Effetto terapeutico di Cistanche Deserticola sulla defecazione nel modello di ratto con costipazione senile
Mar 27, 2022
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Xia Zhang, Fa-Juan Zheng, Zhen Zhang
Astratto
SFONDO
La stitichezza è una delle malattie funzionali gastrointestinali croniche. Influisce gravemente sulla qualità della vita. Cistanche deserticola (C. deserticola) può curare la stitichezza ovviamente, ma il suo meccanismo non è stato chiarito. Abbiamo supposto che il suo meccanismo migliorasse la motilità intestinale stimolando le Cajalcells interstiziali (ICC). L'attivazione del recettore C-kit sulla superficie dell'ICC è strettamente correlata alla funzione dell'ICC e le vie di segnalazione del fattore delle cellule staminali (SCF)/C-kit svolgono un ruolo importante in essa. Per studiare il meccanismo di come C. deserticola tratta la stitichezza, questo studio mirava a stabilire un modello di stitichezza nei ratti ed esplorare il ruolo della via di segnalazione SCF/C-kit nel trattamento.
SCOPO
Per esplorare le vie di segnalazione del kit SCF/C nel ruolo di C. deserticola per il trattamento della stitichezza mediante un modello di ratto di stitichezza.
METODI
Quarantotto 8-ratti Sprague-Dawley mo-old sono stati divisi in 4 gruppi con il metodo del peso casuale: gruppo normale (n=12), gruppo modello (n=12), gruppo C. deserticola (n=12) e gruppo bloccante (n=12). Il gruppo normale ha ricevuto una soluzione salina normale per via gastrica; il gruppo modello ha ricevuto loperamide mediante sonda gastrica; il gruppo bloccante ha ricevuto loperamide e C. deserticola mediante sonda gastrica e STI571 è stato iniettato per via intraperitoneale. Durante il trattamento, il peso, i granuli fecali e la qualità fecale sono stati registrati ogni 10 giorni. Il giorno 20 dopo l'induzione del modello, i tessuti del colon di ciascun gruppo sono stati rimossi. La colorazione con ematossilina ed eosina è stata utilizzata per osservare i cambiamenti patologici. I livelli di espressione dei geni SCF, C-kit e Acquaporina sono stati rilevati mediante immunoistochimica, western blotting e reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale. I mitocondri epiteliali del colon e le cellule caliciformi sono stati osservati mediante microscopia elettronica a trasmissione.
RISULTATI
Rispetto al gruppo normale, con il progredire del trattamento, il peso dei ratti nel modello e nel gruppo bloccante è diminuito significativamente, il peso delle feci è diminuito e la qualità delle feci era secca (P < {{0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" ha="" invertito="" la="" diminuzione="" del="" peso="" corporeo="" e="" del="" peso="" delle="" feci="" e="" ha="" migliorato="" la="" qualità="" delle="" feci.="" l'analisi="" istopatologica="" ha="" indicato="" che="" l'epitelio="" della="" mucosa="" del="" colon="" nel="" gruppo="" modello="" era="" incompleto="" e="" la="" disposizione="" delle="" ghiandole="" era="" irregolare="" o="" danneggiata.="" il="" trattamento="" con="" c.="" deserticola="" ha="" migliorato="" l'integrità="" e="" la="" continuità="" delle="" cellule="" epiteliali="" e="" la="" disposizione="" regolare="" delle="" ghiandole.="" gli="" agenti="" bloccanti="" hanno="" inibito="" gli="" effetti="" di="" c.="" deserticola="" l'immunoistochimica="" e="" la="" reazione="" a="" catena="" della="" polimerasi="" quantitativa="" in="" tempo="" reale="" hanno="" mostrato="" che="" l'espressione="" di="" scf="" e="" c-kitproteina="" o="" geni="" nel="" tessuto="" del="" colon="" del="" gruppo="" modello="" era="" diminuita="" (p=""><0,05), mentre="" il="" trattamento="" con="" c.