Le risposte dicotomiche all'ipossia fetale cronica portano a un fenotipo di invecchiamento predeterminato Ⅱ
Nov 29, 2023
Ipossico
Reni fetali
Presenta un profilo di espressione proteica deregolamentato Per chiarire i percorsi molecolari alla base dell'IUGR guidata dall'ipossia, i reni appena isolati da feti E18.5 ipossici o normossici sono stati sottoposti a profilazione del proteoma dal basso verso l'alto utilizzando un sistema nano-LC (Dionex UltiMate 3{{9 }}00 RSLC) accoppiato a uno spettrometro di massa orbitrap ad alta risoluzione (Thermo QExactive). L'analisi delle componenti principali ha mostrato differenze sorprendenti tra i reni ipossici e normossici (Fig. 2A). In totale, sono state identificate 6307 proteine (FDR <0,01, Tabella supplementare S2) di cui 436 erano significativamente deregolamentate (FDR <0,05); 284 con abbondanza aumentata e 152 con abbondanza diminuita. Il clustering di annotazioni funzionali utilizzando l'ontologia genetica (18-20) ha rivelato un arricchimento di specifiche proteine mitocondriali, lisosomiali, leganti l'RNA e il DNA, nonché proteine coinvolte in specifici processi metabolici o risposte immunitarie innate (Fig. 2, B-D) . Abbiamo classificato queste proteine in base a (1) formazione di nefroni, (2) adattamento metabolico e (3) invecchiamento accelerato, come presentato e discusso nei paragrafi seguenti.
La replicazione repressa del DNA e la sintesi proteica contribuiscono alla formazione limitata di nuovi nefroni nell'ipossia cronica
Eventi avversi durante lo sviluppo, come l'ipossia fetale cronica, sono stati spesso associati a una riduzione del numero di nefroni (27, 29–32). Tuttavia, raramente è possibile dimostrare un meccanismo sottostante che spieghi in modo convincente questo risultato. Raggruppando tutte le 64 proteine deregolamentate appartenenti ai termini GO "legame del DNA" e "legame dell'RNA" (una mappa termica è mostrata nella Figura S2 supplementare) utilizzando il database STRING (22) ha rivelato più sottoreti tra cui la riparazione del DNA, la replicazione del DNA, splicing dell'mRNA e proteine ribosomiali (Fig. 3A). Un elenco più completo di processi o percorsi arricchiti è mostrato nella Figura 3B (FDR < 0.05). Di questi "ribosoma" e "replicazione del DNA" erano tra i termini più importanti delle proteine represse, mentre lo splicing dell'mRNA e la "degradazione dell'RNA" erano tra i termini più importanti delle proteine indotte. I processi di riparazione del DNA hanno mostrato un modello di espressione bipartito. Qui, le proteine coinvolte nell'escissione dei nucleotidi o nella riparazione del disadattamento sono state represse, ma sono state indotte quelle che mediano la "riparazione dell'escissione della base". Inoltre, il livello di abbondanza dell'inibitore del ciclo cellulare p27Kip1 era aumentato di due volte (Fig. 3C) e quello del marcatore di proliferazione Ki67 era ridotto di 3,4-volte (Fig. 3D), che insieme indicano un rallentamento della cellula processo di divisione. In particolare, il livello di espressione dell'mRNA di Mki67, il gene che codifica per Ki67, è stato significativamente represso nelle cellule tubulari prossimali primarie del topo coltivate in condizioni ipossiche (Fig. 3E). Questa repressione è stata mediata attraverso l'ipermetilazione della regione del promotore Mki67 nei reni fetali ipossici (Fig. 3F). Pertanto, nei reni ipossici del feto, la sintesi del DNA, la traduzione dell’mRNA e la maggior parte dei processi di riparazione del DNA sembrano essere bloccati, riducendo la capacità delle cellule di crescere e proliferare. Nel complesso qui, per la prima volta, i dati di profilazione del proteoma forniscono prove molecolari che potenzialmente spiegano la ridotta formazione di nefroni.
