L'effetto delle sostanze umiche della dieta sull'immunità cellulare e sulle caratteristiche del sangue nei suinetti

Astratto: L'obiettivo di questo studio era determinare l'impatto delle sostanze umiche presenti nella dieta sulla risposta immunitaria e sui profili ematici dei suinetti. Un totale di 24 suinetti incrociati (Slovakian White × Landrace; 35 giorni di età; peso corporeo medio di 11,67 kg) sono stati assegnati a due gruppi dietetici con (sperimentale; 5 g·kg−1) o senza (controllo; 0 g·kg−1 ) integrazione di sostanze umiche naturali. In questo studio, abbiamo osservato un aumento significativo della proporzione di linfociti CD4+CD8- (p < {{10}}.001) nel gruppo sperimentale. I risultati hanno mostrato anche una tendenza all'aumento dell'attività fagocitica e della capacità di fagocitazione dei fagociti e del numero delle altre sottopopolazioni linfocitarie monitorate (CD3+, CD21+, CD4-D 8+, CD4+CD8+, CD4+CD25+) nei suinetti del gruppo sperimentale rispetto al gruppo di controllo. L'integrazione di sostanze umiche ha aumentato la fosfatasi alcalina sierica rispetto al gruppo di controllo (p < 0,05). Altri parametri ematici monitorati non sono stati significativamente influenzati dal trattamento dietetico. Si è concluso che l'inclusione di sostanze umiche nella dieta dei suinetti potrebbe avere un effetto stimolante sull'immunità cellulare, senza effetti negativi sui parametri ematologici e biochimici.

Parole chiave: sostanze umiche; fagocitosi; Linfocita; biochimica del sangue; ematologia; suinetti

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1. Introduzione

Le sostanze umiche (HS) sono una classe di composti bioattivi organici naturali non nutritivi formati nel suolo [1]. Sono importanti componenti dell'humus la cui funzione primaria è trasferire i nutrienti dal suolo agli organismi viventi. L'HS include specificamente l'acido umico, l'acido fulvico e l'umina come costituenti principali [2]. Questi componenti sono essenziali per la crescita delle piante [3] e possono favorire l'utilizzo efficiente dei nutrienti da parte della pianta [4]. A causa del divieto dell’uso di antibiotici come promotori della crescita nell’Unione Europea, è aumentato l’interesse per gli additivi alternativi per mangimi per la produzione animale [5]. Negli ultimi due decenni, l’interesse per l’uso dell’HS nell’alimentazione animale è aumentato [2,6]. Molti autori hanno osservato nel corso dei loro studi un miglioramento dei parametri di produzione dopo l'aggiunta di HS ai mangimi. Negli ultimi anni, è stato dimostrato che l'HS aggiunto all'alimentazione di animali monogastrici come suini, pollame e conigli favorisce la crescita [7–10]. Inoltre, l’HS è stato utilizzato come agente immunostimolante, antidiarroico, analgesico e antimicrobico nelle pratiche veterinarie [11–13]. L'aggiunta di integratori biologicamente attivi di natura umica alle diete degli animali ha stimolato i processi metabolici e la digeribilità dei nutrienti e ha inoltre attivato l'assorbimento di alcuni elementi minerali [14]. Altri studi hanno scoperto che l’HS aiuta a ridurre l’escrezione di ammoniaca dal letame e migliora il numero relativo di linfociti nel sangue. Le modifiche sopra menzionate aiutano l'immunità degli animali [2,8,15]. Tuttavia, a causa delle diverse fonti e tipi di preparati HS, nonché del fatto che non esiste un unico standard per misurare gli effetti reali dell’HS, il loro effetto biologico dipende dalle specifiche. Sulla base dei nostri precedenti risultati ed esperienze di studi sul pollame (polli da carne e galline ovaiole) sull'effetto delle sostanze umiche (in concentrazioni di 0,8% e 0,5%, rispettivamente) sullo stato immunitario e la risposta immunitaria, abbiamo deciso di verificare questo effetto nei suinetti. Abbiamo osservato un aumento significativo dell'attività dei fagociti e della risposta delle cellule B, nonché un aumento significativo del rapporto linfociti CD4+:CD8+ [16,17]. In generale, l'integrazione come additivo per mangimi nei suini non è stata ben segnalata rispetto al pollame, e gli studi scientifici sull'influenza dell'integrazione di HS nelle diete dei suini sull'immunità e sul metabolismo sono ancora relativamente limitati. Pertanto, questo studio, come prova pilota, è stato condotto per valutare l'effetto dell'integrazione di HS allo 0,5% sugli indicatori immunitari, nonché sulle variabili biochimiche ed ematologiche nel sangue dei suinetti.

