato determinato con il metodo Folin-Ciocalteu. Gli estratti avevano un'ampia gamma nel numero di fenoli come mostrato nella Tabella 2, e i valori variavano di 33- volte tra gli estratti. Ardisiaellittica Thunb. aveva il contenuto fenolico più alto in tutti e tre i tipi di estratti, mentre il contenuto fenolico più basso era presente nello Stemona curtissi Hook. f. estratto di etere di petrolio.

Contenuto di flavonoidi di 14 piante tailandesi

Simile ai fenoli, totaleflavonoideil contenuto variava sostanzialmente tra le specie vegetali, da 2.04 ± 0,16 a 31,38 ± 0,81 mg di QE per g di materiale secco (Tabella 2). In generale, l'estrazione con diclorometano ha prodotto i risultati più elevatiflavonoidelivello rispetto agli altri solventi. Di tutti gli estratti, la più alta quantità di flavonoidi è stata trovata nell'estratto di etanolo dalle foglie di Senna alata (L.) Roxb (31,38 ± 0,81 mg di QE perg di materiale secco). D'altra parte, Ardisia elliptica Thunb.(23,14 ± 1,10 mg QE per g di materiale secco). aveva il contenuto di flavonoidi più ricco nella frazione di diclorometano. Inoltre, Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. aveva il più alto contenuto di flavonoidi tra gli estratti di etere di petrolio (27,48 ± 2,59 mg QE per g di sostanza secca). Il livello di flavonoide più basso rilevabile era nell'estratto di etanolo da Daturametel L. In netto contrasto,flavonoidinon sono stati trovati in estratti di etere di petrolio e diclorometano da Stemona curtisii Hook.f., ed estratti di etere di petrolio da Streblus asper Lour. e Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Il contenuto totale di flavonoidi non era correlato al contenuto fenolico totale (R2=0.0284, Fig. 1a).

Attività di scavenging dei radicali DPPH in diversi estratti di 14 piante thailandesi

Attività di scavenging dei radicali liberi che utilizza DPPH come indicatori come baseantiossidantesaggio [12]. Come mostrato nella Tabella 3, le attività di scavenging degli estratti variavano notevolmente, da 7,11 ± 0,59 percento a 96,17 ± 0,05 percento. L'estratto di etanolo Ardisia elliptica Thunb ha avuto la più alta attività di scavenging al 96%. Inoltre, il prossimo più forteantiossidante activities (>90 percento) sono stati osservati in frazioni di etanolo da Stemonacurtisii Hook.f., Annona squamosa L., Phyllanthus acidus(L.) Skeels. e Garcinia mangostana Linn. In termini di altri solventi, Ardisia elliptica Thunb aveva anche la più ricca attività di lavaggio tra le frazioni di etere di petrolio e Garcinia mangostana L. aveva la più alta attività antiossidante nelle frazioni di diclorometano. La capacità di lavaggio più bassa è stata rilevata in Croton sublyratus Kurz nella frazione di etere di petrolio. Nessuna attività di scavenging è stata rilevata in 7 estratti di etere di petrolio e 2 estratti di diclorometano.

ABTS attività di scavenging radicale in diversi estratti di 14 piante thailandesi

Antiossidantel'attività delle fasi acquosa e lipidica nelle piante è stata anche valutata mediante un saggio di decolorazione utilizzando ABTS [13]. Ancora una volta, l'acido ascorbico serviva da standardantiossidante. As with the DPPH assay, scavenging activity in the ABTS assay varied greatly among the plant preparations with a similarly broad range from 8.03 ± 0.54% to 99.84 ± 0.07% (Table 4). Furthermore, the next strongest scavenging activities (> 90%) were observed in the same 4 ethanol fractions as shown by the DPPH assay. In addition, no scavenging activity was found in the same 5 petroleum ether extracts. In general, the values obtained with the ABTS assay were higher than the DPPH values. Hence, activity in the ethanol extract from Senna alata (L.) Roxb. was now observed as >90 percento, e l'attività scavenger è stata rilevata in tutti gli estratti di diclorometano e negli estratti di etere di petrolio da Annona squamosa L. e Ipomoea pes-caprae(L.) R.br. che non è stato rilevato dal test DPPH.

