Effetti antiossidanti dei feniletanoidi da Cistanche Deserticola

Contatto: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota, "Tadato Tani,6 e Tsuneo Namba"

L'estratto acetone-H2O (9:1) dal gambo di Cistanche deserticola ha mostrato una forte attività di scavenging dei radicali liberi. Da questo estratto sono stati isolati nove principali composti feniletanoidi. Sono stati identificati mediante NMR come acteoside, isoacteoside, l^acetylacteoside, tubuloside B, echinacoside, tubuloside A, syringalide A 3z-a-rhamno-pyranoside, cistanoside A e cistanoside F. Tutti questi composti hanno mostrato attività di scavenging dei radicali liberi più forti di un -tocoferolo sul radicale 1,1 -difeniI-2-picrylhydrazy 1 (DPPH) e xantina/xantina ossidasi (XOD) generato il radicale anione superossido (Oj). Tra i nove composti, l'isoacteoside e il tubuloside B, la cui frazione caffeoil è in posizione d' del glucosio, hanno mostrato un effetto inibitorio su XOD. Abbiamo ulteriormente studiato gli effetti di questi feniletanoidi sulla perossidazione lipidica nei microsomi di fegato di ratto indotta da metodi enzimatici e non enzimatici. Come previsto, ognuno di essi ha mostrato un'inibizione significativa sia sull'acido ascorbico/Fe2 plus che sull'ADP/NADPH/Fe3 plus indotto dalla perossidazione lipidica nei microsomi del fegato di ratto, che erano più potenti dell'a-tocoferolo o dell'acido caffeico. È stato riscontrato che l'effetto antiossidante è potenziato da un aumento del numero di gruppi idrossilici fenolici nella molecola.

Parole chiave: Cistanche desertiche; feniletanoidi;antiossidante; radicale DPPH (1 ,1 -difenile-2-picrylidrazil); radicale anionico superossido; perossidazione lipidica

fusto di Cistanche deserticola

Il fusto di Cistanche spp. (Cistanche Erba, famiglia delle Orobanchaceae) è un tonico nella medicina tradizionale cinese usato per la deficienza renale caratterizzata da impotenza, sensazione di freddo ai lombi e alle ginocchia, sterilità femminile e stitichezza dovuta alla secchezza dell'intestino nel senile.Da queste piante sono stati isolati numerosi costituenti tra cui feniletmoidi (talvolta chiamati fenilpropanoidi),2) ir idoidi3* e polisaccaridi4). Sato et al5} hanno riferito che alcuni feniletanoidi di questo farmaco grezzo hanno mostrato un effetto protettivo contro la diminuzione dei comportamenti sia sessuali che di apprendimento nei topi appesi carichi di stress. I feniletanoidi sono i principali costituenti di queste piante e si ritiene che contribuiscano alle varie azioni di questo farmaco.6)

I feniletanoidi sono ampiamente distribuiti nel regno vegetale e alcuni sono stati trovati per avere l'attività di anti-anossia,7) anti-neoplasma,8) inibizione enzimatica,9* anti-infiammatoria,10) antinefrite,1 n anti-microorganismo e immunomodulazione.12) Sono stati riportati anche studi sull'attività antiossidante di alcuni feniletanoidi di Pedicularis,13 -15) ma non è stata trovata alcuna relazione sull'attività antiossidante di feniletanoidi delle specie Cistanche.