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2. Materiali e metodi

2.1. Design sperimentale

L'esperimento è stato condotto in conformità con la "Direttiva europea sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici" [18]. Gli animali sono stati alloggiati in stalle accreditate del Dipartimento di Nutrizione e Zootecnia Animale dell'Università di Medicina Veterinaria di Košice, in Slovacchia, in condizioni zooigieniche richieste. Durante l'esperimento, la temperatura media nella stalla era di 20,2 ± 1,5 ◦C e l'umidità relativa era di 68,5 ± 4,8%. Lo studio è stato approvato dalla Commissione Etica dell'Università di Medicina Veterinaria e Farmacia di Košice (protocollo n. EKV/2022-11). Un totale di 24 suinetti incrociati (Slovakian White x Landrace) 35-di un giorno sono stati divisi in due gruppi (n=12; 50% maschi e 50% femmine in entrambi i gruppi). Prima dell'inizio dell'esperimento è stato registrato un peso corporeo medio iniziale dell'animale (BW) di 11,68 ± 1,35 kg nel gruppo di controllo e di 11,65 ± 1,34 kg nel gruppo sperimentale. Nello studio sono stati inclusi i seguenti gruppi sperimentali: il gruppo di controllo e il gruppo sperimentale, in cui la dieta del gruppo sperimentale è stata integrata con un integratore di HS allo 0,5%. L'esperimento è durato 4 settimane. Nell'esperimento sono state utilizzate le stesse diete per entrambi i gruppi (Tabella 1). Nel gruppo sperimentale l'introduzione dell'integratore HS nella dieta è stata effettuata a scapito dell'orzo. I maiali venivano nutriti due volte al giorno con miscele complete di mangimi. L'acqua potabile è stata a disposizione degli animali ad libitum durante tutto il periodo sperimentale. Le miscele complete di mangimi nell'esperimento sono state formulate secondo i requisiti nutrizionali di Šimeˇcek et al. [19]. L'integratore alimentare naturale di HS (HUMAC® Natur AFM; Humac, Ltd., Košice, Slovacchia) è stato macinato e purificato fisicamente con Leonardite senza trattamento chimico. Le miscele complete di mangimi sono state analizzate per sostanza secca, proteina grezza, fibra grezza, ceneri totali, amido e fosforo totale secondo il Regolamento 152/2009 della Commissione CE [20]. Il livello di calcio e sodio nella dieta è stato analizzato utilizzando il metodo della fiamma di uno spettrometro ad assorbimento atomico (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, Regno Unito). I valori energetici metabolizzabili delle miscele complete di mangimi sono stati calcolati con la formula secondo Šimeˇcek et al. [19].

2.2. Campionamento e misurazioni

Nella settimana 4, la mattina dell'ultimo giorno dell'esperimento, sono stati prelevati campioni di sangue mediante puntura del seno orbitale da tutti i suini individualmente in entrambi i gruppi per le successive analisi. Il siero è stato ottenuto mediante centrifugazione (3000 giri al minuto per 30 minuti) e conservato a -20 ◦C fino all'analisi. Il sangue eparinizzato è stato utilizzato per determinare i parametri ematologici, testare l'attività dei fagociti e identificare le sottopopolazioni di linfociti.

Tabella 1. Formula e composizione chimica delle miscele di mangimi per suini (come nutriti).

2.2.1. Parametri Ematologici e Biochimici Sierici

È stato eseguito un emocromo completo con un analizzatore ematologico automatizzato (scil Vet ABC™ Hematology Analyser, Germania). Le variabili valutate nel nostro studio erano il valore dell'ematocrito (HCT), la concentrazione di emoglobina (Hb), la conta dei globuli rossi (RBC), il volume corpuscolare medio (MCV) e la conta totale dei globuli bianchi (WBC). I parametri biochimici del siero: proteine ​​totali, albumina, glucosio, urea, trigliceridi, colesterolo, creatinina, aspartato aminotransferasi (AST), fosfatasi alcalina (ALP) e fosforo sono stati misurati utilizzando un analizzatore da banco ad accesso casuale completamente automatico (Ellipse, Italia). La concentrazione di calcio nel siero è stata determinata mediante uno spettrometro ad assorbimento atomico a fiamma (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, UK).