Inibizione dell'attività della tirosinasi da parte di estratti vegetali

La capacità dei composti delle piante tailandesi di inibire i funghitirosinasil'attività è stata valutata utilizzando un test in vitro con L-DOPA come substrato. L'acido kojico fungeva da noto inibitore e causava un'inibizione massimalenzimatica del 93,38 ± 1,63 percento. Come mostrato nella Tabella 5, solo gli estratti di etanolo hanno inibito significativamente l'attività della tirosinasi, con Ardisia elliptica Thunb. i preparativi fanno eccezione. Le frazioni di etere di petrolio e diclorometano di Ardisia elliptica Thunb. ha inibito l'attività della tirosinasi di circa il 20%. La frazione etanolica di Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz (valore IC 50 di 271,50 ug/ml) era il più potente inibitore della tirosinasi, seguita dagli estratti etanolici di Ardisia elliptica Thunb. e Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Altre frazioni di etanolo hanno ridotto significativamente l'attività enzimatica di oltre il 20 percento (Tabella 5), ​​mentre gli estratti rimanenti non avevano attività inibitoria rilevabile (dati non mostrati).

Inibizione dell'attività della collagenasi da parte di 14 piante

Gli estratti sono stati testati per l'attività anti-collagenasi utilizzando Clostridium histolyticum collagenasi e N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) come substrato.Il gallato di epigallatecatechina è un noto inibitore della collagenasi e diminuzione dell'attività enzimatica del 90,51 ± 2,79 percento. Come mostrato nella Tabella 5, solo 4 estratti di etanolo contenevano un'attività inibitoria della collagenasi rilevabile. Di quelli che causano l'inibizione, Ardisia elliptica Thunb. (valore IC 50 di 157,78 ug/ml) ha mostrato il livello più alto di inibizione della collagenasi, seguito da Annona squamosa L. (valore IC 50 di 426,67 ug/ml), Senna alata (L.) Roxb., e Croton sublyratusKurz nel rango ordine. Altri estratti vegetali non hanno inibito significativamente l'attività della collagenasi nelle condizioni di reazione utilizzate in questo studio (dati non mostrati).

Discussione

La radiazione solare è un fattore ambientale significativo nel danno cutaneo e può indurre il cancro della pelle [14]. Le radiazioni UV provocano una risposta pro-infiammatoria, la degradazione della matrice extracellulare eantiossidanteesaurimento [15, 16]. I raggi UV provocano la formazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) che inducono iperpigmentazione ed espressione di collagenasi [17, 18]. Il nostro studio ha studiato 14 piante tailandesi estratte con tre diversi solventi per il loro potenziale come ingredienti antirughe e sbiancanti per la pelle. In questo studio, abbiamo utilizzato etere di petrolio, diclorometano ed etanolo per l'estrazione delle piante utilizzando l'apparato Soxhlet. Ardisia ellittica Thunb. aveva la resa più alta negli estratti di etere di petrolio ed etanolo, mentre Garcinia mangostana L. aveva la resa percentuale più alta dall'estrazione di diclorometano. Questi solventi sono una serie di solventi organici con polarità crescenti. La variazione tra le rese percentuali dipendeva dalle specie vegetali e probabilmente rifletteva le differenze nella composizione chimica delle piante.

I fenolici sono il più grande gruppo di sostanze fitochimiche presenti nelle piante e hanno varie attività biologiche negli animali, compreso l'uomo [19]. Il contenuto fenolico totale nelle piante è stato determinato con il metodo Folin Ciocalteu. Nel complesso, la frazione di etanolo aveva il contenuto fenolico più ricco, seguito da diclorometano, mentre l'etere di petrolio a bassa polarità aveva il contenuto fenolico più basso rispetto agli altri solventi. In questo studio, Ardisia elliptica Thunb. aveva il più alto contenuto fenolico in tutti e tre i tipi di estratti. In studi precedenti, gli estratti di foglie di diclorometano di Ardisia elliptica Thunb. hanno un contenuto fenolico di 101 ± 1,3 mg GAE per g di materiale vegetale secco, che è più del contenuto di un estratto di ramoscello [20]. Inoltre, un estratto di metanolo del frutto maturo di Ardisia conteneva 5,64 ± 0,37 g di GAE per 100 g di estratto [21]. Da qui foglie e frutti di Ardisia elliptica Thunb. hanno un alto contenuto fenolico che può essere facilmente estratto con metanolo, diclorometano ed etanolo.

