I polisaccaridi dello Xinjiang Cistanche Deserticola hanno effetti antiossidanti

astratto

È stata studiata l'attività antiossidante del polisaccaride Cistanche deserticola in vitro. Prendendo l'acido ascorbico come controllo, prendendo la reazione simile a Fenton per produrre radicali idrossilici, la reazione di autossidazione della dopamina per produrre radicali anionici superossido, la reazione dell'ipoclorito di sodio con perossido di idrogeno per produrre ossigeno singoletto, radicali difenil idrazina amara come modello sperimentale , gli effetti dei polisaccaridi Cistanche deserticola sui radicali anionici superossido, i radicali idrossilici DPPH · radicali liberi (radicale difenil idrazina amara), l'effetto scavenging dell'ossigeno singoletto. I risultati hanno mostrato che i polisaccaridi della Cistanche deserticola avevano evidenti effetti di eliminazione dei suddetti radicali liberi e l'effetto di eliminazione era correlato positivamente con la concentrazione di polisaccaridi.

Parole chiave :Cistanclui tubulosa Polysaccaride; Radicale libero

1. Introduzione

Il corpo produce continuamente vari radicali liberi reattivi dell'ossigeno (ROS) nel processo del metabolismo ossidativo delle attività vitali, che è il prodotto intermedio della reazione di ossidoriduzione del metabolismo aerobico.La ricerca ha scoperto che i radicali liberi in eccesso attaccano le macromolecole vitali e vari organelli, causando vari danni a livello molecolare, cellulare, tissutale e di organi, accelerando il processo di invecchiamento del corpo e inducendo malattie come trombosi, diabete, aterosclerosi, tumori, ecc. [1]. A causa della tossicità degli antiossidanti sintetizzati chimicamente per il corpo umano, la ricerca di antiossidanti naturali ad alta efficienza e bassa tossicità in grado di rimuovere i radicali liberi dell’ossigeno è diventata un argomento di ricerca caldo nei campi della medicina, dell’alimentazione, dell’ingegneria chimica e di altri campi anni recenti.

Cistanche deserticola(YCMa.)è una rara medicina tradizionale cinese ed è conosciuta come "ginseng del deserto" [2]. Cistanche deserticola mail polisaccaride è uno dei principali componenti bioattivi di Cistanche deserticola, ma non esiste alcun rapporto sul fatto che il polisaccaride Cistanche deserticola abbia l'effetto di eliminare i radicali liberi. In questo articolo, gli effetti di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola sul radicale anionico superossido, sul radicale idrossile, sul radicale libero DPPH · e sull'ossigeno singoletto sono stati determinati mediante analisi spettrale, per valutare la sua attività antiossidante e fornire una base scientifica per il pieno sviluppo e utilizzo di questa risorsa naturale.

Cistanche alle erbe cinesi

2. Parte sperimentale

2.1 Strumenti e reagenti

Spettrofotometro UV-2401 UV-visibile (Shimadzu, Giappone); Luminometro a tubo ultrasensibile LumatLB9507 (Germania

BertholdTechnologies); Evaporatore rotante RE-52CS (fabbrica di strumenti biochimici di Shanghai Yarong); Bagnomaria termostatico elettronico HW-SY (Jintan Xinhang Instrument Factory); pHmetro PHS-3C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); Forno di essiccazione sotto vuoto DZF-6020 (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: acquistata dalla Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamina (Istituto cinese per il controllo dei prodotti farmaceutici e biologici), FeSO4, EDTA, vitamina C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, ecc. sono tutti reagenti analitici domestici. L'acqua sperimentale è acqua distillata a scambio ionico.

2.2 Metodo sperimentale

2.2.1 Metodo di estrazione diCistanche deserticolapolisaccaride

Prendi 30 g di polvere di Cistanche deserticola e mettili in una beuta conica da 500 ml. Immergerlo in etere di petrolio (60-90 gradi), etere e soluzione calda di etanolo all'80% (30 gradi) rispettivamente per 6 ore e il residuo viene volatilizzato per asciugare il solvente. Immergere il residuo del filtro in acqua nel rapporto di 1 ∶ 10 per 24 ore, scaldarlo a 30 gradi ed estrarlo per 100 minuti. Dopo l'estrazione, centrifugare per ottenere il surnatante. Dopo che il surnatante è stato concentrato a pressione ridotta, viene precipitato con etanolo al 95% pari a 3 volte il volume. È consentito riposare per 24 ore a 4 gradi. Dopo la centrifugazione, viene raccolto e precipitato. Dopo essiccamento sotto vuoto si può ottenere il polisaccaride grezzo di Cistanche deserticola. Pesare 1,00 g di polisaccaride grezzo, scioglierlo con acqua e metterlo in un matraccio tarato da 50 ml per lo standby.