2.2.2. Biomarker della perossidazione lipidica

Le concentrazioni dei prodotti di perossidazione lipidica (livelli di malondialdeide, MDA) nel siero sono state misurate come sostanze reattive all'acido tiobarbiturico (TBAR) secondo il metodo di modificazione spettrofotometrica descritto da Costa et al. [21]. In breve, i campioni di siero sono stati miscelati con una soluzione composta da acido tricloroacetico (15%; Merck, Darmstadt, Germania), acido tiobarbiturico (0,38%; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) e acido cloridrico (0.25 N; Mikrochem, Pezinok, Slovacchia) e riscaldato per 30 minuti a bagnomaria bollente. Dopo raffreddamento in acqua ghiacciata e centrifugazione, l'assorbanza del surnatante è stata misurata a 535 nm. La concentrazione di TBAR è stata determinata dalla curva standard preparata utilizzando 1,1,3,3-tetrametossi propano (malondialdeide-bis (dimetil acetale); Acros Organics, Geel, Belgio). I risultati sono stati espressi come nmol di MDA/mL di siero.

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2.2.3. Test dell'attività dei fagociti e identificazione delle sottopopolazioni di linfociti

Per determinare l'attività fagocitaria e la capacità di fagocitamento dei fagociti è stato utilizzato un test commerciale Phagotest® (Celonic, Monaco, Germania). Durante l'esecuzione del test sono state seguite le istruzioni del produttore. È stato applicato il test di immunocolorazione diretta per identificare sottopopolazioni selezionate di linfociti. Sono state utilizzate due combinazioni di anticorpi monoclonali anti-suino coniugati di topo: CD3e/CD21 e CD4/CD8a/CD25 secondo le specifiche fornite nella Tabella 2. Il sangue eparinizzato nella quantità di 50 µl è stato incubato con anticorpi monoclonali per 15 minuti al buio a temperatura di laboratorio. Dopo l'incubazione, alle provette è stato aggiunto 1 ml di soluzione di lisi BD FACS. Le provette sono state incubate per altri 20 minuti al buio a temperatura di laboratorio e poi centrifugate (300× g per 5 minuti). I pellet cellulari sono stati quindi lavati e centrifugati due volte con 1 mL di tampone fosfato salino (PBS; MP Biomedicals, Illkirch-Graffenstaden, Francia) a 300× g per 5 minuti. Infine, le cellule sono state risospese in 200 µL di PBS per la successiva analisi citometrica.

Tabella 2. Specifiche e quantità di anticorpi monoclonali anti-suini di topo utilizzati.

L'analisi dell'attività fagocitica e l'identificazione delle sottopopolazioni linfocitarie sono state eseguite su un citometro a flusso BD FACSCantoTM a sei colori (Becton Dickinson Biosciences, San Jose, CA, USA) utilizzando il software BD FACS DivaTM. La posizione delle cellule analizzate è stata delimitata nei dot plot FSC e SSC. Granulociti, monociti ed entrambe le popolazioni cellulari insieme, rispettivamente, sono stati selezionati per l'analisi dell'attività fagocitica. In base al basso contenuto di DNA nell'istogramma di fluorescenza rossa (FL-2), gli aggregati batterici sono stati esclusi da ulteriori analisi. La percentuale di fagociti attivi e l'intensità media della fluorescenza sono state determinate nell'istogramma di fluorescenza verde (FL-1). I linfociti recintati (Figura 1a,b) sono stati utilizzati per l'identificazione delle sottopopolazioni di linfociti. I linfociti CD3+ rappresentano i linfociti T e i linfociti B CD21+ (Figura 1c). La sottopopolazione CD4+CD8- è stata valutata come linfociti T helper, CD4-CD8+ come linfociti citotossici, CD4+CD8+ come linfociti T doppi positivi (Figura 1d) e CD4+CD25+ come linfociti T regolatori (Figura 1e). Le proporzioni dei linfociti sono espresse in percentuale.

2.3. Analisi statistica

I risultati sono stati valutati statisticamente mediante un test t non appaiato con il software statistico GraphPad Prism 8.0. Un valore di p < 0.05 è stato considerato statisticamente significativo. I risultati ottenuti in questo esperimento sono stati espressi come media ± errore standard delle medie (SEM).

Figura 1. Strategia di gating: (a) determinazione della posizione dei linfociti (rosso) sul dot plot di base (FSC-A rispetto a SSC-A); (b) rimuovere doppietti e agglomerati dall'analisi; (c) analisi della rappresentazione dei linfociti CD3+ e CD21+; (d) analisi della rappresentazione dei linfociti CD4+ e CD8+; (e) determinazione della rappresentazione dei linfociti CD4+CD25+ sull'istogramma da cellule CD4+ positive (gate con verde).

