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Istituzione del modello sperimentale simultaneo dell'osteoporosi combinata con la malattia di Alzheimer nei ratti e dei doppi effetti dell'echinacoside e dell'acteoside da Cistanche tubulosa

Yi Chena, et al

ASTRATTO

Rilevanza etnofarmacologica: Cistanche tubuloseè una preziosa medicina tradizionale cinese che è stata ampiamente utilizzata nel trattamento dell'osteoporosi eIl morbo di Alzheimer. Echinacoside e acteoside sono i principali costituenti attiviCistanche tubuloseche hanno attività farmacologiche con valore di ricerca. È stato segnalato che l'echinacoside e l'acteoside potrebbero migliorare l'apprendimento e la capacità di memoria, promuovere la proliferazione e la differenziazione degli osteoblasti.

Scopo dello studio: Echinacoside e acteoside daCistanche tubulosehanno mostrato attività significative di anti-osteoporosi e anti-Il morbo di Alzheimer, mentre questi effetti non sono stati studiati contemporaneamente in un modello di ratto. Lo scopo di questo studio era di stabilire e verificare il modello di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimerinrats e per studiare i doppi effetti di echinacoside e acteoside su questo modello simultaneo.

Materiali e metodi:Sono stati impostati contemporaneamente tre gruppi modello di ovariectomia (OVX), chirurgia sham con D-galattosio e AlCl3 (D), ovariectomia con D-galattosio e AlCl3 (OVX più D). I ratti nei gruppi di trattamento farmacologico sono stati ovariectomizzati. Durante l'esecuzione dell'iniezione intraperitoneale di D-galattosio e la somministrazione intragastrica di AlCl3 nei ratti dei gruppi di trattamento farmacologico, ai ratti è stato somministrato per via orale echinacoside (90 mg/kg/die), acteoside(90 mg /kg/die) e i farmaci di controllo positivo di estradiolo valerato (0,6 mg/kg/die), donepezil HCl (0,8 mg/kg/die), rispettivamente. Dopo il trattamento farmacologico di 8 settimane, è stato eseguito per la prima volta il test Morris Water Maze (MWM) per 6 giorni. I ratti sono stati quindi sacrificati per raccogliere sangue, uteri, femori, tibie e tessuti cerebrali. Il siero è stato utilizzato per test biochimici. Gli uteri sono stati utilizzati per l'istomorfometria. I femori di destra sono stati utilizzati rispettivamente per la microTC e l'istomorfometria. Le tibie destre sono state utilizzate per il test biomeccanico. L'ippocampo raccolto sulla ghiacciaia è stato utilizzato per i test biochimici. Il cervello raccolto dalla perfusione è stato utilizzato per l'istomorfometria.

Risultati:Rispetto al gruppo Sham, il gruppo OVX plus D potrebbe ridurre significativamente l'apprendimento e la capacità di memoria causando danno ossidativo, danneggiando i neuroni nell'ippocampo e influenzando l'idrolisi e la sintesi dell'acetilcolina. Nel frattempo, le attività di BALP e TRAP nel gruppo OVX più D sono aumentate in modo significativo (P < {{0}}.001)="" rispetto="" al="" gruppo="" sham.="" inoltre,="" rispetto="" al="" gruppo="" sham,="" la="" densità="" minerale="" ossea="" media="" è="" ovviamente="" diminuita="" (p=""><0,05), anche="" la="" massa="" ossea="" trabecolare="" e="" la="" microarchitettura="" sono="" state="" distrutte="" in="" modo="" significativo="" nel="" gruppo="" ovx="" più="" d.="" inoltre,="" il="" carico="" massimo="" e="" lo="" stress="" massimo="" si="" sono="" significativamente="" ridotti="" (p=""><0,01) e="" anche="" l'assorbimento="" di="" energia="" è="" diminuito="" notevolmente="" rispetto="" al="" gruppo="" sham.="" dopo="" la="" somministrazione="" di="" echinacoside="" e="" acteoside,="" le="" caratteristiche="" patologiche="" tipiche="" dell'osteoporosi="">Il morbo di Alzheimersono stati migliorati.

Conclusioni: Il modello di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimernei ratti era fattibile e stabilito con successo. Anche l'echinacoside e l'acteoside hanno mostrato alcuni effetti significativi su questo modello simultaneo e potrebbero essere potenziali candidatiCistanche tubulosecon doppi effetti per ulteriori studi.

Parole chiave: Osteoporosi,Il morbo di Alzheimer, Doppio effetto,Echinacoside, Acteoside, Cistanche tubulose

Cistanche tubuloseperIl morbo di Alzheimer

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1. Introduzione

L'osteoporosi è una malattia degenerativa dell'osso caratterizzata da una progressiva perdita di massa ossea e distruzione della microarchitettura, che può aumentare il rischio di fratture da fragilità (Rachner et al., 2011).Il morbo di Alzheimer(AD) è una malattia neurodegenerativa comune negli anziani caratterizzata da continuo declino mentale, deterioramento cognitivo e perdita di capacità di vita indipendente in ambito clinico (Reitz et al.,2011). La formazione di placca senile indotta dalla deposizione di amiloide, i grovigli neurofibrillari causati dall'iperfosforilazione della tau e la degenerazione neuronale nel cervello sono le caratteristiche patologiche tipiche dell'AD (Serrano-Pozo et al., 2011). Superficialmente, OP e AD sono malattie completamente indipendenti con diverse patologie e caratteristiche cliniche. Tuttavia, OP e AD sono spesso osservate contemporaneamente nella pratica clinica (Zhang et al., 2001; Lui et al., 2003; Luckhaus et al., 2009). La prevalenza di entrambe le malattie aumenta con l'età, soprattutto nelle donne in post-menopausa (Li et al., 2017; Stern, 2012). Sempre più prove hanno indicato che le persone con diagnosi di AD hanno un aumentato rischio di OP (Zhou et al., 2014).