Il sistema immunitario innato e lo stress ossidativo vengono attivati in condizioni ipossiche croniche
Uno dei termini più arricchiti che compaiono nell'analisi delle annotazioni funzionali di tutte le 436 proteine e il più importante per le proteine indotte è stato "degranulazione dei neutrofili" (Fig. 2, B e C), che indica un'attivazione continua del sistema immunitario innato inreni fetali ipossici. Delle 34 proteine associate, 29 sono state indotte e cinque represse (rosa nella Figura 4A). Tra le proteine indotte c'erano molti enzimi glicolitici e correlati ai lisosomi, diversi membri della famiglia delle proteine S100A, il fattore inibitorio della migrazione dei macrofagi delle citochine infiammatorie (MIF), nonché le proteine dei granuli primarie e secondarie, la proteina dei granuli neutrofili (NGP), la mieloperossidasi (MPO) , catelicidina (CAMP), proteina di riconoscimento del peptidoglicano 1 (PGLYRP1) e lattoferrina (LTF). Per verificare la prevista invasione dei neutrofili nei reni fetali ipossici e per scoprire la loro posizione all'interno del tessuto, le sezioni renali sono state colorate per MPO. Le cellule MPO-positive formavano cluster nella zona nefrogenica della corteccia renale, in prossimità dei vasi sanguigni, adiacenti al tubulo prossimale, e occasionalmente potevano essere trovate nelle regioni midollari di campioni ipossici (Fig. 4D e Fig. S3, A supplementare -C). Al contrario, i reni fetali normossici non hanno mostrato infiltrazione o accumulo di neutrofili (Fig. 4C). È stato dimostrato che la caveolina-1 (CAV1) migliora la migrazione transcellulare delle cellule immunitarie (33). Di conseguenza, CAV1 è stato indotto nei reni fetali ipossici (Figura S3D supplementare), mostrando una colorazione migliorata dei vasi sanguigni renali compresi quelli che attraversano la regione corticale del rene fetale (Figura 4, E ed F). La degranulazione dei neutrofili produce un'esplosione locale di specie reattive dell'ossigeno che porta ad un aumento dello stress ossidativo e al danno tissutale, inclusa l'ossidazione del DNA. Un importante marcatore dell'ossidazione del DNA è l'8-idrossi-2′ -deossiguanosina (8-OHdG), che risulta potenziata nei tubuli prossimali e nella zona nefrogenica dei reni fetali ipossici (Fig. 4, G e H), in prossimità del clustering dei neutrofili. Questo aumento del DNA danneggiato da 8-OHdG si è verificato nonostante l'induzione simultanea di MGMT e OGG1 (Fig. 4, I e J), due enzimi responsabili della rimozione di 8-OHdG. Questi risultati dimostrano un’attivazione continua del sistema immunitario innato nel rene in via di sviluppo, che causa ancora più danni ai tessuti oltre allo stress ipossico. Insieme alla riparazione inefficace di queste lesioni tissutali, potrebbe avviarsi un circolo vizioso che compromette ulteriormente la nefrogenesi.
FICO. 2. Il profilo proteomico rivela molteplici cambiamenti associati all'ipossia. A, l'analisi delle componenti principali dei dati proteomici ha mostrato una chiara separazione tra reni fetali normossici e ipossici. B–D, raggruppamento di annotazioni funzionali di tutte le proteine significativamente deregolamentate (B), proteine indotte (C) e proteine ridotte (D) La frazione significativamente modificata di un percorso (asse x) viene rappresentata rispetto al suo significato di arricchimento (y- asse). La dimensione di ciascun punto codifica il numero totale di membri in quel percorso. Le proteine indotte hanno mostrato un arricchimento dei processi metabolici (glicolisi), delle proteine mitocondriali o lisosomiali e delle proteine coinvolte nella risposta del sistema immunitario (degranulazione dei neutrofili), mentre le proteine ridotte sono arricchite per le vie di legame del DNA e dell'RNA (un costituente strutturale del ribosoma).