="" deserticola="" ha="" aumentato="" l'espressione="" di="" proteine="" o="" geni="" (p=""><0,05). il="" western="" blotting="" ha="" mostrato="" che="" l'espressione="" di="" acquaporina="" apq3="" era="" aumentata,="" mentre="" l'espressione="" di="" cx43="" è="" diminuita="" nel="" gruppo="" modello.="" il="" trattamento="" con="" c.="" deserticola="" ha="" inibito="" l'espressione="" di="" apq3="" e="" ha="" promosso="" l'espressione="" di="" cx43.="" la="" microscopia="" a="" trasmissione="" elettronica="" ha="" mostrato="" che="" i="" mitocondri="" dell'epitelio="" del="" colon="" nel="" gruppo="" modello="" erano="" gonfi="" e="" disposti="" in="" modo="" disordinato="" e="" i="" microvilli="" erano="" sparsi.="" la="" condizione="" era="" migliore="" nel="" gruppo="" di="" c.="" deserticola.="" i="" topi="" trattati="" con="" il="" bloccante="" sti571="" hanno="" confermato="" che="" il="" blocco="" del="" percorso="" del="" kit="" scf/c="" ha="" inibito="" il="" miglioramento="" della="" stitichezza="" da="" parte="" di="" c.="">
CONCLUSIONE
C. deserticola ha migliorato la defecazione nei ratti con costipazione e la via di segnalazione SCF/C-kit, che è un collegamento chiave della funzione ICC, ha svolto un ruolo importante nel trattamento.
Parole chiave:Cistanche desertiche; costipazione senile; Fattori delle cellule staminali; Kit C
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INTRODUZIONE
La costipazione senile (SC) è una delle malattie funzionali gastrointestinali croniche comuni nei pazienti geriatrici, che induce o aggrava eventi cerebrovascolari e altre malattie e pregiudica gravemente la qualità della vita della popolazione anziana[1,2]. Secondo la medicina tradizionale cinese, le principali eziologia e patogenesi di SCare calore gastrointestinale, carenza di Yin e Jin e deumidificazione intestinale[3,4], mentre Cistanche deserticola (C. deserticola) può riscaldare i reni e rilassare le viscere. I ricercatori hanno riportato che l'effetto intestinale il miglioramento della motilità e il trattamento della SC sono chiari, ma il suo meccanismo non è stato chiarito[5,6]. Le cellule Cajal interstiziali (ICC) sono un tipo speciale di cellule mesenchimali nel tratto gastrointestinale. L'attivazione del recettore C-kit sulla superficie delle ICC è strettamente correlata alla proliferazione, differenziazione e funzione cellulare. Gli ICC partecipano alla patogenesi di molte disfunzioni motorie gastrointestinali[7,8]. L'attivazione di C-kit dipende dal legame del suo fattore di cellule staminali ligando (SCF)[9]. Per studiare l'effetto e il meccanismo d'azione di C. deserticola su SC, questo studio mirava a stabilire un modello SC nei ratti indotti da loperidolo per esplorare il ruolo della via di segnalazione del kit SCF/C nel trattamento della stitichezza da C. deserticola.
MATERIALI E METODI
Materiali sperimentali
Animali da esperimento:Gli animali da esperimento erano 48 maschi di 8-ratti Sprague Dawley di sesso maschile che pesavano 500-550 g; tutti acquistati da Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. I topi sono stati allevati nel laboratorio per animali di Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd., a cui sono stati dati normali luce diurna e notturna, cibo e bevande. Tutte le procedure hanno rispettato le linee guida gestionali emesse dal Comitato Etico dell'Ospedale di Medicina Tradizionale Cinese di Chongqing.