Ginseng del deserto: antiossidante

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2.2.2 Test sulla capacità di scavenging diCistanche deserticolapolisaccaride a O-2 · radicale libero

La capacità di eliminare il polisaccaride Cistanche deserticola da O{{0}} · è stata testata mediante la produzione di radicali liberi superossido (O-2 ·) dall'autossidazione della dopamina [3]. Aggiungere 3,0mL di {{10}},1mmol/LpH=10,12 soluzione tampone di carbonato, 3,0mL di acqua e {{18 }}.5 ml di soluzione campione di polisaccaridi a diverse concentrazioni nella provetta essiccante con scala a sua volta. Dopo il preriscaldamento a bagnomaria a 30 gradi per 5 minuti, aggiungere 1,0ml di 2,0 mmol/L di dopamina preriscaldata a bagnomaria a 30 gradi, mescolare immediatamente e cronometrare, mantenere la reazione a 30 gradi per 5 minuti e interrompere immediatamente la reazione con 2 gocce di HCl 10mol/L. Utilizzare la soluzione tampone come riferimento, misurare l'assorbanza (campione A) a 221 nm, sostituire il campione (bianco A) con 0,5 ml di acqua nel gruppo bianco e sostituire il campione con 0,5 ml di acido ascorbico nel gruppo di controllo , misurare ciascun campione tre volte in parallelo e ottenere il valore medio. O-2 · tasso di eliminazione (%)=(Un bianco - Un campione)/Un bianco × 100%

2.2.3 Test sulla capacità di scavenging diCistanche deserticolapolisaccaride a · radicale libero OH

Derba cisanche vivente del deserto—Antiossidante

Il sistema EDTA-Fe (Ⅱ) - blu di metilene - H2O2 è stato utilizzato per testare la capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola sul radicale ossidrile. Il principio è che l'EDTA-Fe (Ⅱ) reagisce con il perossido di idrogeno per produrre radicali liberi · OH, che riducono il caratteristico picco di assorbimento della soluzione di blu di metilene a 660 nm.

Aggiungere 1,0mL di soluzione LFeSO4 5mmol/L, 1,2 mL di soluzione LEDTA 5mmol/L, 2,0mL di 0.03mol/L NaH2PO{ {12}}Soluzione tampone Na2HPO4 (pH=7.4) e 1,3 ml di soluzione di perossido di idrogeno 20mmol/L in una serie di provette da 10ml con tappi, agitare bene, aggiungere 0,7 ml di soluzione di blu di metilene 0,2 mmol/L, quindi aggiungere rispettivamente 1,0 ml della soluzione da testare e vitamina C1.0 a diverse concentrazioni, diluire a 10.00 mL con acqua, mescolare bene, mantenere a 37 gradi per 30 minuti e misurare il valore di assorbanza di ciascuna soluzione a 660 nm. Il gruppo vuoto ha sostituito la soluzione campione con acqua. Ciascun campione deve essere misurato tre volte in parallelo e deve essere preso il valore medio. · Tasso di eliminazione dei radicali OH del campione (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × Nella formula del 100%: A0 -- assorbanza valore del tubo integro; A1 - valore di assorbanza del tubo danneggiato; A2 -- Valore fotometrico dopo l'aggiunta del campione.

2.2.4 Test su DPPH · capacità di scavenging diCistanche deserticolapolisaccaride

Prendi {{0}},1 ml di soluzione di polisaccaride Cistanche deserticola e aggiungila a 5,0 ml di soluzione LDPPH ·, mescola rapidamente e lascia riposare per 10 minuti a temperatura ambiente,

Determinare la variazione di assorbanza alla lunghezza d'onda di 517 nm [4]. Ciascun campione deve essere misurato tre volte in parallelo e deve essere preso il valore medio. Il tasso di eliminazione del campione di DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Nella formula di 100%: A0 -- valore di assorbanza di DPPH · (1,9 mlLDPPH ·+0,1 ml50% di etanolo) senza campione; A - valore di assorbanza del campione dopo reazione con DPPH ·; B -- valore di assorbanza del campione bianco (campione 0,1 ml+1,9 ml di etanolo al 50%).