(PGLYRP1) e la lattoferrina (LTF). Per verificare la prevista invasione dei neutrofili nei reni fetali ipossici e per scoprire la loro posizione all'interno del tessuto, le sezioni renali sono state colorate per MPO. Le cellule MPO-positive formavano cluster nella zona nefrogenica della corteccia renale, in prossimità dei vasi sanguigni, adiacenti al tubulo prossimale, e occasionalmente potevano essere trovate nelle regioni midollari di campioni ipossici (Fig. 4D e Fig. S3, A supplementare -C). Al contrario, i reni fetali normossici non hanno mostrato infiltrazione o accumulo di neutrofili (Fig. 4C). È stato dimostrato che la caveolina-1 (CAV1) migliora la migrazione transcellulare delle cellule immunitarie (33). Di conseguenza, CAV1 è stato indotto nei reni fetali ipossici (Figura S3D supplementare), mostrando una colorazione migliorata dei vasi sanguigni renali compresi quelli che attraversano la regione corticale del rene fetale (Figura 4, E ed F). La degranulazione dei neutrofili produce un'esplosione locale di specie reattive dell'ossigeno che porta ad un aumento dello stress ossidativo e al danno tissutale, inclusa l'ossidazione del DNA. Un importante marcatore dell'ossidazione del DNA è l'8-idrossi-2′ -deossiguanosina (8-OHdG), che risulta potenziata nei tubuli prossimali e nella zona nefrogenica dei reni fetali ipossici (Fig. 4, G e H), in prossimità del clustering dei neutrofili. Questo aumento del DNA danneggiato da 8-OHdG si è verificato nonostante l'induzione simultanea di MGMT e OGG1 (Fig. 4, I e J), due enzimi responsabili della rimozione di 8-OHdG. Questi risultati dimostrano un’attivazione continua del sistema immunitario innato nel rene in via di sviluppo, che causa ancora più danni ai tessuti oltre allo stress ipossico. Insieme alla riparazione inefficace di queste lesioni tissutali, potrebbe avviarsi un circolo vizioso che compromette ulteriormente la nefrogenesi.
Gli adattamenti metabolici all'ipossia provocano una pronunciata glicolisi nel rene fetale
L’ipossia cronica è una condizione grave alla quale le cellule devono adattarsi attraverso cambiamenti metabolici per sopravvivere. In primo luogo c’è il mantenimento della produzione cellulare di ATP che, in assenza di sufficiente ossigenazione, richiede il passaggio dalla fosforilazione ossidativa alla glicolisi. Di tutti i termini risultanti dall'annotazione funzionale, "processo glicolitico" è stato il più significativo (Fig. 2B). Tutti e dieci gli enzimi (rosso ①–⑩ in Fig. 5A) necessari per la conversione del glucosio in piruvato sono stati indotti inreni ipossici fetalirispetto ai controlli normossici (una mappa termica è mostrata in Fig. 5C). Inoltre, sono state migliorate anche le espressioni del trasportatore del glucosio 1 (SLC2A1, arancione in Fig. 4A) e della lattato deidrogenasi A (LDHA, rosso scuro in Fig. 5A), il che dovrebbe facilitare un maggiore assorbimento di glucosio nella cellula e una maggiore riduzione di piruvato in lattato, rispettivamente. L'utilizzo alternativo del piruvato nel ciclo dell'acido citrico sembrava essere ostacolato (1) da una maggiore espressione della piruvato deidrogenasi chinasi 1 (PDK1, rosso scuro in Fig. 5A), che inattiva il complesso della piruvato deidrogenasi nei mitocondri e quindi l'ossidazione del piruvato all'acetil-CoA; e (2) da livelli ridotti di piruvato carbossilasi (PC), che catalizza la conversione del piruvato in ossalacetato. D'altra parte, il fruttosio-1,6-bisfosfatasi 1 (FBP1, blu nella Fig. 5A) è stato ridotto, aumentando ulteriormente il potenziale flusso di glucosio verso il piruvato. Tutti questi cambiamenti enzimatici favoriscono la produzione di lattato e, in effetti, la concentrazione di lattato è aumentata nei reni fetali ipossici (Fig. 5B). Una maggiore produzione di lattato può portare ad un'acidificazione sfavorevole. Tuttavia, abbiamo trovato tra le proteine arricchite i trasportatori del monocarbossilato SLC16A3 e SLC5A8 (arancione nella Figura 5A), che sono noti per espellere il lattato nello spazio extracellulare per evitare effetti tossici dell'acidificazione citoplasmatica. Pertanto, il nostro modello dimostra la notevole capacità dei reni fetali di adattarsi all'ipossia cronica aumentando l'attività glicolitica,