È ben noto che i radicali liberi sono coinvolti in modo critico in varie patogenesi come cancro, disturbi cardiovascolari, artrite, infiammazione, nonché nei processi degenerativi associati all'invecchiamento.16™18) Nel nostro screening per gli agenti antietà dalle risorse naturali , abbiamo scoperto che ciascuno degli estratti CHC13 (C), EtOAc (E), acetone (A), acetone-H2O (9:1) (AH) e acqua (H) dello stelo di Cistanche deserticola mostrava un potente DPPH attività di scavenging dei radicali (Fig. 1), tra cui la più forte è stata esibita dall'estratto di acetone-H?.(9:1) (AH). L'estratto di acetone-H2O (9:1) conteneva un alto rapporto di feniletanoidi, che erano probabilmente costituenti attivi degli effetti di scavenging dei radicali liberi. Abbiamo isolato i principali feniletanoidi da questo estratto e studiato gli effetti antiossidanti mediante il loro scavenging sul radicale DPPH e sul radicale anione superossido generato da xantina/XOD e la loro inibizione dell'acido ascorbico/Fe2 plus e della perossidazione lipidica indotta da ADP/NADPH/Fe3 plus nel fegato di ratto microsomi.

Cistanche desertiche

MATERIALI E METODI

Reagenti Poliammide C-200 (75一150/zm) e gel di silice (Wakogel C-200, 75—150^m) polvere per cromatografia su colonna, DPPH (1,{7}}difenile{{ 8}}picrylidrazyl), xantina, XOD (xantina ossidasi), NBT (nitroblue tetrazolio), ADP, g-NADPH, acido caffeico e a-tocoferolo sono stati acquistati da Wako Pure Chemicals, Osaka, Giappone. La malonaldeide bis(dimetilacetale) proveniva da Tokyo Kasei, Tokyo, Giappone. BSA (albumina di siero bovino) e allopurinolo provenivano da sigma, St. Louis, USA Altre sostanze chimiche erano di grado analitico.

Strumenti L'assorbanza UV è stata misurata su aSpettrofotometro di registrazione Shimadzu UV-2200, spettri NMR sono stati trasportati su un sistema JEOL GX-400 o JEOL JNM-LA 400WB FT NMR.

Materiali vegetali Una droga grezza commerciale (prodotta a Nei Monggol, acquistata nel mercato della droga grezza di Bozhou, provincia di Anhui, Cina, 1995; lo speci men del voucher, TMPW n. 15479, depositato nel Museo della Materia Medica, Centro di ricerca analitica per l'etnomedicina, ricerca Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) è stato identificato come steli di Cistanche deserticola YC Ma confrontando i suoi caratteri morfologici e anatomici con un campione autentico fornito dal professor Dawen Shi, Dipartimento di Farmacognosia, Shanghai Medical University, Cina.

Estrazione e isolamento Il farmaco grezzo in polvere (5,87 kg) è stato estratto consecutivamente con CHC13 (12, 9 1x2) ed EtOAc (9 1 x 3) a temperatura ambiente e fatto rifluire con acetone (9 1 x 3), acetone-玦0 (9:1,91x3) e H2O (7.5 1x4) per dare gli estratti di CHC13 (C) (28,7 g), EtOAc (E) ( 13,4 g), acetone (A) (95 g), acetone-H2O (9:1) (AH) (175 g) e H2O (H) (2,51 kg), rispettivamente. Una porzione di lOOg dell'estratto acetone-H2O (9:1) è stata sottoposta a una colonna di poliammide C-200 (4{{50}}0 g) ed eluita con H2O ({{41 }}) e poi MeOH (5 1). L'eluente MeOH (20 g) è stato caricato su una colonna di gel di silice (600 g) ed eluito con CHCl3-MeOH-H2O (8: 3:0,3) (5 1) per dare 10 frazioni. Ciascuna frazione è stata sottoposta a colonna Sephadex LH{54}} ed è stata eluita con vari rapporti di MeOH-H2O (0-50 percento); nove principali feniletanoidi 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , sono stati ottenuti 9 (75 mg).

Animali Maschio Std: sono stati utilizzati ratti Wistar (8 settimane di età, 230一 250 g). Gli animali sono stati acquistati dallo Shizuoka Laboratory Animal Center e sono stati nutriti con un pellet chow da laboratorio (Clea Japan) e hanno ricevuto acqua ad libitum.