È necessario studiare e chiarire le relazioni tra osteoporosi eIl morbo di Alzheimerin vitro e in vivo. Prima che gli studi vengano eseguiti invivo, è importante selezionare i modelli animali applicabili di osteoporosi oIl morbo di Alzheimer. Il modello dell'osteoporosi potrebbe essere stabilito con diversi tipi di metodi come la somministrazione intragastrica di acido retinoico, la chirurgia ovariectomia e l'iniezione intramuscolare di glucocorticoidi (Wei et al., 2007; Komori, 2015). In particolare, il modello di osteoporosi postmenopausale indotto dall'ovariectomia nei ratti era classico ed è stato ampiamente utilizzato nella maggior parte degli studi (Miao et al., 2012; Liu et al., 2017). La malattia di Alzheimer sporadica è il tipo principale di malattia di Alzheimer. I modelli animali di SporadicIl morbo di Alzheimer potrebbeessere indotto con vari metodi come l'iniezione di D-galattosio o -amiloide, somministrazione intragastrica di AlCl3 e così via (Bagheri et al., 2011; Gao et al., 2015; Justin Thenmozhi et al., 2017). Inoltre, il modello di congiunzione diIl morbo di Alzheimerindotto dall'iniezione intraperitoneale a lungo termine di D-galattosio in combinazione con l'ovariectomia è stato anche studiato molto (Liu et al., 2010; Zhao et al., 2012). Al fine di rivelare la rilevanza dell'osteoporosi eIl morbo di Alzheimer, è necessario stabilire il modello di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimerstudiare i meccanismi comuni dei farmaci sull'osteoporosi eIl morbo di Alzheimer.

Cistanche tubulose(Schenk) Wight è una pianta parassita, che è distribuita principalmente nei deserti della Cina nord-occidentale. Gli steli succulenti essiccati diCistanche tubulose(CT) sono usati come un famoso medicinale tonico chiamato Cistanches Herba con il suo nome cinese di Roucongrong nella Farmacopea Cinese (2015). È stato onorato come "ginseng dei deserti" ed è ampiamente utilizzato per il trattamento di dolori alla vita e alle ginocchia, sterilità femminile e costipazione nella medicina tradizionale cinese (Jiang e Tu, 2009). I principali costituenti attivi del CT(Cistanche tubulose)sono glicosidi feniletanoidi (PhG), echinacoside (ECH) e acteoside (ACT) sono i composti rappresentativi nei PhG (Morikawaet al., 2014). In particolare, ECH e ACT sono tipicamente selezionati come marcatori per il controllo di qualità nella TC(Cistanche tubulose)a causa del loro alto contenuto e delle varie attività farmacologiche come gli effetti della neuroprotezione, della protezione delle ossa, degli antiossidanti, dell'anti-invecchiamento e del miglioramento della capacità di apprendimento e memoria (Wang et al., 2012; Li et al., 2016). Tuttavia, gli effetti di ECH e ACT sull'osteoporosi combinati conIl morbo di Alzheimernon erano ancora stati studiati insieme in un modello di ratto. Pertanto, lo scopo di questo studio era di stabilire un modello di ratto di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimered esplorare gli effetti dell'echinacoside e dell'acteoside su questo modello simultaneo, in modo da fornire prove sperimentali per ulteriori studi sul meccanismo molecolare dell'echinacoside o dell'acteoside nella ricerca successiva.

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2. Materiali e metodi

2.1. Animali

Ratti Wistar femmine di ottanta 8-settimane (numero di certificato: SCXK,2018–0006), del peso di 180–200 g, sono stati acquisiti da Sino-BritishSIPPR/BK Lab. Animal Ltd (Shanghai, Cina) e cresciuta presso l'Experimental Center of Pharmaceutical Animals in ChinaPharmaceutical University.

2.2. Sostanze chimiche e reagenti

Cloralio idrato, penicillina G sodica, D-galattosio, alluminio cloruro esaidrato, estradiolo valerato, donepezil HCl sono stati acquistati da Aladdin Industrial Corporation (Shanghai, Cina). L'echinacoside (HPLC94%) è stato ottenuto da Wuhan Yuanchengcreate Technology Co., Ltd. (Wuhan, Cina). Acteoside (HPLC 98%) è stato acquistato da Baoji HerbestBio-Tech Co., Ltd. (Baoji, Cina). Sono stati acquistati kit per il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) di fosfatasi alcalina specifica per l'osso (BALP), fosfatasi acida tartrato-resistente (TRAP), superossido dismutasi (SOD), malonaldeide (MDA), acetilcolinesterasi (AChE) e colineacetiltransferasi (ChAT) di Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, Cina). Il fissativo universale per tessuti è stato ottenuto da WuhanServicebio Technology Co., Ltd. (Wuhan, Cina).

2.3. Modelli e trattamenti animali

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati autorizzati e supervisionati dall'Animal Ethics Committee della China Pharmaceutical University. I ratti sono stati mantenuti con un ciclo luce/buio di 12 ore in una stanza a temperatura controllata (22 ± 2 gradi) e alimentati con foraggio pellettato standard e acqua di rubinetto.

Dopo l'adattamento di una settimana, il modello di osteoporosi è stato ottenuto effettuando un intervento di ovariectomia (French et al., 2008). Al termine dell'operazione, la penicillina G sodica è stata spruzzata sulla sutura per una volta per prevenire l'infezione. I ratti sono stati quindi nutriti normalmente per tre settimane. Secondo il riferimento (Hua et al., 2007;Alawdi et al., 2017), il modello diIl morbo di Alzheimerpotrebbe essere indotto da iniezione intraperitoneale a lungo termine di D-galattosio combinata con ovariectomia o somministrazione intragastrica a lungo termine di AlCl3. Studiare la fattibilità del modello di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimer, tre gruppi modello di ovariectomia (gruppo OVX), chirurgia sham con iniezione intraperitoneale di 150 mg/kg/giorno di D-galattosio e somministrazione intragastrica di 30 mg/kg/giorno di AlCl3 (gruppo D), ovariectomia con iniezione intraperitoneale di 150 mg/kg /d D-galattosio e somministrazione intragastrica di 30 mg/kg/d AlCl3 (gruppo OVX più D) sono state stabilite in questo studio.

Pertanto, i ratti sono stati divisi casualmente in otto gruppi (n {{0}} per ogni gruppo) dopo 3 settimane e trattati per via orale con medicinali per 8 settimane: gruppo Sham; gruppo OVX; gruppo D; OVX più gruppo D; gruppo di trattamento con estradiolvalerato (gruppo EV, OVX più D più 0,6 mg/kg/die di estradiolvalerato); gruppo di trattamento con donepezil HCl (gruppo DPZ, OVX più D più 0,8 mg/kg/giorno di donepezil HCl); gruppo di trattamento con echinacoside (gruppo ECH, OVX più D più 90 mg/kg/die di echinacoside); gruppo di trattamento con acteoside (gruppo ACT, OVX più D più 90 mg/kg/die di acteoside). Secondo il principio di conversione della dose equivalente uomo-ratto e la dose da riferimento correlato (Li et al., 2013; Gao et al., 2014), sono stati adottati i dosaggi dei gruppi di trattamento farmacologico in questo studio.