FICO. 3. La formazione di nuovi nefroni nell'ipossia è associata alla replicazione del DNA repressa e alla sintesi proteica. A, la rete di interazione proteica di proteine che legano il DNA e l'RNA significativamente modificate derivata dal database STRING mostra diversi cluster di proteine: proteine ribosomiali (blu), proteine coinvolte nella replicazione del DNA (verde), riparazione del DNA (viola) e splicing dell'mRNA ( rosso). Il marcatore di proliferazione Ki67 (Mki67) è contrassegnato in nero, evidenziando la sua stretta relazione con la riparazione e la replicazione del DNA. B, una selezione di percorsi di proteine che legano il DNA e l'RNA significativamente modificate dai database KEGG e Reactome che hanno mostrato le alterazioni più importanti inreni ipossici, raffigurati in ordine decrescente di importanza. I processi di splicing e degradazione dell'RNA sono stati arricchiti (rosso), mentre la traduzione dell'RNA, la replicazione del DNA e i percorsi di riparazione sono stati repressi (blu). Solo processi con un FDR<0.05 are shown. C and D, the cell cycle inhibitor p27Kip1 was enhanced (unpaired two-tailed t test, Welch's correction, p = 0.0095), whereas the expression of the proliferation marker Ki67 was reduced (unpaired two-tailed t test, Welch's correction, p = 0.0078) in hypoxic fetal kidneys. E, hypoxia reduced the mRNA expression level of Mki67 in mouse primary proximal tubular cells (unpaired two-tailed t test, p < 0.0001). F, this reduction was mediated by hypermethylation of the Mki67 promoter in hypoxic fetal kidneys. Open circle unmethylated, black circle methylated (Fisher's exact test, p = 0.0016; Mann–Whitney U-test, p = 0.0431)
FICO. 4. Le proteine coinvolte nella risposta infiammatoria e nello stress ossidativo si arricchiscono nei nefroni di nuova formazione in condizioni di ipossia. A, rappresentazione di tutte le 34 proteine significativamente modificate per l'annotazione denominata degranulazione dei neutrofili (cerchi rosa) tra tutte le proteine significative (cerchi grigi più grandi) e non significative (cerchi grigi più piccoli) del nostro set di dati. 29 avevano un livello di abbondanza più elevato, mentre cinque erano ridotti. B, una mappa termica che mostra tutte le proteine rosa in (A) e la loro induzione o repressione nell'ipossia, rappresentate in ordine decrescente di abbondanza proteica. C – H, immagini immunoistochimiche rappresentative di E18.5 normossico oreni ipossicimostrando l'infiltrazione di neutrofili e lo stress ossidativo. C e D, l'immunoistochimica per il marcatore dei neutrofili mieloperossidasi (MPO) ha rivelato il raggruppamento di queste cellule in prossimità dei nefroni di nuova formazione (asterisco) e adiacenti ai vasi sanguigni renali (punta di freccia) dei reni fetali ipossici (D). Nei controlli normossici (C), le cellule MPO-positive erano raramente presenti. (Barre della scala 100 μm). E ed F, immunoistochimica che descrive una maggiore espressione di caveolina-1 (CAV1) nei vasi sanguigni renali di reni fetali ipossici (F) rispetto ai controlli (E) (barre della scala 200 μm). G e H, 8-idrossi-2′ -deossiguanosina (8-OHdG), un marcatore del danno ossidativo al DNA, erano notevolmente potenziati nei nefroni di nuova formazione (asterisco) nella corteccia renale e nei cellule dei tubuli prossimali (freccia) dei reni ipossici (H), mentre solo poche cellule sono state colorate nel tessuto normossico (G) (barre della scala 200 μm). I e J, questo aumento del danno al DNA si è verificato nonostante un aumento simultaneo della O-6-metilguanina-DNA metiltransferasi (MGMT; test t a due code non accoppiato, p=0.0002) (I) e {{ 15}}osso guanina glicosilasi (OGG1; test t a due code spaiato, p=0.0063) (J), due enzimi coinvolti nella riparazione del DNA ossidato.