Preparazione della sospensione microsomiale di fegato di ratto La frazione microsomiale di fegato di ratto è stata preparata con il metodo di Kiso et al.19) ma senza pretrattamento con fenobarbital. Dopo che gli animali avevano digiunato per 24 ore, i fegati sono stati perfusi con una soluzione ghiacciata di 0,9% di NaCl in situ, quindi tagliati a pezzi sottili e omogeneizzati in una soluzione fredda di KC1 all'1,15% (1.{{9} } ml/g di peso del fegato umido). L'omogeneizzato è stato diluito quattro volte con una soluzione di KC1 all'1,15% e centrifugato a 8000 g per 20 minuti a 4 gradi. La frazione surnatante è stata quindi raccolta e ultracentrifugata a 105000 g per 60 min. Il pellet ottenuto è stato risospeso nello stesso volume di una soluzione di KCI all'1,15%. Il contenuto proteico è stato determinato con il metodo di Lowry et utilizzando l'albumina come standard.

Preparazione del campione I campioni analizzati sono stati disciolti in acqua o etanolo e diluiti con acqua a varie concentrazioni. Le concentrazioni finali di etanolo erano inferiori all'1% in tutti i sistemi di analisi eccetto il test di scavenging radicalico DPPH. L'etanolo a una concentrazione finale inferiore all'1% non ha mostrato alcun effetto su questi sistemi di analisi.

Effetto di scavenging dei radicali DPPH L'effetto di scavenging corrispondeva all'intensità di spegnimento del radicale DPPH, come descritto da Hatano et al.21) Cinquecento /A di 60 µm di DPPH in EtOH sono stati aggiunti a 500 /zl di soluzione del campione e lasciati reagire per 30 min a temperatura ambiente, quindi la densità ottica è stata misurata a 520 nm. Per il bianco è stato utilizzato EtOH al posto della soluzione DPPH e per il controllo è stato utilizzato H2O invece della soluzione campione. I valori IC50 sono stati calcolati da linee di regressione in cui l'ascissa rappresentava la concentrazione del composto testato e l'ordinata la riduzione percentuale media del radicale DPPH da quattro test separati.

Effetti sulla generazione di radicali di anioni superossido La produzione di anioni superossido nel sistema xantina/XOD è stata determinata utilizzando una dimensione dimezzata del metodo di Imanari et al.22) Una miscela composta da 900/zl di 0,05 m Na2CO3 (pH 10,2), 50 /il ciascuno di 3 mM di xantina, 3 mM EDTA, 1,5 mg/ml BSA, 0,75 mM NBT e al campione testato sono stati aggiunti 50 di 0,1 mg/ml XOD per iniziare il reazione. Dopo incubazione per 30 min, la reazione è stata interrotta con 50/il di CuCl2 6 mM e l'assorbanza è stata misurata a 560 nm. La soluzione di controllo è stata preparata allo stesso modo, ma al posto della soluzione campione è stata utilizzata 50/l di H2O. Nella soluzione in bianco sono stati utilizzati 50/l di H2O invece della soluzione di XOD. I valori di IC50 sono stati calcolati da linee di regressione in cui l'ascissa rappresentava la concentrazione logaritmica del composto testato e l'ordinata l'inibizione percentuale media della riduzione di NBT di quattro nei test dipendenti.