2.2.5Cistanche deserticolaTest dell'ossigeno singoletto 1O2 per l'eliminazione dei polisaccaridi

L'ossigeno a linea singola (1O2) è prodotto dalla reazione chimica di NaClO e H2O2 a 37 gradi [5]. La soluzione utilizzata per la determinazione di 1O2 è 100 μ L2,8mmol/L soluzione NaClO, 400 μ L5mmol/LNaOH soluzione, 300 μ L10mmol/LH2O2 soluzione, 50 μ L1mmol/Luminol soluzione. Durante la reazione, la soluzione di reazione viene aggiunta alla soluzione campione e allo stesso tempo lo strumento di chemiluminescenza registra automaticamente il processo di reazione. Prendi NaClO-H2O2-NaOH-Luminol come controllo vuoto. Avviare la reazione e aggiungere la soluzione di reazione nella provetta campione dal flacone di conservazione dello strumento di chemiluminescenza in base alla quantità stabilita dalla procedura. Quindi l'intensità della chemiluminescenza della miscela di reazione viene registrata sulla carta di registrazione ogni 5 s, ciascun campione viene misurato tre volte in parallelo e viene preso il valore medio.

Il tasso di eliminazione viene calcolato in base alla seguente formula: tasso di eliminazione (%)=(intensità luminosa di controllo - intensità luminosa campione)/intensità luminosa di controllo × 100%

3. Risultati e discussioni

3.1 Effetto scavenging diCistanche deserticolapolisaccaride su O-2 ·

Benefici della cisanche tubulosa-Antioossidante

È attiva la proprietà chimica di O-2 · che può far sì che gli acidi grassi sul biofilm producano perossido e quindi distruggano le cellule [6]. In questo articolo, è stato utilizzato il metodo della dopamina per determinare la capacità di eliminazione di O-2 ·. La capacità di scavenging di Cistanche deserticola verso O-2 · è mostrata nella Figura 1. I risultati hanno mostrato che il polisaccaride di Cistanche deserticola potrebbe inibire l'O-2 · prodotto dall'autossidazione della dopamina, e aumenta con l'aumento di concentrazione entro l'intervallo di concentrazione misurata (0-8 mg/mL), ma la capacità di eliminazione era inferiore a quella dell'acido ascorbico.

3.2 Effetto scavenging diCistanche deserticolapolisaccaride · OH

·L'OH è uno dei radicali liberi dell'ossigeno più attivi tra le specie dell'ossigeno attivo. Può reagire con quasi tutte le macromolecole biologiche nelle cellule viventi e può portare a processi biochimici come la perossidazione lipidica, la polimerizzazione e la depolimerizzazione delle proteine, la rottura degli acidi nucleici, ecc. nel tessuto corporeo, causando malattie dei tessuti e delle cellule, portando alla comparsa di varie malattie e accelerando l’invecchiamento del corpo [7]. La capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola su · OH è mostrata nella Figura 2. I risultati hanno mostrato che il polisaccaride Cistanche deserticola aveva un buon effetto di eliminazione su · OH, e aumentava con l'aumento della concentrazione.

3.3 La capacità di scavenging del polisaccaride Cistanche deserticola nei confronti del DPPH ·

DPPH · (radicale difenil idrazina amara) è un radicale libero stabile, che è viola in solvente organico e ha un forte assorbimento vicino a 517 nm. Dopo l'aggiunta di antiossidanti, vengono rimossi alcuni radicali liberi, che ne indeboliscono l'assorbimento, che può essere utilizzato per valutare l'attività antiossidante di questa sostanza [8]. Vedere la Figura 3 per DPPH · capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola. I risultati sperimentali hanno mostrato che la capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola su DPPH · era correlata positivamente con la sua concentrazione, e la capacità di eliminazione era maggiore di quella dell'acido ascorbico.

3.4 Capacità di scavenging del polisaccaride Cistanche deserticola in 1O2

L'ossigeno a linea singola è ossigeno molecolare eccitato con proprietà chimiche attive. Poiché gli elettroni spaiati hanno la tendenza ad accoppiarsi, i radicali liberi mostrano proprietà chimiche più attive [9]. La capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola in 1O2 è mostrata nella Figura 4. I risultati sperimentali hanno mostrato che la capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola era inferiore a quella dell'acido ascorbico nell'intervallo di 0-4.0 mg /mL e la capacità di eliminazione del polisaccaride Cistanche deserticola era superiore a quella dell'acido ascorbico quando la concentrazione era maggiore di 4,0mg/mL.

4. Conclusione

L'attività antiossidante dei polisaccaridi della Cistanche deserticola in vitro è stata studiata in dettaglio attraverso diversi sistemi reattivi di radicali liberi dell'ossigeno.Dai risultati sperimentali, si può vedere che all'interno dell'intervallo di concentrazione sperimentale, l'estratto polisaccaridico di Cistanche deserticola ha effetti scavenging su O-2 ·, · OH, DPPH · e 1O2, e gli effetti scavenging sono diversi per diversi sistemi.I risultati lo hanno dimostratoIl polisaccaride Cistanche deserticola è un efficace antiossidante naturale esogeno, meritevole di ulteriore ricerca, sviluppo e utilizzo completo.

Cistacca tubulosa 200 mg—Antioossidante