Predittori di malattie renali croniche negli adolescenti obesi Ⅲ

Biomarcatori

L'escrezione giornaliera di megalina è stata stimata utilizzando il test ELISA Human LRP2/Megalin (LS-F11978-1, BD BioSciences, Varsavia, Polonia). Le concentrazioni di NGAL, Gal-3, MMP12 e TIMP2 sono state stimate utilizzando il kit Human Lipocalin-2/NGAL Quantikine ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN), Human LGALS3/Galectin-3 ELISA Kit (RAB0661, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO), kit ELISA MMP umano-12 (P39900, Invitrogen, Carlsbad, CA) e kit ELISA umano TIM2 (P16035, ThermoFisher Scientific, Waltham, USA-MA) , rispettivamente.

Infine, la concentrazione sierica di adiponectina è stata valutata utilizzando un kit ELISA per adiponectina umana (ab99968, Abcam, Cambridge, UK).

Tutti i campioni dei pazienti e dei controlli sono stati analizzati in duplicato. I test sono stati eseguiti secondo le istruzioni del produttore. Il valore della densità ottica (OD) è stato determinato due volte, utilizzando un lettore di micropiastre, impostato su 450 nm e 540 nm come correzione della lunghezza d'onda. Le letture a 540 nm sono state sottratte dalle letture a 450 nm per correggere le imperfezioni ottiche nella piastra. Le concentrazioni di NGAL, Gal-3, MMP12, TIMP2 e adiponectina eranocalcolato in base alla curva standard. Anche questi standard sono stati analizzati in duplicato.

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analisi statistica

Tutte le variabili continue sono espresse come media ± DS. L'analisi statistica è stata eseguita attraverso i seguenti passaggi: (1) il test di Shapiro-Wilk è stato utilizzato per determinare la distribuzione normale dei dati; (2) è stata utilizzata l'analisi della varianza a una via per confrontare soggetti e controlli dello studio "GFR elevato", "GFR normale" e "GFR ridotto"; (3) La correzione Bonferroni è stata utilizzata come aggiustamento alfa generale per tutti i confronti multipli eseguiti nello studio; (4) le variabili continue non parametriche sono state confrontate utilizzando il test Kruskal-Wallis; e (5) è stato utilizzato il test Pearson χ2 per analizzare i dati nominali.

I fattori indipendenti per lo sviluppo della malattia renale cronica sono stati determinati utilizzando il test esatto di Fisher. Generalmente, nella correlazione di Pearson, un valore di r maggiore di {{0}}.7 era considerato una correlazione forte. Qualsiasi valore compreso tra 0.4 e 0.7 era una correlazione moderata, mentre qualsiasi valore inferiore a 0,4 era considerato una correlazione debole o assente.

I fattori che potenzialmente influenzano la velocità di filtrazione glomerulare negli adolescenti obesi ("concentrazione sierica di acido urico", "concentrazione sierica di trigliceridi", "concentrazione sierica di colesterolo", "concentrazione sierica di adiponectina", "albuminuria", "galectina urinaria-3 concentrazione", "escrezione giornaliera di megalina nelle urine" e "concentrazione di NGAL nelle urine") sono stati valutati utilizzando metodi di regressione lineare che utilizzano analisi univariate e multivariate. I coefficienti di regressione ( ) e l'intervallo di confidenza al 95% (CI) sono stati stimati per tutti i modelli lineari. I modelli di regressione sono stati aggiustati per età e sesso.

Tutte le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando il pacchetto software Statistica 13.3 PL (StatSoft, Polonia). Un valore di p<0.05 was considered statistically signifcant.

Risultati Caratteristiche cliniche

Obese study participants (BMI z-score>2), al momento dell'ingresso nell'analisi, sono stati suddivisi in "GFR elevato" (n=42), "GFR normale" (n= 85) e "GFR diminuito" (n{{ 3}}) secondo i valori GFR stimati dalla formula Filler. Rispetto ai controlli, presentavano albuminuria e avevano una concentrazione sierica di adiponectina significativamente più bassa (p=0.005) e una concentrazione di Gal-3 nelle urine più alta (p=0.004). Sono stati inoltre segnalati adolescenti obesi con "GFR diminuito" (rispetto ai controlli) con concentrazioni sieriche significativamente più elevate di acido urico (p=0.004), trigliceridi (p=0.037) e colesterolo ( p=0.043), nonché una concentrazione urinaria di NGAL e un'escrezione giornaliera di megalina urinaria significativamente più elevate (p=0.005).

Gli adolescenti obesi e quelli di controllo non differivano per quanto riguarda la pressione arteriosa (sia ambulatorialmente che durante il monitoraggio alle 24-h), la morfologia del sangue periferico e i parametri biochimici sierici (comprese le concentrazioni di creatinina, cistatina C, urea, Na, K, Ca, Mg , glucosio a digiuno, TSH, fT3, fT4, enzimi epatici, proteine ​​totali e CRP).

Nessuno degli adolescenti esaminati presentava MMP12 nelle urine e le concentrazioni di TIMP2 erano comparabili in tutti i partecipanti allo studio. Le caratteristiche cliniche di tutti gli adolescenti sono riassunte nella Tabella 1.