Reagenti primari:I reagenti primari includevano loperamide (Sigma, St. Louis, MO, Stati Uniti), C. deserticola di Hubei Jurui Traditional Chinese Medicine DecoctionCo. Ltd., STI571 della cinese Selleck Co. Ltd. e SCF, C-kit, connessina 43 (Cx43), acquaporina 3 (AQP3) e anticorpi anti-actina (Abcam, Cambridge, MA, Stati Uniti), PrimeScript II 1st Strand cDNA Kit di sintesi e Premix Taq™ (Ex Taq™ Versione 2.0)(Takara Co. Ltd., Giappone).
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Metodi
Preparazione e raggruppamento del modello SC:Per evitare l'influenza di fattori confondenti come il peso corporeo sui risultati sperimentali, i ratti sono stati raggruppati casualmente mediante il metodo di raggruppamento casuale a blocchi. Quarantotto ratti sono stati nutriti in modo adattativo per 1 settimana e i ratti sono stati numerati in ordine di peso da leggero a pesante. Secondo l'ordine del peso corporeo, i ratti sono stati divisi in 12 zone (il peso dei ratti in ciascuna zona era simile), con 4 ratti in ciascuna zona. Le 12 zone sono state divise in 4 gruppi di 12 (normale, modello, C. deserticola e bloccante). Ai ratti nel gruppo modello è stata somministrata loperamide (0.0625/100 g, 10 ml/kg) mediante sonda gastrica. La prima dose di sonda gastrica è stata raddoppiata e il farmaco è stato somministrato alle 10:00 ogni giorno, una volta al giorno per 20 giorni consecutivi. Al gruppo Thenormal è stata somministrata la stessa quantità di soluzione fisiologica mediante sonda gastrica. Inoltre, il gruppo del modello è stato trattato con C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) mediante sonda gastrica. Al gruppo bloccante è stato somministrato C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 mL/kg) mediante sonda gastrica e STI571 (25 mg/mL, 1 mL/kg) mediante iniezione intraperitoneale. Durante l'esperimento, il peso corporeo, il peso delle feci e le condizioni delle feci sono stati registrati ogni 10 giorni. Nessuna morte accidentale si è verificata in nessuno dei ratti. Venti giorni dopo, i ratti furono uccisi e il tessuto tecolonico fu rimosso per l'esame e la conservazione dell'azoto liquido. Le parti rimanenti sono state riparate e incorporate.
Analisi istopatologica:I ratti a digiuno durante la notte sono stati anestetizzati mediante iniezione intraperitoneale con il 7% di cloralio idrato (5 ml/kg) il giorno successivo. L'addome è stato aperto per separare il tessuto del colon e sono stati rimossi 8-10 mm del colon. Il contenuto intestinale è stato rimosso agitando delicatamente in polibutilenesuccinato preraffreddato e fissato per 24 ore in una soluzione di fissativo di paraformaldeide al 4%. È stata eseguita l'inclusione convenzionale in paraffina. Sezioni di tessuto (5 μm) sono state rimosse per la colorazione con ematossilina ed eosina e la morfologia istopatologica è stata osservata al microscopio.
Rilevazione dell'espressione di SCF e C-kit mediante colorazione immunoistochimica:I tessuti di paraffina esaminati dall'istopatologia sopra sono stati sezionati, reidratati con etanolo a gradiente di xilene decerato sezionato, antigene risolto mediante calore e sigillato per 1 ora con siero di capra a temperatura ambiente. Gli anticorpi primari SCF e C-kit sono stati aggiunti goccia a goccia e i tessuti sono stati mantenuti per una notte a 4 gradi. Dopo il risciacquo con polibutilenesuccinato, la perossidasi di rafano è stata gocciolata per etichettare l'anticorpo secondario, risciacquata con polibutilene succinato per 5 minuti, goccia 2,{5}} soluzione cromogena di acido diamminobutirrico, ricolorante con ematossilina, disidratazione alcolica a gradiente inverso, trasparente con xilene e un neutro sigillo in resina. Al microscopio, i nuclei erano blu-violacei e i risultati positivi erano particelle giallo-brunastre o gialle.