Il peso corporeo di ogni ratto è stato misurato ogni settimana. Dopo l'intero trattamento con farmaci della durata di 8 settimane, è stato eseguito per la prima volta il test Morris Water Maze (MWM) per 6 giorni. Successivamente, 6 ratti di ogni gruppo sono stati sacrificati per raccogliere i materiali. I ratti sono stati anestetizzati con iniezione intraperitoneale di 3.0 ml/kg di cloralidrato al 10 percento e il sangue è stato raccolto dall'aorta addominale. Il sangue è stato posto a temperatura ambiente per coagulare e centrifugato a 3500 r/min per 10 min. Il siero è stato raccolto in una provetta da centrifuga da 1,5 ml (Biotecnologia NEST) e conservato a -80 gradi fino a quando non è stato utilizzato per i test biochimici. Sono stati quindi raccolti i tessuti dell'utero, dei femori, delle tibie e del cervello. Gli uteri sono stati utilizzati per l'istomorfometria. I femori di destra sono stati utilizzati rispettivamente per Micro-CT e istomorfometria. Le tibie destre sono state utilizzate per il test biomeccanico. L'ippocampo raccolto sulla ghiacciaia è stato utilizzato per i test biochimici. Successivamente, gli altri tre ratti di ciascun gruppo sono stati perfusi dal cuore con fissativo per tessuti salino e universale per raccogliere il cervello per l'istomorfometria.

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2.4. Prova Morris Water Maze (MWM).

I ratti sono stati sottoposti all'apprendimento di riferimento spaziale e al test della memoria nel test MWM dopo 8 settimane di intervento. Il test MWM è stato eseguito seguendo i metodi riportati in precedenza (Morris,1984; Gao et al., 2016). In breve, 5 giorni consecutivi con quattro prove al giorno, i ratti sono stati addestrati a utilizzare una varietà di segnali visivi situati sulla parete della piscina per trovare una piattaforma sommersa nascosta (diametro 11 cm, altezza 29 cm) in una piscina circolare (diametro 130 cm, altezza 50 cm ) riempito con acqua colorata con inchiostro al carbonio non tossico. La piscina era immaginariamente divisa in quattro quadranti e quattro posizioni di partenza erano poste alle intersezioni dei quadranti. La piattaforma si trovava al centro di uno dei quadranti e la posizione era costante durante le prove. In ogni prova, i ratti sono stati collocati casualmente in posizioni selezionate, rivolti verso il muro della piscina. Ogni prova è stata terminata quando il ratto ha raggiunto la piattaforma o dopo 60 s e il tempo trascorso è stato registrato come latenza di fuga. I topi che non riuscivano a raggiungere la piattaforma furono guidati su di essa. Dopo ogni prova su piattaforma nascosta, il topo è rimasto sulla piattaforma per 10 s. Come risultati dell'allenamento è stato calcolato il tempo di latenza medio di quattro prove al giorno. Il giorno 6, tutti i ratti sono stati sottoposti a una prova con sonda in cui hanno nuotato per 60 secondi in piscina senza piattaforma. Come risultati finali sono stati registrati i tempi di attraversamento nella posizione della piattaforma e il tempo di percorrenza nel quadrante di destinazione. I ratti sono stati monitorati da una telecamera montata nel soffitto direttamente sopra la piscina e tutte le prove sono state registrate e analizzate utilizzando il programma MORRIS MAZE fornito da Beijing zhongshidichuang science and technology development Co., Ltd. (Pechino, Cina).

2.5. Test biochimico mediante ELISA

Secondo le istruzioni del produttore dei kit ELISA, l'attività della fosfatasi alcalina specifica per l'osso (BALP), l'attività della fosfatasi acida tartrato-resistente (TRAP), l'attività della superossido dismutasi (SOD) e il contenuto di malondialdeide (MDA) nel siero sono stati testati da BioTekSynergy 2 multi- lettore di micropiastre in modalità (BioTek, USA). I tessuti dell'ippocampo di ciascun gruppo sono stati lavati con PBS (0.01 M, pH7,4) per rimuovere il sangue o le impurità rimanenti sulla superficie del tessuto. I tessuti dell'ippocampo su un lato sono stati pesati e quindi tagliati in pezzi piccoli il più possibile. I tessuti dell'ippocampo sono stati omogeneizzati secondo il rapporto di 1: 9 (peso del tessuto: volume PBS). L'omogenato è stato centrifugato a 4 gradi, 3000 giri/min per 15 minuti. Il supernatante è stato raccolto e diluito per misurare la concentrazione proteica con il metodo BCA. L'attività dell'acetilcolinesterasi (AChE), l'attività della colina acetiltransferasi (ChAT), l'attività della superossido dismutasi (SOD) e il contenuto di malondialdeide (MDA) nel tessuto dell'ippocampo sono stati quindi testati con metodi ELISA.

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2.6. Istomorfometria dell'ippocampo

I tessuti cerebrali (n=3/gruppo) sono stati fissati in fissativo tissutale universale. I campioni di tessuto cerebrale sono stati quindi lavati, disidratati con etanolo a gradiente, incorporati con cera di paraffina e tagliati in sezioni coronali di 5 μm. Le sezioni sono state colorate con ematossilina ed eosina (HE). Successivamente, le sezioni coronali dei tessuti cerebrali sono state fotografate da un microscopio a fluorescenza invertito (Nikon, Giappone). Sono stati osservati in particolare i cambiamenti morfologici di CA1, CA2, CA3 e DG nell'ippocampo.

2.7. Istomorfometria e morfometria uterina

Gli uteri selezionati (n {0}}/gruppo) sono stati fissati con fissativo universale per tessuti. I campioni di tessuto dell'utero sono stati quindi lavati, disidratati con etanolo gradiente, incorporati con cera di paraffina e tagliati in sezioni trasversali di 5 μm. Le sezioni sono state colorate con ematossilina andeosina (HE). Le sezioni trasversali degli uteri sono state osservate e fotografate. Cinque campi visivi sono stati selezionati casualmente, il diametro della sezione trasversale uterina e lo spessore epiteliale della mucosa uterina sono stati quindi misurati utilizzando il software Image-Pro Plus 6.0. Sono stati contati anche i numeri delle ghiandole uterine nella lamina propria.