Correlazioni e analisi multivariata

Come accennato in precedenza, il gruppo di adolescenti obesi non era omogeneo. Era composto da pazienti con "GFR elevato", "GFR normale" e "GFR ridotto". Pertanto, sono state eseguite analisi separate per ciascuno dei 3 sottogruppi sopra menzionati.

Nei partecipanti obesi allo studio "GFR elevato", abbiamo notato una moderata correlazione positiva tra "concentrazione di galectina-3 nelle urine" e "albuminuria" (r=0.528) e una correlazione negativa moderata tra "concentrazione di galectina concentrazione di galectina-3" e "concentrazione di adiponectina sierica".

Il gruppo di pazienti obesi con "GFR normale" aveva una forte correlazione tra "concentrazione di galectina-3 nelle urine" e "concentrazione di NGAL nelle urine" (r=0.706). Negli adolescenti obesi con "diminuzione del GFR", sono state riportate tre correlazioni moderate positive. Il primo tra "concentrazione di acido urico sierico" e "concentrazione di NGAL nelle urine" (r=0.474), il successivo tra "concentrazione di NGAL nelle urine" e "escrezione di megalina nelle urine" (r=0. 524), e l'ultimo tra "concentrazione di acido urico nel siero ed escrezione di megalina nelle urine" (r=0.511). Questi risultati sono presentati nella Tabella 2.

Le stime dei modelli di regressione lineare nei partecipanti allo studio sono mostrate nella Tabella 3. Fattori associati adanno renale correlato all’obesitànel periodo di iperfiltrazione includevano una diminuzione della concentrazione sierica di adiponectina, albuminuria e un aumento della concentrazione di Gal-3 nelle urine. Fattori associati adanno renale correlato all’obesitànegli adolescenti obesi con GFR normale sono stati riscontrati albuminuria, aumento della concentrazione di Gal-3 nelle urine, aumento della concentrazione di colesterolo nel siero e aumento della concentrazione di NGAL nelle urine. Finalmente,danno renale correlato all’obesitàseguito da una diminuzione del GFR è stato associato ad un aumento della concentrazione di NGAL nelle urine, ad un aumento della concentrazione di acido urico nel siero e ad un aumento dell'escrezione giornaliera di megalina nelle urine (Tabella 4).

Tabella 2 Correlazioni moderate e forti nei partecipanti allo studio

Sviluppo della malattia renale cronica nei partecipanti allo studio

Durante il periodo di follow-up, che variava da 6 a 30 mesi, 39 adolescenti obesi nel gruppo di studio hanno sviluppato insufficienza renale cronica (27,5%). Undici di loro sono stati inizialmente designati come individui con "GFR aumentato" (26,2%), 16 come partecipanti allo studio "GFR normale" (18,9%) e 12 sono stati inizialmente riconosciuti con GFR ridotto (80%).

I partecipanti obesi allo studio "GFR elevato", che hanno sviluppato insufficienza renale cronica durante il periodo di follow-up, non differivano nella morfologia del sangue periferico, creatinina sierica, cistatina C, acido urico, urea, Na, K, Ca, Mg, colesterolo totale, trigliceridi, HDL, glucosio a digiuno, TSH, fT3, fT4, enzimi epatici, proteine ​​totali, CRP, adiponectina nonché valori di albumina, Gal-3, megalina, NGAL o TIMP2 nelle urine delle 24 ore dei loro coetanei che non hanno sviluppato insufficienza renale cronica.

La maggior parte dei partecipanti obesi allo studio con "GFR normale" che hanno sviluppato insufficienza renale cronica, sono stati inizialmente riscontrati con concentrazioni aumentate di acido urico sierico (5,9±0,6 mg/dL; n=14; 87,5%), colesterolo (194±5,8 mg/dL; n=15; 93,8%) e trigliceridi (172±4,9 mg/dL; n=10; 62,5%) nonché concentrazione di NGAL nelle urine (9,8± 3,5 ng/ml; n=13; 81,2%), rispetto agli adolescenti obesi "GFR normale" che non hanno sviluppato insufficienza renale cronica.

Infine, è stato riscontrato che inizialmente gli adolescenti obesi con "diminuzione del GFR" che non avevano sviluppato insufficienza renale cronica nel periodo di osservazione (n{{0}}) avevano una concentrazione sierica di acido urico normale (4,1±0,3 mg/dL) rispetto ai i loro coetanei che hanno sviluppato la malattia renale cronica. Utilizzando il test esatto di Fisher, è stato determinato che gli adolescenti obesi con "GFR normale", che inizialmente avevano una concentrazione sierica elevata di acido urico (p<0.0001), serum triglycerides concentration (p=0.0006), serum cholesterol concentration (p<0.0001), and urine NGAL concentration (p=0.0003), developed CKD over a follow-up period of 6 to 30 months. "Decreased GFR" obese study participants who continue to have normal values of serum uric acid concentration are at lower risk of CKD development (p=0.0088).