Effetti inibitori sull'attività di XOD Gli effetti inibitori sull'attività di XOD sono stati stimati con il metodo di Hatano et al.* con alcune modifiche. Una miscela composta da 600/11 di tampone (0.1 m di soluzione di fosfato, pH 7,5), 50 以 di soluzione di XOD (0,068 U/ml in tampone) e 50 µl di soluzione campione sono stati preincubati per 10 minuti a 25 gradi. Quindi, 300 pl di soluzione di xantina (0,1 mM in tampone) sono stati aggiunti alla miscela e la soluzione risultante è stata incubata per 30 minuti a 25 gradi. La reazione enzimatica è stata terminata aggiungendo 1 n HC1 (100 /zl) e l'assorbanza della miscela di reazione è stata misurata a 295 nm. Dall'assorbanza è stata calcolata la concentrazione di acido urico formatosi nella miscela, dopo aver sottratto l'assorbanza della soluzione in bianco che è stata preparata come sopra descritto, salvo che la soluzione di XOD è stata sostituita con 50 /zl di tampone. Gli effetti inibitori su XOD sono stati espressi dalla percentuale di inibizione (percentuale) della formazione di acido urico rispetto a quella del controllo, in cui è stata utilizzata acqua invece della soluzione del campione. Il noto inibitore XOD, allopurinolo, è stato utilizzato come controllo positivo.

Effetti inibitori sulla perossidazione lipidica nei microsomi di fegato di ratto La perossidazione lipidica in microsomi di fegato di ratto indotta non enzimaticamente da ascorbico/Fe2 plus ed enzimaticamente indotta da ADP/NADPH/Fe3 plus è stata misurata con il metodo di Kiso et al.19) con alcune modifiche .

a) Acido ascorbico/Fe2 più perossidazione lipidica indotta in microsomi di fegato di ratto: la miscela di reazione era composta da 390/11 di 100 mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 pl di frazione microsomiale in 1,15 percento di KC1 (20 mg di proteine/ml) e 50 以 di una soluzione campione. Dopo aver aggiunto 10/11 di acido ascorbico 10 mM/FeSO4 0,5 mM e quindi incubato a 37 gradi per 20 minuti, la miscela di reazione è stata raffreddata in ghiaccio per fermare la reazione. La perossidazione lipidica è stata misurata con il metodo dell'acido tiobarbiturico24) ed espressa come produzione di MDA (malondialdeide). Quella

b) ADP/NADPH/Fe3 più perossidazione lipidica indotta in microsomi di fegato di ratto: la miscela di reazione conteneva 290贝 di 100 mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/l di sospensione microsomiale in 1,15 percento di KC1 (20 mg di proteine/ml) e 50 以 di campione in acqua. Cinquanta di ADP 20 mM appena preparato, 50//I di NADPH 1 mM e 10 di FeCl3 2 mM sono stati aggiunti e quindi incubati a 37 gradi per 30 minuti. È stata misurata la perossidazione lipidica e IC50 è stata calcolata con il metodo sopra.

benefici cistanche: proteggere il fegato

RISULTATI

Determinazione della struttura Confrontando direttamente i loro dati ^H-NMR e 13C-NMR con la letteratura,2* i nove feniletanoidi sono stati identificati come 2,-acetilacteoside (1), cistanoside A (2), tubuloside A (3), echinacoside ( 4), acteoside (5), siringalide A 3'-a-ramnopiranoside (6), tubuloside B (7), isoacteoside (8) e cistanoside F (9), rispettivamente (Fig. 2). Tuttavia, per l'acteoside, un composto rappresentativo di feniletanoidi, assegnazioni dei segnali 13C-NMR di C-3 e C-4 nella frazione agliconica, C-3, C-4 , C-5 e C-6 nella parte caffeica nei rapporti precedenti25) erano fonte di confusione. Con il metodo di 2D-NMR come HMBC e HMQC, abbiamo assegnato inequivocabilmente i dati 13C-NMR di acteoside come frazione di aglicone Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144,62, C-5: 116,34, C-6: 121,29, Ca: 72,33, C# 36,54; frazione caffeoile Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C-6: 123,24 , Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; frazione di glucosio C-l': 104,16, C-2': 75,97, C-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62.35; e frazione di ramnosi: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C-5: 70,58, C-6 : 18.46.