Rilevazione dell'espressione dell'mRNA del C-kit nel tessuto del colon mediante reazione a catena quantitativa della polimerasi in tempo reale (RT-qPCR):Il tessuto del colon di ratto congelato è stato macinato mediante un omogeneizzatore ed è stato aggiunto 1 ml di RNAiso Plus. L'RNA totale del tessuto del colon è stato estratto con il metodo cloroformio/isopropanolo e la qualità dell'RNA è stata rilevata mediante elettroforesi su gel. Dopo essere stato identificato da un imager gel Bio-Rad, 1 ug di RNA è stato retrotrascritto in cDNA da Takara PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit. Secondo il database NCBI Gene ID: 64030, la regione CDS del gene C-kit è stata trovata e combinata con Design NCBI Primer-Blast Sequenza di primer, sintetizzata da Sangon Biotech Co. Ltd, filamento di rilevamento della sequenza di primer C-kit 5'-AGGT GTACCGTTCCTGTCCC-3', filamento antisenso 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - filamento di actina 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', filamento antisenso 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'. L'amplificazione della PCR è stata eseguita su uno strumento per PCR in tempo reale Bio-RadCFX90. Le condizioni per il test PCR erano la denaturazione iniziale a 95 gradi per 5 minuti, 30 cicli di 95 gradi per 30 s, 60 gradi per 30 s e 72 gradi per 1 minuto seguita da un'estensione finale a 72 gradi per 10 minuti. 2-ΔΔCt (ΔCt=valore Ct - - valore Ct dell'actina) è stato preso per analizzare l'espressione genica relativa.
Rilevazione del livello di espressione proteica di Cx43 e AQP3 nel tessuto del colon mediante Western blotting:Circa 1 cm di tessuto del colon congelato è stato raccolto e lisato con liquido di pirolisi forte RIPA (100 μL). Il tessuto è stato omogeneizzato con un omogeneizzatore per vetro 20 volte e trasferito in una provetta da centrifuga da 1,5 mL. Il supernatante è stato estratto dopo centrifugazione a 12000 rpm a 4 gradi per 5 minuti e la concentrazione di proteine totali nel supernatante è stata determinata mediante il metodo BCA. Abbiamo rimosso 25 ug di proteina denaturata per eseguire l'elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide e quindi trasferito le proteine nel gel su una membrana di fluoride di polivinilidene a una corrente costante di 200 mA, quindi sigillata con liquido di confinamento di latte scremato al 5% per 2 ore a temperatura ambiente. Gli anticorpi primari corrispondenti sono stati diluiti con fluido sigillante, incubati a 4 gradi durante la notte, quindi lavati la resistenza della membrana e aggiunti secondi anticorpi. Dopo aver aggiunto il fluido ECL, sono stati posti sotto l'esposimetro per il test mediante un'analisi della densità ottica.
Microscopia elettronica a trasmissione:Abbiamo preso circa 1 cm di tessuto del colon prossimale, lo abbiamo fissato in glutaraldeide al 2,5% per 24 ore, l'abbiamo disidratato con acetone graduato, incorporato in Epon812 e tagliato sezioni ultrasottili da 50 nm su un ultramicrotomo. Le sezioni sono state colorate con biossido di uranio acetato e liquido colorante citrato di piombo a temperatura ambiente per 10 min. Abbiamo osservato i villi del colon, i mitocondri delle cellule epiteliali e le cellule caliciformi al microscopio elettronico a trasmissione Philips Tecnai-10.