2.8. Micro-CT(Cistanche tubulose)

Il femore destro selezionato (n=3/gruppo) è stato scansionato in una posizione con la distanza dell'oggetto dalla sorgente di 121 mm e la distanza della fotocamera dalla sorgente di 171 mm utilizzando una micro radiografia SkyScan 1176 scanner per tomografia computerizzata (Micro-CT) (Bruker, Germania). Come superficie di riferimento è stata scelta la placca di accrescimento distale. Con una distanza di 1 mm al di sotto della superficie di riferimento, è stata selezionata una regione di 1,8 mm di spessore come volume di interesse (VOI, 100 strati). Le immagini in scala di grigi risultanti avevano una dimensione in pixel di 17,76 μm dalla ricostruzione ossea (65 kV, 385 μA). Per selezionare le trabecole dall'osso corticale è stato impiegato un metodo di modellatura semiautomatico. Sono stati utilizzati metodi di misurazione 3D diretti per valutare la percentuale di volume osseo (BV/TV), densità della superficie ossea (BS/TV), separazione trabecolare (Tb. Sp), numero trabecolare (Tb. N), spessore trabecolare (Tb. Th), modello di struttura indice (SMI), fattore di pattern trabecolare (Tb.Pdf) e densità minerale ossea media (BMD media) per lo stesso VOI utilizzando la TC(Cistanche tubulose)Programma dell'analizzatore (Bruker, Germania). La visualizzazione 3D del VOI utilizzando un algoritmo di rendering adattivo è stata eseguita con il software CTvol (Bruker, Germania).

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2.9. Istomorfometria ossea

Il femore destro selezionato (n=3/gruppo) è stato fissato con fissativo universale per tessuti e quindi decalcificato in una soluzione di EDTA al 10%-2Na per 3 settimane. I campioni decalcificati sono stati lavati, disidratati con etanolo a gradiente, incorporati con cera di paraffina e tagliati in sezioni longitudinali di 5 μm. Le sezioni sono state colorate con ematossilina ed eosina (HE). Sono state fotografate le sezioni longitudinali dei femori. Sono state osservate le strutture del tessuto osseo di ciascun gruppo, in particolare le strutture ossee trabecolari.

2.10. Prova biomeccanica

Le tibie destre (n=4/gruppo) selezionate casualmente sono state valutate per il test di flessione a tre punti utilizzando una macchina di prova universale (SHIMADZU, Giappone). I diametri di questi campioni sono stati misurati con calibro a corsoio nell'intervallo 2,16–2,38 mm (d). Il campione è stato quindi posizionato su due traverse di supporto con una distanza di 25 mm (L) tra le due rotaie e la curvatura fisiologica del campione era verso l'alto. L'asta di carico del carico era situata al centro del campione e fatta cadere a una velocità costante di 1,5 mm/min fino alla rottura del campione. I dati di forza (F) e spostamento sono stati registrati automaticamente in un computer che è stato interfacciato con la macchina di prova ed è stata tracciata simultaneamente la curva carico-deformazione. I valori di carico massimo (N) e di assorbimento di energia (mJ) sono stati registrati contemporaneamente dal software di prova dei materiali TRAPEZIUM X. I valori della sollecitazione massima (MPa) sono stati calcolati secondo la seguente formula: Sollecitazione (σ)=momento flettente (M)/Fattore di sezione (Z) =(8 × L × F)/(π × d3).

2.11. analisi statistica

I risultati dei gruppi modello sono stati confrontati con il gruppo Sham e quelli dei gruppi trattati con farmaci sono stati confrontati con il gruppo OVX più D. I dati sono stati analizzati utilizzando l'ANOVA unidirezionale seguito dal test di confronto multiplo di Bonferroni utilizzando il software Graph Pad Prism 5.0. I dati sono stati espressi come media ± DS e valori P inferiori a 0.05 sono stati considerati statisticamente significativi.

3. Risultati

3.1. Peso corporeo

I pesi corporei settimanali dei ratti in ciascun gruppo durante l'intero trattamento di 8 settimane sono stati mostrati in Fig. 1. Rispetto al gruppo Sham, il peso corporeo dei ratti nel gruppo OVX più D è aumentato, soprattutto con una differenza significativa nei primi quattro settimane(P < 0.05).="" dopo="" essere="" stati="" trattati="" con="" ev="" ed="" ech,="" il="" peso="" corporeo="" dei="" ratti="" è="" ovviamente="" diminuito="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d="" (p=""><{6}}.05,p><>

3.2. Valutazione della capacità cognitiva

3.2.1. Valutazione della capacità di apprendimento nella fase di acquisizione

Le tracce di nuoto rappresentative dei ratti di ciascun gruppo nella fase di acquisizione del 5° giorno sono state mostrate in Fig. 2. La latenza di fuga di ciascun gruppo durante la fase di acquisizione di 5 giorni è stata elencata nella Tabella 1. Il primo giorno, la fuga latenza tra il gruppo OVX più D e il gruppo DPZ, il gruppo ACT ha mostrato differenze significative (P < 0.05),="" rispettivamente.="" dal="" secondo="" giorno,="" la="" latenza="" di="" fuga="" del="" gruppo="" sham="" si="" è="" notevolmente="" ridotta="" e="" la="" latenza="" media="" è="" stata="" molto="" inferiore="" a="" quella="" del="" gruppo="" ovx="" plus="" d.="" nel="" gruppo="" dpz,="" la="" latenza="" è="" diminuita="" in="" modo="" significativo="" (p="">< 0.05)="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d="" il="" 3°="" giorno.="" rispetto="" al="" gruppo="" sham,="" la="" latenza="" di="" d="" e="" ovx="" più="" i="" gruppi="" d="" ovviamente="" allungati="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.001)="" il="" 4°="" giorno.="" inoltre,="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d,="" la="" latenza="" di="" ev,="" dpz="" ed="" ech,="" i="" gruppi="" act="" si="" sono="" significativamente="" ridotti="" (p=""><0,05, p=""><0,01, p=""><0,001). al="" 5°="" giorno,="" la="" latenza="" del="" gruppo="" ovx="" più="" d="" era="" ancora="" significativamente="" superiore="" a="" quella="" del="" gruppo="" sham="" (p=""><0,05) e="" la="" latenza="" dei="" gruppi="" ev="" ed="" ech="" ovviamente="" si="" è="" ridotta="" (p=""><0,05) rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="">