3. Risultati

3.1. Parametri Ematologici e Biochimici Sierici

Gli effetti dell'HS sui profili ematici e biochimici sono presentati nella Tabella 3. I parametri ematici determinati compreso il contenuto di globuli rossi, globuli bianchi, emoglobina, ematocrito, volume corpuscolare medio, proteine ​​totali, albumina, glucosio, urea, trigliceridi , colesterolo, creatinina, AST, Ca e P non sono risultati influenzati dal trattamento dietetico con HS. Tuttavia, l'integrazione alimentare con HS ha aumentato l'attività dell'ALP (p < 0,05).

Tabella 3. Effetto delle sostanze umiche su alcuni parametri ematologici e biochimici sierici nei suinetti

Il livello sierico di TBAR, prodotti secondari della perossidazione lipidica (che sono un parametro importante utilizzato nella determinazione della perossidazione lipidica), non è stato influenzato dall'aggiunta di HS.

3.2. Risposta immunitaria cellulare

L'aggiunta di HS al mangime dei suinetti non ha avuto un effetto significativo sulla percentuale di fagociti attivi (Tabella 4) e sulla capacità di fagocitazione dei fagociti (Tabella 5). I valori più alti di questi parametri della risposta immunitaria innata sono stati riscontrati nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di controllo.

Tabella 4. Effetto delle sostanze umiche sull'attività dei fagociti nel sangue dei suinetti valutato come percentuale di fagociti attivi – attività fagocitaria

Tabella 5. Effetto delle sostanze umiche sulla capacità di fagocitamento dei fagociti espressa come intensità media di fluorescenza (MFI).

Figura 2. Continua

Figura 2. Effetto delle sostanze umiche sulla percentuale di linfociti: (a) CD3+; (b) CD21+; (c) CD4+CD8-; (d) CD4-CD8+; (e) CD4+CD8+; (f) CD4+CD{{10}}; e (g) rapporto dei linfociti CD4:CD8 nel sangue dei suinetti. La colonna etichettata con un asterisco è significativamente diversa dal controllo (*** p < 0,001).

4. Discussione

4.1. Risposta immunitaria cellulare

L'obiettivo principale del nostro studio era monitorare il modo in cui le sostanze umiche (HS) influenzavano alcuni diversi indicatori dell'immunità cellulare. La percentuale di fagociti attivi e la loro capacità di fagocimento sono stati selezionati come indicatori per monitorare l'effetto sull'immunità cellulare innata. Nel nostro studio precedente, è stato riscontrato che l'aggiunta di HS alle diete ({{0}},8%) dei polli da carne ha aumentato significativamente l'attività fagocitica e l'intensità media della fluorescenza [16]. Inoltre, ELnaggar ed El-Kelawy [22] hanno osservato un aumento dell'attività fagocitica e dell'indice fagocitico dopo l'integrazione di acido umico nella dieta (0.1, 0.2 e 0. 4%) di polli Sacco. Risultati simili sono stati ottenuti con le galline ovaiole [17]. Nel presente studio, l'integrazione di HS nella dieta dei suinetti non ha avuto effetti significativi sulla fagocitosi. Tuttavia, la percentuale di fagociti attivi e la loro capacità di fagocimento erano numericamente più elevate nei suinetti trattati con HS rispetto ai suinetti del gruppo di controllo. Secondo Sanmiguel e Rondón [23], l’effetto dell’HS sui fagociti dipende dal tempo. Hanno scoperto che l'integrazione di HS nelle diete (0.1 e 0.2%) delle galline ovaiole aumentava l'indice fagocitico nei giorni 8 e 30 di applicazione, ma rispetto a quelli di Wang et al. [2], i quali hanno scoperto che i suini a cui era stato aggiunto l'10% di HS nel mangime avevano una conta linfocitaria relativa più elevata. Risultati simili sono stati ottenuti per il pollame, che è stato alimentato con una dieta integrata con 0,15% di umato [24], o è stata integrata con 20 mg di acido umico/kg di peso corporeo in acqua potabile [25]. Secondo Cetin et al. [24], l'integrazione delle diete delle galline ovaiole con composti umici determina un aumento significativo della conta dei linfociti, che può essere attribuito all'aumento della produzione di IL-2, nonché all'espressione di IL{{29} } recettore sui linfociti. Le sostanze umiche sembrano potenziare l'attività delle cellule produttrici di IL-2-. Tuttavia, altri autori non hanno osservato alcun effetto significativo sulla conta dei linfociti nei suini alimentati con mangime arricchito di acido umico [26] così come nei polli a cui erano stati somministrati acidi umici nell'acqua potabile [27] o nella loro dieta [22]. . I nostri risultati sono simili alle osservazioni di Mudroˇnová et al. [16], i quali hanno scoperto che la percentuale di linfociti CD4 era significativamente aumentata nei broiler alimentati con supplementazione di HS (0,8%) rispetto al gruppo di controllo. Hanno anche notato una diminuzione significativa dei linfociti CD8+ (linfociti T citotossici), che ha portato a un rapporto CD4:CD8 statisticamente più elevato, utilizzato come indicatore della stimolazione immunitaria. D'altra parte, l'alimentazione delle galline ovaiole con una dieta allo 0,5% di HS ha aumentato significativamente la proporzione di linfociti IgM+ che rappresentano una sottopopolazione di linfociti B e ha ridotto significativamente la proporzione di linfociti CD3+ che rappresentano i linfociti T totali. La proporzione di linfociti T helper e T citotossici non è stata influenzata [17]. Sulla base dei nostri risultati e di vari studi, ne consegue che l'HS può avere un effetto immunostimolante che può essere influenzato dalla composizione e dalla quantità di umani utilizzati, dal metodo di somministrazione, dalla specie animale e, secondo ELnaggar e El -Kelawy [22], dall'allevamento di animali in varie regioni del mondo, diverse per clima. L'immunomodulazione dell'HS può teoricamente consistere nella formazione di complessi di umani con saccaridi. Questi complessi si legano alla superficie dei linfociti T e delle cellule NK e influenzano la loro funzione, compresa la produzione di citochine, che influenzano ulteriormente altre cellule del sistema immunitario [28].