analisi statistica
Il software SPSS 19.{1}} è stato utilizzato per l'analisi dei dati e il software GraphPad Prism8.4 per tracciare i risultati. Il test di Shapiro-Wilk è stato utilizzato per il test di normalità. I dati con distribuzione normale erano rappresentati da media ± DS. Gli elementi di errore sono stati utilizzati per rappresentare la media ± DS dell'emoglobina dopo il trattamento. Il test t dello studente è stato utilizzato per il confronto tra due gruppi. L'analisi della varianza è stata utilizzata per il confronto tra più gruppi. Il metodo Student-Newman-Keuls è stato utilizzato per il confronto tra più gruppi a coppie e il test di Dunnett è stato utilizzato per misurare le differenze tra ciascun gruppo sperimentale e il gruppo di controllo in sequenza. I dati associati sono stati misurati in base a più punti temporali e l'analisi della varianza dei dati di misurazione ripetuta è stata condotto. Se il test di sfericità ha mostrato P > 0.{{10}}5, è stata utilizzata l'analisi ripetuta della varianza dei dati di misurazione. Se P < 0,05,="" è="" stata="" presa="" l'equazione="" di="" stima="" generalizzata.="" i="" dati="" che="" non="" erano="" conformi="" a="" una="" distribuzione="" normale="" erano="" rappresentati="" da="" m="" (p25,="" p75)="" ed="" è="" stato="" utilizzato="" il="" test="" della="" somma="" dei="" ranghi="" di="" kruskal-wallis="" h="" per="" il="" confronto="" tra="" i="" gruppi.="" il="" test="" χ2="" è="" stato="" utilizzato="" per="" confrontare="" i="" gruppi="" quando="" i="" dati="" erano="" dati="" non="" ordinati="" e="" il="" test="" χ2="" di="" pearson="" è="" stato="" utilizzato="" se="" la="" proporzione="" di="" cellule="" con="" frequenza="" teorica="">< 5="" era="">< 20="" percento.="" se="" la="" proporzione="" di="" cellule="" con="" frequenza="" teorica="">< 5="" era="" maggiore="" o="" uguale="" al="" 20="" percento,="" è="" stato="" utilizzato="" il="" test="" esatto="" di="" fisher.="" p="">< 0,05="" è="" stato="" utilizzato="" per="" determinare="" che="" la="" differenza="" era="" statisticamente="">
Figura 1 Cambiamenti istopatologici del colon.
RISULTATI
Condizioni generali
Un giorno dopo la sonda gastrica con loperamide rispetto al gruppo normale, il peso corporeo e il peso delle feci nel gruppo modello erano significativamente ridotti (P <{0}}.05), ma="" non="" vi="" era="" alcuna="" differenza="" significativa="" nella="" qualità="" delle="" feci="" punteggio="" (p=""> 0,05). Il trattamento con C. deserticola nel gruppo modello ha rallentato la diminuzione del peso corporeo e del peso delle feci (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
Istopatologia del colon
La colorazione con ematossilina ed eosina del tessuto del colon dei ratti è mostrata nella Figura 1. Nel gruppo normale, i villi intestinali erano intatti, la mucosa intestinale era intatta e continua, le cellule e le ghiandole erano disposte regolarmente. La mucosa e la sottomucosa non erano infiltrate da cellule infiammatorie e la struttura dei tessuti era normale. Nel gruppo modello, i villi intestinali e la mucosa sono stati in gran parte distrutti, i villi locali sono stati liberati e disposti in modo lasco e parte della struttura ghiandolare è scomparsa. Nel gruppo C. deserticola, la colorazione istopatologica era inferiore a quella del gruppo modello, ma c'era necrosi in alcune cellule caliciformi. Dopo iniezione intraperitoneale nel gruppo bloccante, rispetto al gruppo C.deserticola, c'era ancora la perdita locale dei villi intestinali, e c'era frattura e perdita della mucosa intestinale.
Figura 2 Espressione del fattore delle cellule staminali e del relativo rapporto di densità ottica nel tessuto del colon mediante rilevamento immunoistochimico.