3.2.2. Valutazione della capacità di memoria nello studio della sonda

Le tracce di nuoto rappresentative dei ratti di ciascun gruppo nello studio della sonda sono state mostrate in Fig. 3. Come mostrato in Fig. 4, rispetto al gruppo Sham, i tempi di attraversamento e il tempo di nuoto nel quadrante target di OVX, D e OVX più i gruppi D sono diminuiti in modo significativo (P < 0.05,p="">< 0.01).="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d,="" i="" tempi="" di="" attraversamento="" di="" ev,="" dpz="" ed="" ech,="" i="" gruppi="" act="" sono="" ovviamente="" aumentati="" (p="">< {{10}}.05,="" p="">< 0.01)="" e="" il="" tempo="" nel="" quadrante="" target="" anche="" dei="" gruppi="" ev="" e="" dpz="" sono="" aumentati="" in="" modo="" significativo="" (p=""><0,05, p=""><>

3.3. Analisi biochimica del siero

Come mostrato in Fig. 5A e B, rispetto al gruppo Sham, le attività di BALP e TRAP nei gruppi OVX e OVX più D sono aumentate significativamente (P < 0.001="" ),="" che="" era="" la="" caratteristica="" tipica="" dell'osteoporosi="" ad="" alto="" turnover="" causata="" dall'ovariectomia.="" le="" attività="" di="" balp="" e="" trap="" nei="" gruppi="" ev,="" dpz,="" ech="" e="" act="" sono="" ovviamente="" diminuite="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d="" (p=""><{7}}.05, p=""><0.01, p=""><>

L'ovariectomia, l'iniezione intraperitoneale di D-galattosio e la somministrazione intragastrica di AlCl3 potrebbero causare danno ossidativo (Muthusami et al., 2{{10}}05; A. Prakash et al., 2 013). Come mostrato in Fig. 5C Ovariectomia, l'iniezione intraperitoneale di D-galattosio e la somministrazione intragastrica di AlCl3 potrebbero causare danno ossidativo (Muthusami et al., 20{{20}}5; A. Prakash et al., 2013). Come mostrato in Fig. 5C e D, le attività SOD dei gruppi OVX, D e OVX più D erano significativamente inferiori a quelle del gruppo Sham (P <0,05, p=""><0,001) e="" il="" contenuto="" mda="" di="" ovx,="" d="" e="" i="" gruppi="" ovx="" più="" d="" sono="" aumentati="" significativamente="" (p=""><0,05, p=""><0,001) rispetto="" al="" gruppo="" sham.="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d,="" dopo="" essere="" stato="" trattato="" con="" ev,="" dpz,="" ech="" e="" act,="" l'attività="" sod="" è="" aumentata="" significativamente="" (p=""><0,01, p=""><0,001) e="" il="" contenuto="" di="" mda="" è="" diminuito="" in="" una="" certa="" misura,="" specialmente="" nel="" gruppo="" ev="" (p=""><>

3.4. Analisi biochimica dell'ippocampo

Come mostrato in Fig. 6A, l'attività AChE del gruppo OVX più D era ovviamente superiore a quella del gruppo Sham (P <0.05), che="" indicava="" che="" la="" capacità="" di="" apprendimento="" e="" di="" memoria="" del="" il="" gruppo="" ovx="" più="" d="" può="" ridursi="" con="" l'accelerazione="" dell'idrolisi="" dell'acetilcolina="" nel="" cervello.="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d,="" l'attività="" ache="" nei="" gruppi="" di="" trattamento="" farmacologico="" è="" diminuita="" in="" una="" certa="" misura,="" specialmente="" nel="" gruppo="" ev="" (p=""><0.01). come="" mostrato="" nella="" fig.="" 6b,="" rispetto="" al="" gruppo="" sham,="" le="" attività="" chat="" dei="" gruppi="" ovx,="" d="" e="" ovx="" più="" d="" sono="" ovviamente="" diminuite="" (p=""><{{1{12}}}}.01, p="">< 0,001)="" che="" indicava="" che="" le="" loro="" capacità="" di="" apprendimento="" e="" di="" memoria="" potevano="" essere="" influenzate="" a="" causa="" della="" loro="" più="" lenta="" sintesi="" di="" acetilcolina="" nel="" cervello.="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d,="" le="" attività="" chat="" dei="" gruppi="" ev,="" dpz="" ed="" ech,="" act="" sono="" aumentate="" in="" modo="" significativo="" (p=""><0,05, p="">< 0,01,="" p=""><>

Il danno ossidativo potrebbe verificarsi anche nell'ippocampo (Dileket al., 2010; Yang et al., 2013). Come mostrato in Fig. 6C e D, rispetto al gruppo Sham, le attività SOD dei gruppi OVX, D e OVX più D sono diminuite significativamente (P < 0.01,="" p="">< 0.="" 001),="" e="" l'mda="" è="" ovviamente="" aumentato="" (p="">< 0,01,="" p="">< 0,001).="" dopo="" essere="" stata="" trattata="" con="" ev,="" dpz,="" ech="" e="" act,="" l'attività="" sod="" è="" aumentata="" significativamente="" (p=""><0,001) e="" il="" contenuto="" di="" mda="" è="" diminuito="" significativamente="" (p=""><0,001) rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="">

3.5. Analisi dell'istomorfologia dell'ippocampo

Come mostrato in Fig. 7A, i neuroni nell'ippocampo del gruppo Sham erano colorati in modo uniforme. Nel frattempo, le caratteristiche morfologiche dei neuroni erano chiare con l'evidente nucleolo. Anche la disposizione degli stessi era ordinata e compatta con un gran numero e una struttura intatta. Nei gruppi InOVX, D e OVX più D, il numero di neuroni nell'ippocampo si è ridotto significativamente rispetto al gruppo Sham. I neuroni erano disposti in modo disordinato e i vuoti erano ingranditi. Soprattutto nei gruppi D e OVX più D, nell'ippocampo sono stati trovati meno neuroni e la loro distribuzione è stata dispersa. La cariopicnosi e le caratteristiche morfologiche indistinte dei neuroni e dei neuroni necrotici si sono verificate anche nei gruppi D e OVX più D. Come mostrato in Fig. 7B, dopo l'intervento farmacologico, il numero di neuroni nell'ippocampo dei gruppi EV, DPZ, ECH e ACT era significativamente superiore a quello del gruppo OVX più D. Allo stesso tempo, l'allineamento tra i neuroni era relativamente ordinato e anche il numero di neuroni con cariopicnosi e necrosi è diminuito.