Flavonoidisono pigmenti in fiori, foglie, frutti e semi. Questi composti sono metaboliti secondari delle piante e sono ampiamente distribuiti tra le specie vegetali [22]. Successivamente, il contenuto di flavonoidi all'interno delle piante tailandesi è stato valutato utilizzando il test colorimetrico del cloruro di alluminio. I nostri risultati hanno mostrato che la più alta quantità di flavonoidi è stata trovata nell'estratto di etanolo da Senna alata (L.) Roxbleaves. In uno studio precedente, è stato riscontrato un alto contenuto di flavonoidi nell'acqua (4,25 mg QE per 100 g) e nelle frazioni di metanolo (3,97 mg QE per 100 g) di Senna alata (L.) Roxb.[23]. Pertanto, le preparazioni di Senna alata (L.) Roxb hanno un alto contenuto di flavonoidi quando estratte con solventi ad alta polarità tra cui etanolo, metanolo e acqua. Ardisiaellittica Thunb. aveva il contenuto di flavonoidi più ricco nella frazione diclorometano. Il frutto di questa pianta ha anche un alto contenuto di flavonoidi di 36,91 ± 2,37 mg QE per g di estratto [24]. Da qui il frutto e le foglie di Ardisia elliptica Thunb. sono ricchi di flavonoidi. Il contenuto totale di flavonoidi non era correlato al contenuto fenolico totale. Tuttavia,flavonoidihanno molte attività biologiche come la protezione UVB [25], antinfiammatoria [26], antiepatotossicità [27] e antitumorale [28].

Attività di scavenging dei radicali liberi mediante DPPH e ABTSassay. Nel test DPPH, DPPH riceve un idrogenato da anantiossidante[29]. Abbiamo scoperto che l'estratto di etanolo di Ardisiaelliptica Thunb aveva la più alta attività di scavenging. Altri ricercatori hanno anche riportato frazioni di diclorometano di Ardisia elliptica Thunb.Le foglie e gli steli hanno alti livelli diantiossidanteattività come determinata dal test DPPH, e, quindi, questa pianta è molto interessante da indagare ulteriormente come trattamento a base di erbe [20]. Gli estratti dalla frazione di etanolo con alta polarità hanno mostrato chiaramente meglioantiossidanteattività di frazioni con polarità inferiori contenenti diclorometano ed etere di petrolio. Gli estratti di etanolo contenevano i livelli più alti di attività di scavenging dei radicali liberi rispetto agli altri estratti e tutti gli estratti di etanolo erano attivi. Nel test ABTS, ABTS viene convertito alla sua radicalizzazione mediante l'aggiunta di persolfato di potassio. In presenza di un antiossidante, il catione reattivo ABTS (o ABTS• plus) viene convertito nella sua forma naturale incolore [9]. In accordo con il test DPPH, gli estratti di etanolo contenevano i livelli più elevati di attività scavenger rispetto agli altri estratti. Ancora una volta, le più alte attività di scavenging estratti di inetanolo, diclorometano ed etere di petrolio provenivano dalle stesse piante come mostrato dal test DPPH. I risultati dei test DPPH e ABTS erano altamente correlati come previsto (Fig. 1f).

Tuttavia, il totaleflavonoideil contenuto degli estratti vegetali non era correlato all'attività di scavenger dei radicali liberi rilevata dal test DPPH (Fig. 1c) o dal test ABTS (Fig. 1e). I nostri risultati di nessuna relazione significativa traflavonoidecontenuto e attività scavenger utilizzando il test ABTS sono coerenti con i risultati di altri ricercatori [30]. Al contrario, il contenuto fenolico totale della preparazione vegetale è correlato positivamente con l'attività di scavenger misurata da entrambi i test (Fig. 1b e d) in disaccordo con uno studio precedente [31]. In particolare, l'attività di scavenging dipendeva dal contenuto fenolico totale e da solventi con polarità elevate, come etanolo e diclorometano. Questi risultati suggeriscono che il contenuto fenolico è il principale costituente conantiossidanteattività nei 14 stabilimenti thailandesi.