che garantisce una produzione e una sopravvivenza sufficienti di ATP in queste condizioni avverse.
L'ipossia fetale promuove l'importazione compensatoria di proteine mitocondriali e l'assemblaggio della catena respiratoria
Oltre ad una glicolisi potenziata, abbiamo riscontrato molteplici alterazioni nei livelli di abbondanza delle proteine mitocondriali (una mappa termica è mostrata nella Figura S4 supplementare). La generazione di reti proteiche utilizzando STRING ha rivelato diversi cluster comprendenti proteine coinvolte nella traslocazione di proteine nei mitocondri, nella fosforilazione ossidativa e nelle proteine ribosomiali mitocondriali (Fig. 5, D ed E). Da notare che sono state indotte più proteine legate alla membrana mitocondriale interna, il sito in cui avviene la fosforilazione ossidativa (OXPHOS). OXPHOS comprende cinque complessi multiproteici disposti lungo la membrana mitocondriale interna. Tra le proteine indotte c'erano componenti dei complessi OXPHOS (NDUSF6), III (UQCR10), IV (COX6B1, COXC e COX7A2) e V (ATP5J, MTATP8), ma anche UQCC3 e SCO2, necessari per il corretto assemblaggio e funzionamento del complesso e IV, rispettivamente (Fig. 5D e Fig. S4 supplementare). Anche SDHC e SDHD, subunità del complesso ll, erano sovraregolati (rispettivamente 1,6- e 2,5-volte), ma non hanno raggiunto la significatività statistica. Inoltre, non solo i componenti della catena respiratoria risultavano arricchiti nel fetoreni ipossici, ma anche una moltitudine di proteine che ne mediano l'importazione nei mitocondri. Ciò includeva membri della translocasi della membrana esterna (TOM - TOMM22) e del complesso della traslocasi della membrana interna TIM22 (TIMM22, TIMM9 e TIMM10 e il complesso TIMM8-TIMM13- associato (Fig. 5D e Fig. supplementare Tra le 21 proteine mitocondriali con abbondanza ridotta c'erano quattro proteine ribosomiali mitocondriali, nonché proteine coinvolte nel catabolismo degli aminoacidi, nella biosintesi delle vitamine o nella beta-ossidazione degli acidi grassi (Fig. 5, D ed E, e Fig. S4).Questi risultati indicano una potenziale disfunzione mitocondriale e evidenti sforzi per rigenerare le proteine danneggiate (34), nonostante l'aumento della glicolisi e la sintesi proteica complessivamente ridotta.