3.6. Peso umido dell'utero e analisi dell'istomorfologia e morfometria uterina

Come mostrato in Fig. 8, i pesi uterini di OVX e OVX più i gruppi D erano significativamente inferiori a quelli del gruppo Sham (P <0.05,p>< 0.="" 01).="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d,="" i="" pesi="" umidi="" dell'utero="" del="" gruppo="" ev="" sono="" aumentati="" ovviamente="" (p=""><0,01) sotto="" l'effetto="" dell'estradiolvalerato.="" inoltre,="" anche="" il="" peso="" umido="" dell'utero="" del="" gruppo="" dpz="" e="" del="" gruppo="" ech="" è="" aumentato="" in="" una="" certa="">

Come mostrato in Fig. 9A, l'utero del gruppo Sham era un organo muscolare con pareti spesse e l'epitelio della mucosa uterina era un epitelio colonnare a strato singolo. La lamina propria era distribuita con ghiandole uterine e vasi sanguigni. Lo strato muscolare era composto da fasci di muscolatura liscia e la fibra muscolare era ben disposta. Nei gruppi OVX e OVX più D, l'utero si è ridotto significativamente con la luminalstenosi. L'endometrio e lo strato muscolare erano significativamente più sottili di quelli del gruppo Sham. Inoltre, il numero delle ghiandole uterine si riduceva e le fibre muscolari erano sottili. Come mostrato in Fig. 9B, rispetto al gruppo OVX più D, l'istomorfologia uterina è stata migliorata in un certo grado dopo essere stata trattata con EV, DPZ, ECH e ACT. In particolare nel gruppo EV, l'utero era significativamente pieno, l'endometrio e lo strato muscolare erano ovviamente spessi. Inoltre, il numero di uteroghiandole è aumentato e le fibre muscolari si sono allargate.

I risultati dell'analisi morfometrica dell'utero di ciascun gruppo sono stati mostrati in Fig. 10A–C. Rispetto al gruppo Sham, il diametro uterino, lo spessore epiteliale della mucosa uterina e il numero di ghiandole uterine nei gruppi OVX e OVX più D sono diminuiti significativamente (P < 0.01,="" p="">< 0,001).="" dopo="" il="" trattamento="" con="" ev,="" il="" diametro="" uterino,="" lo="" spessore="" epiteliale="" della="" mucosa="" uterina="" e="" il="" numero="" di="" ghiandole="" uterine="" sono="" ovviamente="" aumentati="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="" d="" (p=""><0,001). inoltre,="" ech="" e="" act="" hanno="" anche="" mostrato="" la="" tendenza="" all'aumento="" del="" diametro="" uterino,="" dello="" spessore="" epiteliale="" della="" mucosa="" uterina="" e="" del="" numero="" delle="" ghiandole="">

3.7. Analisi micro-TC

Le immagini bidimensionali della transezione dell'osso femorale spugnoso distale sono state ottenute dal software Bruker DataViewer mostrato in Fig. 11A. Dopo essere state eseguite dal software CTvol, in Fig. 11B sono state mostrate immagini tridimensionali dell'osso trabecolare nella regione VOI dell'osso spongioso distale femorale di ciascun gruppo. Inoltre, la media BMD, BV/TV, SMI, Tb. N, Tb. Sp, Tb.Th, BS/TV e Tb. Pf che è stato analizzato dal software CTAn è stato mostrato anche nella Tabella 2 e nella Tabella 3.

Come mostrato nelle figure sopra, rispetto al gruppo Sham, il numero trabecolare e l'area trabecolare nel gruppo OVX più D sono ovviamente diminuiti. Nel frattempo, la quantificazione di vari parametri trabecolari ha anche indicato che la media BMD, BV/TV, Tb. N, Tb.Th, BS/TV sono diminuiti in modo significativo nel gruppo OVX più D (P <{0}}.05, p=""><0,01) e="" smi,="" tb.="" sp,="" tb.="" il="" pf="" del="" gruppo="" ovx="" più="" d="" è="" aumentato="" ovviamente="" (p="">< 0,01).="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" plus="" d,="" la="" microarchitettura="" trabecolare="" è="" stata="" migliorata="" in="" una="" certa="" misura="" dopo="" essere="" stata="" trattata="" con="" ev="" ed="">

3.8. Analisi dell'istomorfologia ossea

Le strutture trabecolari dell'osso spugnoso nei femori distali di ciascun gruppo sono state mostrate in Fig. 12. Il gruppo Sham aveva molte trabecole che erano spesse e interconnesse in una rete. Rispetto al gruppo Sham, le trabecole dei gruppi OVX e OVX più D erano significativamente ridotte e assottigliate. In particolare, le trabecole del gruppo OVX plus D furono gravemente distrutte e la maggior parte di esse non poteva essere collegata a una rete. Inoltre, anche le trabecole del gruppo D erano ovviamente assottigliate. Dopo essere state trattate con EV ed ECH, le trabecole sono aumentate in modo significativo e sono state ispessite e reticolate rispetto al gruppo OVX plus D. Le caratteristiche morfologiche del gruppo EV erano vicine a quelle del gruppo Sham. Nel frattempo, anche le strutture trabecolari dei gruppi DPZ e ACT sono state migliorate in una certa misura.