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4.2. Parametro ematologico e biochimico sierico

Un altro obiettivo di questo studio era valutare parametri ematici e biochimici selezionati di suinetti alimentati con diete integrate con HS. Non è stata riscontrata alcuna differenza significativa nelle variabili selezionate del metabolismo proteico, energetico e minerale, nonché negli indici ematologici, tra il gruppo sperimentale di animali con integratori alimentari di HS e il gruppo di controllo, ad eccezione dell'attività ALP nel presente studio. Gli indicatori biochimici nel nostro studio rientravano nell'intervallo di riferimento in tutti i suinetti, secondo Doubek et al. [29] e Kraft e Dürr [30]. I nostri risultati sono in linea con il lavoro precedente di Wang et al. [2], che non hanno riscontrato alterazioni significative nei globuli rossi e bianchi nel corso della sperimentazione nel loro studio per scoprire gli effetti dell'HS sulle variabili del sangue nei suini in finissaggio. Dopo il trattamento con una dieta contenente HS, Herzig et al. [31], così come Šamudovská e Demeterová [32], hanno osservato un aumento non significativo dell’attività ALP nei polli. Nella nostra indagine, abbiamo scoperto che il gruppo sperimentale aveva un’attività ALP significativamente più elevata rispetto al gruppo di controllo. I loro valori, nel frattempo, sono rimasti all'interno dell'intervallo di riferimento per i livelli di ALP nei suini (2–17 kat·L −1) [29,30]. D'altra parte, Jad'uttová et al. [33] e Rath et al. [34] hanno notato una significativa riduzione dell'attività dell'ALP nei polli dopo l'alimentazione con HS. Secondo questi autori, i livelli ematici di ALP nei broiler a cui è stato somministrato un supplemento alimentare di HS pari all'1,00% sono diminuiti. Sebbene i valori diminuiti di attività ALP nello studio Rath et al. [34] erano statisticamente diversi rispetto ai controlli, non riflettevano alcun effetto tossico dell'HS su organi selettivi (muscoli, reni, cuore o fegato). La quantità di HS fornita dalla dieta può influenzare la concentrazione di minerali nel sangue. I livelli di calcio e fosforo nel siero del sangue dei suinetti non sono stati influenzati dalla somministrazione di HS ad una concentrazione di 0,5%. La capacità dell’HS di chelare i metalli, che è influenzata da una quantità significativa di catene laterali di acido carbossilico, potrebbe essere la ragione della diminuzione delle concentrazioni sieriche minerali [34]. Nel nostro studio, le concentrazioni di calcio e fosforo nel sangue dei suinetti non sono diminuite al di sotto dei valori di riferimento mediante l'aggiunta di HS alla miscela di mangime del gruppo sperimentale. L’MDA è il prodotto della perossidazione lipidica causata dai radicali liberi dell’ossigeno, che può essere utilizzato come marcatore per valutare lo stato antiossidante e la perossidazione lipidica [35]. L'MDA è stato determinato come biomarcatore dello stress ossidativo misurando i livelli di sostanze reattive all'acido tiobarbiturico (TBAR) nel sangue. Una diminuzione dello stress ossidativo è caratterizzata da una riduzione dei livelli di MDA. Precedenti ricerche hanno dimostrato che l’HS può avere proprietà antiossidanti, proteggendo da una varietà di disturbi legati allo stress ossidativo tipicamente causato dai radicali liberi. Ad esempio, Wang et al. [15] hanno scoperto che l'integrazione alimentare di umato di sodio (2000 mg·kg−1) potrebbe migliorare lo stato antiossidante dei suinetti svezzati. Hanno osservato una riduzione significativa del contenuto di MDA nel siero, nonché un aumento significativo della capacità antiossidante totale. Tuttavia gli HS sono materiali naturali dalla composizione variabile, che possono determinare un'efficacia diversa, che può dipendere anche dalla quantità somministrata. Nel presente esperimento, non è stata osservata alcuna variazione nei livelli sierici di MDA (TBAR) dei suinetti alimentati con HS rispetto al gruppo di controllo. I nostri risultati sono coerenti con Zhang et al. [36], i quali hanno scoperto che l'aggiunta di umato di sodio alle diete (0,1, 0,3 e 0,5%) delle galline ovaiole non ha avuto alcun effetto sulla capacità antiossidante totale del siero e sui valori di MDA.