Le relazioni struttura-attività sono state studiate per questi nove feniletanoidi dal loro radicale DPPH e dalle attività di scavenging del radicale anione superossido generato da xantina/XOD, acido ascorbico/Fe2 plus e ADP/NADPH/Fe3 plus perossidazione lipidica indotta nei microsomi del fegato di ratto. Come sostanze di controllo positivo sono stati impiegati acido caffeico e a-tocoferolo, noti spazzini di radicali liberi e antiossidanti.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>siringalide A S'-a-rhamnopiranoside (6) (IC5O=5.52 /zm) > cistanoside F (9) (IC50=6.29 /im) > a-tocoferolo (IC{{10) }}.2//m). Tubuloside B ⑺, echinacoside (4), 2/-acetilacetoside (1), tubuloside A (3), acteoside (5) e isoacteoside (8) (IC5O=2.99一3.49 /im), ciascuno dei quali ha quattro gruppi idrossilici fenolici nella molecola ha mostrato in modo simile un'attività più forte del cistanoside A (2) il cui 3-OH della frazione aglicone è stato metilato. La siringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) che ha un solo gruppo OH nella frazione aglicone ha mostrato un'attività relativamente debole. Il cistanoside F (9), che ha solo due gruppi idrossilici situati nella parte caffeoile ma non ha aglicone feniletanolo, ha mostrato l'attività più debole.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanoside A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tocoferolo (IC50 > 10 〃m).

Effetti inibitori sull'attività di XOD Solo l'isoacteoside (8) e il tubuloside B (7), la cui frazione caffeoil è in posizione 6z del glucosio, hanno avuto effetti inibitori sull'attività di XOD e altri feniletanoidi, che hanno la frazione caffeoil a ^- posizione del glucosio, non ha mostrato effetti alle concentrazioni testate (25一200 m) (Tabella 1). isolato nove principali composti feniletanoidi da questo estratto e determinato le loro strutture mediante NMR. sistema come tubuloside B (7)M2'-acetilacteoside (1) iso-acteoside (8) echinacoside (4) tubuloside A (3) M acteo side (5) > siringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9); nel sistema ADP/NADPH/Fe3 plus come tubuloside B (7)2,-acetilacteoside (^^iso acteoside (8) acteoside (5) > tubuloside A (3) > echinaco side (4) > syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9). Entrambi questi ordini erano simili a quelli dei test di scavenging dei radicali liberi di cui sopra, specialmente nel test di scavenging dei radicali DPPH. Tuttavia, il numero di gruppi idrossilici fenolici nella molecola ha svolto il ruolo più importante nell'inibizione della perossidazione lipidica nei microsomi del fegato di ratto.

effetti di cistanche

DISCUSSIONE

Abbiamo testato le attività di scavenging dei radicali liberi dei vari estratti con solvente dello stelo di Cistanche deserticola sul radicale DPPH e abbiamo scoperto che l'estratto di acetone-H2O (9:1) mostrava l'attività più forte. Per trovare i costituenti attivi dell'attività di scavenging dei radicali liberi, abbiamo isolato nove principali composti feniletanoidi da questo estratto e determinato le loro strutture mediante NMR.

Gli effetti antiossidanti di questi feniletanoidi sono stati valutati dalla loro attività di scavenging dei radicali liberi e dall'attività di perossidazione anti-lipidica. L'a-tocoferolo ampiamente noto è stato utilizzato come sostanza di controllo positivo. Come lala lipofilia dell'a-tocoferolo può influenzare le sue attività negli attuali sistemi di test tranne che nel test di scavenging dei radicali DPPH, abbiamo preso l'acido caffeico come un'altra sostanza di controllo positiva.

In primo luogo, abbiamo effettuato test sulle attività di scavenging dei radicali liberi. Tutti i 9 feniletanoidi testati hanno indubbiamente mostrato attività di scavenging del radicale DPPH e dell'anione superossido più forti dell'a-tocoferolo, ma alcuni erano più forti e altri più deboli dell'acido caffeico. L'attività di scavenging dei radicali è aumentata con un aumento del numero di gruppi idrossilici fenolici. Si credeva che il parallelismo incompleto delle attività di scavenging del radicale DPPH e dell'anione superossido fosse dovuto ai diversi caratteri tra le specie radicaliche e alcuni altri fattori coinvolti in questi due sistemi di reazione,21,26) poiché il radicale DPPH è un radicale indotto chimicamente che reagisce con scavenger di radicali in maniera chimica semplice, mentre il radicale anionico superossido è generato dalla xantina/XOD, una reazione enzimatica.