Rilevazione dell'espressione del fattore delle cellule staminali e della proteina C-kit mediante colorazione immunoistochimica
La colorazione immunoistochimica ha mostrato che SCF e C-kit erano espressi nel colon del gruppo di controllo. Rispetto al gruppo di controllo, l'espressione di SCF e C-kit nel gruppo modello è stata significativamente ridotta (P < 0.05).="" rispetto="" al="" gruppo="" modello,="" l'espressione="" di="" scf="" e="" c-kit="" nel="" gruppo="" c.="" deserticola="" è="" stata="" significativamente="" aumentata="" (p=""><{8}}.05). non="" c'era="" differenza="" nell'espressione="" di="" scf="" e="" c-kit="" tra="" i="" gruppi="" bloccante="" e="" modello="" (p=""><0, 05,="" figure="" 2="" e="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05). Questi risultati hanno indicato che l'espressione di C-kit regolata da C. deserticola ha partecipato al miglioramento della stitichezza e che i bloccanti hanno inibito l'efficacia di C. desertico.
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Il western blotting ha mostrato che la proteina AQP3 era espressa a un livello basso nel gruppo di controllo normale, mentre era significativamente aumentata nel gruppo modello rispetto al gruppo di controllo (Figura 5) (P <0.05) .="" l'espressione="" della="" proteina="" aqp3="" è="" stata="" ridotta="" dopo="" il="" trattamento="" con="" c.="" deserticola="" e="" l'effetto="" inibitorio="" di="" c.deserticola="" sull'espressione="" di="" aqp3="" è="" stato="" inibito="" dal="" trattamento="" bloccante="" (p=""><0, 05).="" l'espressione="" di="" cx43="" era="" l'opposto="" di="" quella="" di="" aqp3.="" questi="" risultati="" hanno="" suggerito="" che="" l'effetto="" farmacologico="" di="" c.="" deserticola="" sui="" ratti="" con="" sc="" è="" stato="" ottenuto="" promuovendo="" l'espressione="" di="" cx43="" e="" inibendo="" l'espressione="" di="" aqp3="" (figure="">
Microscopia elettronica a trasmissione
Dopo l'induzione della loperamide, si sono verificati gonfiore mitocondriale e autofagia in alcune cellule epiteliali della mucosa del colon nel gruppo modello. Il numero e la lunghezza dei microvilli intestinali sono diminuiti e si è verificata la picnosi delle cellule caliciformi (Figura 8). Dopo il trattamento con C. deserticola, il numero di microvilli intestinali è aumentato. I microvilli erano disposti ordinatamente e la struttura era completa. Le cellule caliciformi sono più corte, la morfologia irregolare dei mitocondri e la picnosi grave delle cellule caliciformi.
Figura 3 Espressione di C-kit e relativo rapporto di densità ottica nel tessuto del colon mediante rilevamento immunoistochimico.
DISCUSSIONE
La stitichezza è comune nella popolazione anziana ed è uno dei sintomi più comuni che influiscono sullo stato di salute e sulla qualità della vita delle persone anziane[10,11]. Intermezzi della medicina tradizionale cinese, Bai et al[12] credevano che la patogenesi di base della SC fosse la disfunzione della funzione di conduzione dell'intestino crasso, insufficienza corporea senile, graduale perdita delle funzioni epatiche e renali, mancanza di qi e sangue e perdita di liquidi corporei ,che ha portato a feci secche, con conseguente costipazione[13]. La SC mette sotto pressione i pazienti e le loro famiglie in molti aspetti ed è importante esplorarne la patogenesi.
C. deserticola ha le funzioni di tonificare il rene Yang, giovare al sangue e regolare l'immunità del corpo[14]. C. deserticola e decotto di erbe cinesi contenenti C. deserticola sono stati ampiamente utilizzati nel trattamento della stitichezza e l'effetto clinico è notevole. Du et al[15] hanno scoperto in un modello di ratto di carenza di Yang e costipazione che C. deserticola migliorava l'ampiezza della contrazione del colon isolato, rafforzava la contrattilità del tratto intestinale e riportava alla normalità il livello degli ormoni gastrointestinali. Inoltre, la fibra alimentare di C. deserticola, un sottoprodotto della lavorazione di C. deserticola, migliora la capacità di trattenere l'acqua delle feci e ha il vantaggio di basse dosi e di buoni effetti nel nutrire l'intestino e nel migliorare la defecazione[16]. Il nostro studio ha scoperto che il trattamento con C. deserticola ha migliorato l'umidità fecale e l'istopatologia del colon dei ratti con costipazione.