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5. Conclusioni

Sulla base dei risultati ottenuti in questo studio, si può concludere che un'integrazione alimentare con 0,5% di sostanze umiche potrebbe avere un effetto stimolante su alcune cellule immunitarie dei suinetti. Si è verificato un aumento significativo della proporzione di linfociti CD4+CD8- nel sangue. La supplementazione con sostanze umiche ha aumentato l'ALP sierica. Tuttavia questi valori rientrano ancora nel range di riferimento. I risultati hanno mostrato che anche una concentrazione così bassa di HS può influenzare positivamente l'immunità cellulare nei suinetti. Dato che la concentrazione di sostanze umiche da noi scelta ha avuto un effetto significativo solo su alcuni indicatori dell'immunità cellulare, saranno necessari ulteriori studi per scegliere una concentrazione adeguata e confermare l'effetto stimolante sull'immunità in questa categoria di animali.

Riferimenti

1. Peña-Méndez, EM; Havel, J.; Patoˇcka, J. Sostanze umiche-composti di struttura ancora sconosciuta: applicazioni in agricoltura, industria, ambiente e biomedicina. J.Appl. Biomedico. 2005, 3, 13–24. [RifCroce]

2. Wang, Q.; Chen, YJ; Ehi, JS; Kim, HJ; Cho, JH; Kim, IH Effetti di sostanze umiche supplementari sulle prestazioni di crescita, sulle caratteristiche del sangue e sulla qualità della carne nei suini da ingrasso. Più vivo. Sci. 2008, 117, 270–274. [RifCroce]

3. Visser, SA Effetto delle sostanze umiche sugli animali superiori e sull'uomo, possibile utilizzo dei composti umici nelle cure mediche. Negli Atti dell'incontro della International Humic Acid Society, Siviglia, Spagna, 1988; P. 27.

4. Stevenson, FJ Chimica dell'humus: genesi, composizione, reazioni; Wiley-Inter-Science: New York, NY, USA, 1994; pagine 34–41.

5. Hassan, HMA; Mohamed, MA; Youssef, AW; Hassan, ER Effetto dell'uso di acidi organici per sostituire i promotori della crescita antibiotici sulle prestazioni e sulla microflora intestinale dei polli da carne. Asiatico-australiano. J.Anim. Sci. 2010, 23, 1348–1353. [RifCroce]

6. Gálik, B.; Hrnˇcár, C.; Gašparoviˇc, M.; Rolinec, M.; Hanušovský, O.; Juráˇcek, M.; Simko, M.; Zábranský, L.; Kovacik, A. L'effetto delle sostanze umiche sulla qualità della carne nell'ingrasso dei fagiani da fattoria (Phasianus colchicus). Agricoltura 2023, 13, 295. [CrossRef]

7. Karaoglu, M.; Macit, M.; Esenbuga, N.; Durdag, H.; Turgut, L.; Bilgin, OC Effetto dell'umato supplementare a diversi livelli sulle prestazioni di crescita, sulla macellazione e sulle caratteristiche della carcassa dei polli da carne. interno J. Poult. Sci. 2004, 3, 406–410.