Se i feniletanoidi inibiscono il radicale anione superossido generato da xantina/XOD, l'inibizione potrebbe essere considerata come il risultato della loro attività di scavenging del radicale anione superossido o (e) della loro inibizione dell'enzima XOD,23), quindi abbiamo condotto un test della loro effetti inibitori della xantina ossidasi. È interessante notare che, selettivamente, solo l'isoacteoside (8) e il tubuloside B (7), la cui frazione caffeoil è in posizione 6/del glucosio, hanno dimostrato l'inibizione. Hanno mostrato un effetto alla concentrazione di 25—200 jtiM su 3,4xlO^3U/ml (10jug/ml) di XOD, sebbene l'attività fosse più debole dell'allopurinolo; altri composti, la cui frazione caffeoil è in posizione《 del glucosio, non hanno mostrato alcun effetto inibitorio. Questo risultato ha fornito il primo rapporto sull'effetto inibitorio dei feniletanoidi sull'enzima XOD. Chan et al.21) hanno riportato che l'acido caffeico e alcuni dei suoi analoghi avevano effetti inibitori sull'attività XOD, tuttavia, non abbiamo riscontrato tale effetto dell'acido caffeico nelle attuali condizioni di reazione. In questo test, la concentrazione di XOD era simile a quella del test di effetto sulla generazione di radicali anionici superossido (4,3 /zg/ml), ma la concentrazione di composti era molto più alta che in quest'ultimo. Pertanto, l'inibizione della generazione di Oj da parte di questi feniletanoidi è dovuta alla loro attività di scavenging dei radicali, ma non alla loro attività inibitoria dell'enzima XOD.

Che la reazione a catena dei radicali liberi porti infine alla perossidazione lipidica è ben noto.28,29) Abbiamo quindi studiato questi composti feniletanoidi per i loro effetti sulla perossidazione lipidica nei microsomi di fegato di ratto indotta dal sistema enzimatico ADP/NADPH/Fe3 plus e quella indotta da il sistema non enzimatico acido ascorbico/Fe2 plus . Tutti questi composti hanno mostrato effetti di perossidazione anti-lipidica più forti dell'acido caffeico e dell'a-tocoferolo in entrambi i sistemi. È generalmente accettato che entrambi i sistemi siano catalizzati da ioni ferro, Fe2 plus o Fe3 plus , coinvolti nei radicali perossilici lipidici,30,31) e che il radicale idrossile OH svolga il ruolo più importante nella perossidazione lipidica,32 _34) sebbene l'inizio di OH sia stato messo in dubbio in alcuni rapporti.35祁6) D'altra parte, il radicale anionico superossido OJ, che è il prodotto principale dell'attacco e_ all'O2 nella catena dei radicali, è piuttosto scadente radicale reattivo e non provoca la perossidazione lipidica stessa. Sebbene questi feniletanoidi abbiano mostrato un'attività di scavenging più debole sul radicale anione superossido rispetto all'acido caffeico, hanno mostrato un'azione di perossidazione anti-lipidica molto più forte di quest'ultimo. Pertanto, riteniamo che, come alcuni altri polifenoli aromatici rompicatena, possano inibire la suddetta perossidazione lipidica nei microsomi del fegato di ratto chelando gli ioni Fe2 plus o Fe3 plus e anche scavenging il radicale superossido Oj per abbattere la reazione a catena dei radicali .37,38) Inoltre, possono anche eliminare specie radicaliche più tossiche come il radicale idrossile e i radicali perossilici lipidici per interrompere direttamente la perossidazione lipidica a una potenza maggiore rispetto all'acido caffeico.38,39)