3.9. Analisi biomeccanica

I risultati del test di flessione a tre punti sono stati mostrati nella Tabella 4. Rispetto al gruppo Sham, il carico massimo e la sollecitazione massima si sono notevolmente ridotti (P ​​< 0.05,="" p="">< 0,01)="" in="" ovx="" e="" ovx="" più="" gruppi="" d,="" e="" anche="" l'assorbimento="" di="" energia="" è="" diminuito="" notevolmente.="" dopo="" essere="" stati="" trattati="" con="" ev="" ed="" ech,="" il="" carico="" massimo,="" lo="" stress="" massimo="" e="" l'assorbimento="" di="" energia="" sono="" aumentati="" in="" una="" certa="" misura="" rispetto="" al="" gruppo="" ovx="" più="">

4. Discussione

L'indagine epidemiologica sull'osteoporosi ha rivelato che il numero di pazienti di sesso femminile era superiore a quello dei pazienti di sesso maschile e si verificava spesso nelle donne anziane e in postmenopausa (Chen et al., 2016). L'osteoporosi ha gravemente colpito la salute degli anziani ed è diventata una delle gravi problemi sociali in tutto il mondo (Deal, 2009; Roy et al., 2011; Bessette et al., 2011). Le ricerche epidemiologiche diIl morbo di Alzheimerhanno dimostrato che l'incidenza e la prevalenza diIl morbo di Alzheimerè aumentato in modo esponenziale all'aumentare dell'età, soprattutto negli anziani di età superiore ai 65 anni (Sosa Ortiz et al., 2012). Inoltre, la prevalenza dell'AD era significativamente più alta nelle donne rispetto agli uomini (Mielke et al., 2014). Stime recenti hanno suggerito che quasi i due terzi degli individui con diagnosi di ADIl morbo di Alzheimererano donne (Hebert et al., 2013). Sorprendentemente, la prevalenza globale dell'AD ha posto un peso considerevole sulla società (Reitzand Mayeux, 2014).

È stato riportato che la ragione principale che causa l'osteoporosi post-menopausale è stata la carenza di estrogeni (Klein-Nulendet al., 2015). Potrebbe accelerare significativamente il tasso di turnover osseo e far sì che il tasso di riassorbimento osseo superi il tasso di formazione ossea con conseguente perdita di massa ossea, diminuzione della densità minerale ossea e diminuzione della forza ossea (Tella e Gallagher, 2014). Inoltre, è stato anche dimostrato che le donne in postmenopausa hanno un aumentato rischio di deterioramento cognitivo o demenza (Rocca et al., 2007). Alcuni studi hanno dimostrato che gli estrogeni svolgono un ruolo cruciale nel trattamento dell'AD che include il mantenimento della funzione dell'ippocampo durante l'invecchiamento (Han et al., 2013), l'aumento dell'attività della colina acetiltransferasi nell'ippocampo (Gibbs e Aggarwal, 1998), la riduzione dell'aggregazione di beta-amiloide (Nilsen et al., 2006).

È stato fondamentale selezionare i modelli di ratto applicabili per gli studi sull'osteoporosi eIl morbo di Alzheimer. Il modello di osteoporosi indotta da ovariectomia è stato ampiamente adottato negli studi sull'osteoporosi (Zhao et al., 2011; Liu et al., 2018). Sebbene la patogenesi dell'AD sia varia, gli studi hanno dimostrato che lo stress ossidativo e l'esposizione all'alluminio erano le cause importanti dell'AD (Xiao et al., 2011; Bhattacharjee et al., 2014). Il D-galattosio è una specie di zucchero riducente invivo. Quando era molto più alto del livello normale nel corpo, poteva essere ossidato dalla galattosio ossidasi alle aldeidi che non potevano essere ulteriormente metabolizzate e potevano essere in gran parte accumulate nel cervello causando di conseguenza lo stress ossidativo e l'apoptosi del neurocita (Cui et al., 2006). L'alluminio può facilmente attraversare la barriera ematoencefalica e presenta un'evidente neurotossicità per il cervello (D. Prakash et al., 2013). Può causare una deposizione extracellulare di neuroni e indurre la produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS), che causano stress ossidativo e compromissione dei neuroni (Walton, 2013). Numerosi studi hanno dimostrato che il trattamento del D-galattosio combinato con AlCl3 negli animali, in particolare nei roditori, potrebbe compromettere in modo significativo la loro capacità di apprendimento e memoria (Chiroma et al., 2018). Potrebbe indurre l'espressione e l'accumulo di A 1-42 nella corteccia cerebrale e nell'ippocampo (Yang et al., 2014). Inoltre, gli studi hanno anche indicato che l'ovariectomia combinata con un'iniezione intraperitoneale di galattosio D a lungo termine potrebbe causare alterazioni fisiopatologiche associate al morbo di Alzheimer, come perdita sinaptica, compromissione degli astrociti, accumulo di A intracellulare e grovigli neurofibrillari, che potrebbero fungere da doppio modello di lesione per AD (Su et al., 2010).

Nel nostro studio, tre gruppi modello del gruppo OVX, del gruppo D e del gruppo OVX più D sono stati rispettivamente impostati per confermare che il metodo di chirurgia ovariectomia combinato con un'iniezione intraperitoneale di D-galattosio e la somministrazione intragastrica di AlCl3 potrebbe comportare meglio le caratteristiche patologiche dell'osteoporosi eIl morbo di Alzheimerallo stesso tempo.

Sono stati utilizzati metodi multipli per valutare il modello di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimer. L'apprendimento e la memoria sono alcune delle attività di alto livello nel cervello.Il morbo di Alzheimerpuò causare diversi gradi di deterioramento cognitivo (Albert et al., 2011). Il test di apprendimento e memoria dei roditori è un metodo comune per lo studio dei comportamenti e dei meccanismi cognitivi nel campo delle neuroscienze (Kwon et al.,2011). Il test Morris Water Maze (MWM) è stato utilizzato nel nostro studio per valutare la capacità di apprendimento e memoria dei ratti, che è stato ampiamente utilizzato nella ricerca neurobiologica e neurofarmacologica dei roditori (Gacar et al., 2011). I risultati del test MWM hanno mostrato che la latenza di fuga del gruppo OVX plus D è aumentata significativamente e i tempi di attraversamento e il tempo di nuoto nel quadrante target del gruppo OVX plus D sono ovviamente diminuiti rispetto al gruppo Sham, il che ha indicato che l'abilità cognitiva dei ratti nel gruppo OVX plus D era gravemente compromesso. L'ippocampo, un'area cerebrale critica per l'apprendimento e la memoria, è particolarmente vulnerabile ai danni nelle prime fasi dell'AD. (Mu e Gage, 2011). L'analisi biochimica dell'ippocampo ha rivelato che l'attività AChE era ovviamente più alta e l'attività ChAT era molto più bassa nel gruppo OVX più D rispetto a quella del gruppo Sham, il che indicava che la capacità di apprendimento e di memoria di il gruppo OVX plus D può essere compromesso a causa della diminuzione dell'acetilcolina nel cervello. Inoltre, il danno ossidativo potrebbe anche aver influenzato le normali funzioni dell'ippocampo a causa della diminuzione dell'attività SOD e dell'aumento del contenuto di MDA nel gruppo OVX plus D. L'analisi istomorfologica dell'ippocampo ha mostrato che il numero di neuroni si è ridotto significativamente e i neuroni erano disposti in modo disordinato nel gruppo OVX più D rispetto al gruppo sham, il che indicava che i neuroni nell'ippocampo erano stati gravemente compromessi.