8. Ji, F.; McGlone, JJ; Kim, SW Effetti delle sostanze umiche alimentari sulle prestazioni di crescita dei suini, sulle caratteristiche della carcassa e sull'emissione di ammoniaca. J.Anim. Sci. 2006, 84, 2482–2490. [RifCroce]

9. Lacková, Z.; Zigo, F.; Farkašová, Z.; Ondrašoviˇcová, S. L'effetto delle sostanze umiche come integratore organico sulle prestazioni di ingrasso, sulla qualità della carne e sui parametri biochimici selezionati dei conigli. Vita 2022, 12, 1016. [CrossRef]

10. Kaevska, M.; Lorencova, A.; Videnska, P.; Sedlar, K.; Provaznik, I.; Trckova, M. Effetto dell'umato di sodio e dell'ossido di zinco utilizzati nella profilassi della diarrea post-svezzamento sulla composizione del microbiota fecale nei suinetti svezzati. Veterinario. Med. 2016, 61, 328–336. [RifCroce]

11. Trckova, M.; Matlova, L.; Hudcova, H.; Martino, F.; Zraly, Z.; Dvorska, L.; Beran, V.; Pavlik, I. Torba come integratore alimentare per animali: una recensione. Veterinario. Med. -Ceco. 2005, 50, 361–377. [RifCroce]

12. Weber, TE; van Sambeek, DM; Gabler, Carolina del Nord; Kerr, BJ; Moreland, S.; Johal, S.; Edmonds, MS Effetti dell'acido umico e butirrico nella dieta sulle prestazioni di crescita e sulla risposta al lipopolisaccaride nei suini giovani. J.Anim. Sci. 2014, 92, 4172–4179. [RifCroce]

13. Mao, Y. Modulazione delle prestazioni di crescita, composizione della carne, stato ossidativo e immunità dei polli da carne mediante acidi fulvici dietetici. Pollame. Sci. 2019, 98, 4509–4513. [CrossRef] [PubMed]

14. Stepchenko, LM Il ruolo dei preparati umici nella gestione dei processi metabolici nella formazione di prodotti biologici di animali agricoli. In risultati e prospettive per l'uso delle sostanze umiche in agricoltura; Casa editrice dell'Istituto Agrario: Dnepropetrovsk, Ucraina, 2008; pagine 70–74. (In russo)

15. Wang, D.; Ying, J.; Zou, P.; Zhou, Y.; Wang, B.; Yu, D.; Li, W.; Zhan, X. Effetti dell'integrazione alimentare di acido umico sodico e ossido di zinco sulle prestazioni di crescita, sullo stato immunitario e sulla capacità antiossidante dei suinetti svezzati. Animali 2020, 10, 2104. [CrossRef] [PubMed]

16. Mudroˇnová, D.; Karaffova, V.; Pešulová, T.; Košˇcová, J.; Marušˇcáková, IC; Bartkovský, M.; Marcinˇcáková, D.; Ševˇcíková, Z.; Marcinˇcák, S. L'effetto delle sostanze umiche sul microbiota intestinale e sulla risposta immunitaria dei polli da carne. Agricolo Alimentare. Immunolo. 2020, 31, 137–149. [RifCroce]

17. Mudroˇnová, D.; Karaffova, V.; Semjon, B.; Nad', P.; Košˇcová, J.; Bartkovský, M.; Makiš, A.; Bujˇnák, L.; Nagy, J.; Mojžišová, J.; et al. Effetti dell’integrazione alimentare di sostanze umiche sui parametri produttivi, sullo stato immunitario e sul microbiota intestinale delle galline ovaiole. Agricoltura 2021, 11, 744. [CrossRef]

18. Commissione Europea. Direttiva 2010/63/UE del Parlamento Europeo e del Consiglio del 22 settembre 2010 sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici. Spento. J.Eur. Unione 2010, 276, 33–79.

19. Šimeˇcek, K.; Zeman, L.; Heger, J. Fabbisogno nutrizionale e tabelle dei valori nutrizionali dei mangimi per suini, 3a ed.; Accademia Ceca delle Scienze Agrarie: Brno, Repubblica Ceca, 2000; 125p. (In ceco)

20. Commissione Europea. Regolamento (CE) n. 152/2009 della Commissione, del 27 gennaio 2009, che stabilisce i metodi di campionamento e analisi per il controllo ufficiale dei mangimi. Spento. J.Eur. Unione. 2009, 54, 2–54.

21. Costa, CM; Santos, RCC; Lima, ES Una semplice procedura automatizzata per la misurazione dei tioli nei campioni di siero umano. J. Bras. Patol. Med. Laboratorio. 2006, 42, 345–350. [RifCroce]

22. ELnaggar, AS; El-Kelawy, MI Effetto dell'integrazione di acido umico sulle prestazioni produttive, sui costituenti del sangue, sulla risposta immunitaria e sulle caratteristiche della carcassa del pollo Sasso. Egitto. J.Anim. prod. 2018, 55, 75–84.