Li et al. studiato alcuni glicosidi feniletanoidi tra cui acteoside (verbascoside) (5), isoacteoside (isoverbascoside) (1) ed echinacoside (4) di Pedicularis per la loro inibizione dell'autoossidazione dell'acido linoleico nelle micelle, un sistema non biologico,13) per la loro protezione contro l'emolisi ossidativa in vitro,14''1 e anche per i loro effetti di scavenging sul superossido generato da NBT/PMS/NADH e l'inibizione della perossidazione lipidica indotta da acido ascorbico/Fe2 plus nei microsomi epatici di topo.15) Un'attività simile -struttura è stata osservata nei rapporti di Li et al. e i nostri risultati. Cioè, l'attività dei feniletanoidi nell'inibire la perossidazione lipidica dipende principalmente dal numero e dalla posizione sterica dei gruppi idrossilici fenolici.15) Sulla base della loro stereochimica, i gruppi idrossilici fenolici della frazione caffeoile sull'acteoside (5), tubuloside A ( 3), e l'echinacoside (4), che hanno il caffeoile in posizione 4z del glucosio, formerebbero più facilmente un legame idrogeno con i gruppi ossidrile del ramnosile rispetto a quelli dell'isoacteoside (8) e del tubuloside B (7), che avere il caffeoile in posizione 6'- del glucosio. Pertanto, quest'ultimo ha riservato più gruppi idrossilici fenolici liberi rispetto al primo e quindi ha mostrato una maggiore attività di perossidazione anti-lipidica. Abbiamo anche notato che l'acetilazione 2z di questi feniletanoidi, sebbene leggermente, ha migliorato i loro effetti antiossidanti. Ad esempio, l'acteoside (5) e l'isoacteoside (8), quando 2'- acetilato in 2/-acetilacteoside (1) e tubuloside B (7), rispettivamente, hanno mostrato attività più forti in tutti e quattro i sistemi di analisi. A causa della superiorità della stereochimica e della 2'-acetilazione, il tubuloside B (7) ha mostrato la più forte attività antiossidante tra i campioni testati. Forse a causa della sostituzione di una terza porzione di zucchero in posizione 6', questa correlazione non si adattava bene nel caso del tubuloside A (3) o dell'echinacoside (4); tuttavia, nel sistema ADP/NADPH/Fe3 plus, il tubuloside A ⑶ mostrava ancora un'attività di perossidazione anti-lipidica più forte rispetto all'echinacoside (4).

Inoltre, l'ordine dell'attività di scavenging del radicale DPPH ha mostrato un migliore parallelismo con quello della perossidazione anti-lipidica rispetto all'ordine dell'attività di scavenging del radicale anione superossido. Ciò ha dimostrato ancora una volta che il test di scavenging dei radicali DPPH è un metodo conveniente e affidabile per il test antiossidante,26) sebbene il radicale DPPH sia un radicale indotto chimicamente mentre il radicale anione superossido potrebbe essere un radicale biologicamente endogeno.

In conclusione, tutti e nove i feniletanoidi hanno mostrato significative attività di scavenging dei radicali liberi ed effetti di perossidazione anti-lipidica nel presente studio. L'effetto antiossidante è stato potenziato da un aumento del numero di gruppi idrossilici fenolici nella molecola. Come si può immaginare, gli effetti antiossidanti di questi feniletanoidi qui dimostrati possono svolgere un ruolo importante nell'azione del farmaco Cistanchis Herba e possono in parte spiegare i meccanismi dell'attività di alcuni feniletanoidi nei confronti di neoplasie,8* infiammazioni10) e nefriti, 1 n in cui i radicali liberi sono seriamente coinvolti.

Cistsanche Echinacoside: Antiossidante

RIFERIMENTI

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