La formazione dell'osteoporosi è stata valutata mediante biochimica sierica, micro-TC, istomorfologia ossea e test biomeccanico nel nostro studio. Le attività di BALP e TRAP nel siero sono l'indice rappresentativo nella formazione ossea e nel riassorbimento osseo (Rufus et al., 2013). Rispetto al gruppo Sham, le attività di BALP e TRAP nei gruppi OVX e OVX più D sono aumentate significativamente, caratteristiche tipiche dell'osteoporosi ad alto turnover causata dall'ovariectomia. Nel frattempo, si è verificato anche un danno ossidativo nei ratti del gruppo OVX plus D per la diminuzione dell'attività di SOD e l'aumento del contenuto di MDA, che ha ulteriormente accelerato il processo di osteoporosi. La micro-TC è un tipo di tecnica con le caratteristiche dell'imaging non invasivo combinate con il rilevamento istologico ad alta risoluzione, particolarmente adatta per l'imaging osseo e la ricerca dei parametri ossei (Ito, 2011). I risultati dell'analisi Micro-CT hanno indicato che la diminuzione della BMD, una grande perdita di massa ossea e la microarchitettura distrutta delle trabecole sono state mostrate nel gruppo OVX più D rispetto al gruppo Sham. L'istomorfologia ossea ha anche dimostrato che le trabecole sono state significativamente distrutte nel gruppo OVX più D. L'osteoporosi può aumentare il rischio di frattura e il test biomeccanico osseo potrebbe essere utilizzato per rilevare la forza ossea (Mears et al., 2010). Il test di flessione a tre punti della tibia ha mostrato che la forza ossea del gruppo OVX plus D è diminuita significativamente rispetto al gruppo Sham. Inoltre, l'analisi dell'istomorfologia e della morfometria uterina ha rivelato che l'utero si è ridotto significativamente, l'endometrio era ovviamente più sottile e il numero di ghiandole uterine si è ridotto nel gruppo OVX plus D rispetto al gruppo sham per la mancanza di estrogeni.

Cistanche tubuloseè un tonico ben noto nella medicina tradizionale cinese che ha gli effetti di immunoregolazione, antiossidante, antietà, neuroprotezione e promozione della crescita degli osteoblasti (Li et al.,2016). Echinacoside e acteoside sono i principali costituenti attivi inCistanche tubulose, e i loro vari effetti farmacologici meritano di essere studiati in modo approfondito (Fu et al., 2018).

Nel nostro presente esperimento, gli effetti dell'echinacoside o dell'acteoside sul modello di ratto dell'osteoporosi combinati conIl morbo di Alzheimer eranoulteriormente studiato. Ha mostrato effetti evidenti sull'osteoporosi e sul morbo di Alzheimer, in particolare sull'echinacoside. I risultati hanno indicato che l'echinacoside potrebbe aumentare significativamente l'apprendimento e la memoria e migliorare la disfunzione cognitiva promuovendo la sintesi dell'acetilcolina e proteggendo i neuroni nell'ippocampo. Nel frattempo, l'echinacoside e l'acteoside potrebbero ridurre significativamente il riassorbimento osseo diminuendo le attività di BALP e TRAP. Inoltre, potrebbero aumentare anche la densità minerale ossea media e la forza ossea prevenendo la perdita di massa ossea e migliorando la microarchitettura delle trabecole. Inoltre, anche l'echinacoside e l'acteoside hanno mostrato la tendenza al miglioramento delle condizioni dell'utero. È stato riportato che l'echinacoside e l'acteoside hanno un effetto simile agli estrogeni (Wang et al., 2014). Il nostro studio precedente aveva anche dimostrato che, come nuovo tipo di fitoestrogeni, l'echinacoside potrebbe prevenire efficacemente l'osteoporosi e inibire il riassorbimento osseo dopo l'ovariectomia nei ratti (Li et al., 2013). Secondo questi risultati, l'echinacoside o l'acteoside possono avere effetto dalla via di segnalazione degli estrogeni o da un'altra via associata agli estrogeni. Nella ricerca successiva, diverse dosi di echinacoside o acteoside saranno impostate per rivelare la relazione dose-effetto e saranno ulteriormente studiate le vie di segnalazione rilevanti per chiarire i meccanismi comuni dell'echinacoside o dell'acteoside sull'osteoporosi combinati conIl morbo di Alzheimer.

Cistanche tubuloseperIl morbo di Alzheimer

5. conclusione

Il modello di ratto di osteoporosi combinato conIl morbo di Alzheimer erafattibile e affermata con successo nel nostro studio. Nel frattempo, echinacoside e acteoside daCistanche tubulosehanno mostrato gli effetti significativi del miglioramento dell'apprendimento e della capacità di memoria, della regolazione del metabolismo osseo, della riduzione del danno ossidativo e della protezione dei neuroni su questo modello simultaneo. L'echinacoside e l'acteoside potrebbero essere i potenziali candidati con doppi effetti e fornire l'evidenza sperimentale per ulteriori studi sui meccanismi molecolari nella ricerca successiva.

Contributi degli autori

Yi Chen ha scritto il manoscritto. Yi Chen, Ying-Qi Li e Jia-Yi Fang hanno eseguito gli esperimenti. Yi Chen ha analizzato i dati. Fei Li e PingLi hanno progettato lo studio e hanno rivisto il manoscritto.

Dichiarazione di interesse concorrente

Gli autori dichiarano di non avere interessi contrastanti in questo manoscritto e di non avere un sostegno finanziario significativo per questo lavoro che possa influenzarne l'esito.

Da: "Istituzione del modello sperimentale simultaneo di osteoporosi combinato con il morbo di Alzheimer nei ratti e i doppi effetti di echinacoside e acteoside da Cistanche tubulosa" di Yi Chena, et al.

---Rivista di etnofarmacologia 257 (2020) 112834