La melanina, il pigmento principale del colore della pelle e dei capelli, è sintetizzata dai melanociti all'interno dei melanosomi. La sovrapproduzione e l'accumulo di melanina nella pelle possono portare a disturbi della topigmentazione e problemi estetici. L'iperpigmentazione si verifica nelle aree della pelle esposte al sole [32]. Nella melanogenesi,tirosinasiè l'enzima chiave nella fase di limitazione della velocità in cui la L-tirosina viene idrossilata a L-DOPA, che viene ulteriormente ossidata in DOPAchinone. Successivamente, viene convertito in DOPAchrome che è un substrato per la sintesi della melanina [3]. Downregulation ditirosinasiè stato proposto che l'attività sia responsabile della diminuzione della produzione di melanina. Lo sviluppo di nuovi composti fitochimici sbiancanti da prodotti naturali è recentemente diventato una tendenza in crescita. La nostra scoperta ha mostrato che la frazione di etanolo di Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz era il più potente inibitore della tirosinasi, seguito da estratti di etanolo da Ardisia elliptica Thunb. e Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Ovviamente, 7 piante di 14 piante avevano un alto contenuto fenolico, in particolare Ardisiaelliptica Thunb. e Annona squamosa L. Inoltre, Senna alata (L.) Roxb. aveva il più riccoflavonoidecontenuto che può inibire l'attività della tirosinasi. I composti attivi delle piante come arbutina, aloesina, acido gentisico, flavonoidi, esperidina, liquirizia, niacinamide, derivati ​​del lievito e polifenoli, possono inibire la melanogenesi senza citotossicità per i melanociti [6].

La collagenasi è una peptidasi di zinco transmembrana che scinde il legame X-Gly del collagene. Il collagene è un'abbondante proteina strutturale e componente della matrice extracellulare [33]. La diminuzione delle fibre di collagene ed elastina aumenta con l'età e il danno causato dai raggi UV che induce la pelle rugosa[34]. L'inibizione della collagenasi è stata proposta per prevenire l'invecchiamento cutaneo. Di quelli che causano l'inibizione nel nostro studio, Ardisiaelliptica Thunb. ha mostrato il livello più alto di collagenasiinibizione, seguito da Annona squamosa L., Senna alata (L.) Roxb. e Croton sublyratus Kurz in ordine di classifica. In uno studio precedente, l'estratto di baccello di cacao aveva acido fenolico eflavonoidiche ha inibito l'attività dell'elastasi e della collagenasi [35]. In particolare, tre estratti di etanolo (Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L. e Senna alata (L.) Roxb. hanno inibito entrambitirosinasie collagenasi. Queste piante avevano anche livelli alti fenolici e flavonoidi eantiossidanteattività. È interessante notare che questi estratti hanno possibili usi come ingredienti per prodotti cosmetici.

Conclusione

I nostri risultati dimostrano che gli estratti di 14 piante thailandesi avevano vari gradi di fenolico totale eflavonoidecontenuto e attività di scavenging dei radicali liberi, a seconda dei solventi di estrazione. C'era un'alta correlazione tra il contenuto fenolico totale e l'attività di scavenging dei radicali liberi valutata dai saggi DPPH e ABTS. La frazione etanolica di Ardisia elliptica Thunb. aveva il contenuto fenolico più alto, seguito da Annona squamosa L. Entrambe le piante hanno inibito significativamente le attività della tirosinasi e della collagenasi, mentre Rhinacanthusnasutus (L.) Kurz ha mostrato la più alta inibizione della tirosinasi. Inoltre Senna alata (L.) Roxb. era il più ricco di contenuto di flavonoidi e anche espostotirosinasie comportamento inibitorio della collagenasi. La frazione di etanolo di tre piante, vale a dire Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb e Senna alata (L.) Roxb., hanno il potenziale per essere ingredienti in prodotti cosmetici antirughe e sbiancanti per la pelle. Ulteriori studi sono necessari per indagare i componenti attivi e la sicurezza di questi estratti.

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