Gli ICC si trovano in tutto il tratto intestinale e svolgono un ruolo vitale nel controllo neurale del movimento intestinale come pacemaker e trasmissione del nervo intestinale[17]. C-kit[18]. Il sistema SCF/C-kit è cruciale nello sviluppo di ICC. La via di segnalazione SCF/C-kit è stata analizzata durante il trattamento della stipsi da trasferimento lento nei ratti mediante agopuntura[19]. L'elettroagopuntura al punto di Tianshu ha aumentato il numero di ICC del colon nei topi trattati con ACK2-, ha sovraregolato l'espressione delle proteine SCF e C-kit e ha invertito il fenotipo dell'ICC. La prescrizione per tonificare il qi e la milza può aumentare l'espressione di ICC nel tessuto del colon e sovraregolare l'espressione di C-kit e SCF mRNA, migliorando così i sintomi della stitichezza[20]. Nel nostro studio, l'immunoistochimica ha mostrato che C. deserticola ha sovraregolato significativamente l'espressione della proteina SCF e C-kit in un modello di ratto di SC e RT-qPCR ha mostrato che C. deserticola sovraregolava significativamente l'espressione di C-kitmRNA. Il bloccante C-kit ha inibito la sovraregolazione dell'espressione di SCF e C-kit indotta da C. deserticola.
Il contenuto di acqua fecale e il trasporto di acqua nel colon sono strettamente correlati agli AQP, che svolgono un ruolo importante nel metabolismo idrico intestinale[21]. In uno studio su ratti con costipazione da trasporto lento, il decotto di defecazione ha migliorato significativamente i sintomi della stitichezza regolando l'assorbimento intestinale di acqua attraverso la sottoregolazione di AQP3 e AQP4[22]. In un modello di ratto di costipazione funzionale, il meccanismo di trattamento del fluido orale Xiaofu Tongjie per la costipazione funzionale può essere realizzato regolando l'espressione del polipeptide intestinale vasoattivo e dell'AQP3 nel colon[23]. Gapjunctions svolgono un ruolo essenziale nel mediare la contrazione sincrona delle cellule muscolari lisce. Cx43 è la proteina più importante durante questo processo[24]. La perdita dell'espressione di Cx43 può essere parzialmente responsabile della disfunzione motoria della muscolatura liscia[25]. La riparazione della struttura della rete del sistema nervoso intestinale nei ratti con costipazione di transito lenta può migliorare l'espressione di Cx43 ecc. e i sintomi della stitichezza[26]. Questi risultati indicano che l'aumento l'espressione di AQP3 diminuisce il contenuto d'acqua fecale, portando a costipazione, che può essere un importante meccanismo di costipazione. L'espressione di Cx43 può essere correlata alla contrazione della muscolatura liscia intestinale e ridurre l'insorgenza di costipazione. Nel nostro studio, il western blotting ha mostrato che l'espressione di Cx43 era aumentata e l'espressione di AQP3 era inibita dal trattamento con C.deserticola, che ha comportato un aumento della contrazione della muscolatura liscia e una diminuzione dell'assorbimento d'acqua e il trattamento bloccante ha invertito questi effetti.
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CONCLUSIONE
In conclusione, C. deserticola può inibire l'espressione di AQP3 e promuovere l'espressione di Cx43 attraverso la via SCF/C-kit, migliorando così la costipazione indotta dall'operamina e riducendo il danno tissutale del colon nei ratti anziani. Questo studio ha fornito una buona base teorica per l'uso clinico di C. deserticola.