23. Sanmiguel, PR; Rondón, BI L'integrazione con sostanze umiche influisce sull'immunità innata nelle galline ovaiole in fase di digiuno. Rev. MVZ Córdoba 2016, 21, 5198–5210. [RifCroce]

24. Cetin, E.; Guclu, BK; Cetin, N. Effetto dell'umato alimentare e dell'integrazione di acidi organici sullo stress sociale indotto dall'elevata densità di allevamento nelle galline ovaiole. J.Anim. Veterinario. Avv. 2011, 10, 2402–2407.

25. Salah, H.; Mansour, E.; Reham, RR; Abd El Hamid, ES Studio sull'effetto dell'acido umico sulle prestazioni di crescita, immunologiche, alcuni parametri ematici e di controllo del Clostridium intestinale nei polli da carne. Zag. Veterinario. J. 2015, 43, 102–109. [RifCroce]

26. Kim, K.; Bae, I.; Cho, J.; Choi, Y.; Ah, J.; Choi, J. Effetti dell'integrazione di acido umico e polvere di foglie di mirtillo nei mangimi sulla produttività, sul sangue e sulla qualità della carne dei suini da ingrasso. Scienza dell'alimentazione Anima. Risorsa. 2019, 39, 276–285. [CrossRef] [PubMed]

27. Lala, AO; Okwelum, N.; Irekhore, OT; Ogunlade, BA; Adigun, AA; Elegbede, LA; Oyedeji, MM Parametri ematologici e biochimici di polli da carne addizionati con acido umico nell'acqua da bere. Appl. Troppo. Agricolo. 2016, 21, 74–78.

28. Terratol, LLC Effetti dell'acido umico su animali e esseri umani. Disponibile online: https://fulvic.info/wp-content/uploads/2019 /01/M-Terratrol_Articolo-1.pdf (accesso il 10 agosto 2022).

29. Doubek, J.; Šlosárková, S.; ˇReháková, K.; Bouda, J.; Scheer, P.; Piperisova, I.; Tomenendálová, J.; Matalová, E. Interpretazione dei risultati biochimici ed ematologici di base negli animali, 2a ed.; Noviko: Brno, Repubblica Ceca, 2010; P. 102. (In ceco)

30. Kraft, W.; Dürr, UM Klinická Laboratórna Diagnostika vo Veterinárnej Medicíne, 1a ed.; Hajko & Hajková: Bratislava, Slovacchia, 2001; pp. 1–380. (In slovacco)

31. Herzig, I.; Navrátilova, M.; Totušek, J.; Suchý, P.; Veˇcerek, V.; Blahova, J.; Zralý, Z. L'effetto dell'acido umico sull'accumulo di zinco nei tessuti dei polli da carne di pollo. Il ceco J. Anim. Sci. 2009, 54, 121–127. [RifCroce]

32. Šamudovská, A.; Demeterová, M. Effetto della dieta integrata con composti umici naturali e umato di sodio sulle prestazioni e variabili metaboliche selezionate nei polli da carne. Acta Vet. Brno 2010, 79, 385–393. [RifCroce]

33. Jad'uttová, I.; Marcinˇcáková, D.; Bartkovský, M.; Semjon, B.; Harˇcárová, M.; Nagyova, A.; Váczi, P.; Marcinˇcák, S. L'effetto delle sostanze umiche alimentari sulle prestazioni di ingrasso, sulla resa della carcassa, sui parametri biochimici del sangue e sul profilo minerale osseo dei polli da carne. Acta Vet. Brno 2019, 88, 307–313. [RifCroce]

34. Rath, Carolina del Nord; Huff, NOI; Huff, GR Effetti dell'acido umico sui polli da carne. Pollame. Sci. 2006, 85, 410–414. [RifCroce]

35. Sumida, S.; Tanaka, K.; Kitao, H.; Nakadomo, F. Perossidazione lipidica indotta dall'esercizio fisico e perdita di enzimi prima e dopo l'integrazione di vitamina E. interno J. Biochimica. 1989, 21, 835–838. [RifCroce]

36. Zhang, AR; Pirzado, SA; Liu, GH; Chen, ZM; Chang, WH; Cai, HY; Bryden, WL; Zheng, AJ L'integrazione alimentare con umato di sodio migliora la qualità delle uova e la funzione immunitaria delle galline ovaiole. J.Appl. Anima. Nutr. 2020, 8, 93–99. [RifCroce]