La biogenesi lisosomiale e l'autofagia sono migliorate inReni fetali ipossiciIl lisosoma era il secondo organello che sembra arricchirsi in condizioni ipossiche. Tuttavia, rispetto ai mitocondri, dove il 36% delle proteine era ridotto, quasi tutte le proteine correlate ai lisosomi erano sovraregolate (Fig. 6, A e B). Tra questi c'erano nove idrolasi acide lisosomiali, che rappresentano quasi il 20% delle idrolasi acide lisosomiali annotate nella via KEGG per i lisosomi: quattro pro teasi (CTSA, CTSF, CTSZ, TPP1), tre glicosidasi (GAA, NAGA, NEU1), le idrolasi lisosomiali fosfatasi acida 2 (ACP2) e la lipasi acida lisosomiale A (LIPA). Inoltre, abbiamo trovato prove di un aumento della biogenesi dei lisosomi e dei relativi organelli. Tre degli otto componenti BLOC1 (biogenesi del complesso 1 degli organelli correlati al lisosoma) sono stati indotti in modo significativo (Fig. 6, C-E), così come il trasportatore di scambio H / Cl 5 (CLCN5), che è un attore cruciale nel acidificazione degli endosomi (Fig. 6F). Da notare che Snapin (subunità 7 BLOC1) svolge anche un ruolo nell'acidificazione lisosomiale e nella maturazione e funzione dell'autofagosoma. Altre proteine indotte note per svolgere un ruolo nell'autofagia erano Atg7 e Bnip3 (Fig. 6, G e H). Un altro requisito per il flusso autofagico è il raggruppamento perinucleare dei lisosomi, mediato dal complesso lisosomiale Ragulator (35, 36) e da due famiglie di proteine motrici opposte. Sorprendentemente, quattro dei cinque membri delle subunità dell'impalcatura del regolatore (LAMTOR1, 2, 3 e 5) sono stati significativamente indotti (Fig. 6, A e B); Anche LAMTOR4 è stato indotto 1,81-volte, ma non ha raggiunto la significatività statistica. Inoltre, le chinesine, che mediano il movimento verso l'esterno degli organelli, hanno mostrato una tendenza ad essere represse, mentre i membri della famiglia dineina che facilitano il movimento verso l'interno sono stati indotti, sebbene non statisticamente significativi (Fig. S5 supplementare). Collettivamente questi risultati forniscono una forte prova del fatto che la funzione di pulizia dei lisosomi è miglioratareni ipossici fetali, pienamente compatibile con la prevista necessità di rinnovare i mitocondri danneggiati.
Precoce
L'invecchiamento esemplifica gli aspetti bifronti dell'adattamento ipossico In opposizione ai meccanismi compensatori di riparazione e ringiovanimento, abbiamo trovato 15 delle proteine deregolamentate appartenenti al termine GO "Invecchiamento" (Fig. 7A), che rappresentano la terza categoria di adattamenti ipossici: invecchiamento accelerato . Sebbene la maggior parte di queste proteine svolgano un ruolo in uno dei processi sopra descritti, la degranulazione dei neutrofili e i lisosomi (MIF, MPO, PSEN1), i mitocondri (NDUFS6, FADS1, MTCO1, CYP27B1), la glicolisi (ALDOC) e la riparazione del DNA (OGG1) ; è stato descritto che alcuni hanno effetti diretti sulla durata della vita dei topi. In particolare, l'abbondanza proteica sia di klotho che di sirtuina 6 era diminuita nell'ipossia E18.5reni fetali(Fig. 7, B e C). La sirtuina 6 è un enzima espresso ubiquitariamente con attività proteica deacetilasi e mono-ADP ribosil transferasi coinvolta nella regolazione di diverse funzioni cellulari, tra cui l'infiammazione, la glicolisi e la riparazione del DNA. La sua eliminazione porta a una grave progeria nei topi con una durata di vita ridotta da 1 a 3 mesi (37, 38). Il rene è il sito principale della sintesi del klotho (cioè il tubulo contorto distale; il DCT contribuisce alla maggior parte delle proteine con una sintesi aggiuntiva nei tubuli contorti prossimali), dove agisce localmente come beta-glucuronidasi legata alla membrana. La ridotta abbondanza di klotho sembra essere un processo specifico poiché altre proteine del DCT, inclusa CALB1, non sono state alterate. Klotho viene anche secreto nella circolazione mediante scissione della parte extracellulare della forma legata alla membrana o mediante traduzione di una variante di giunzione alternativa. Il livello di klotho circolante (sKL) diminuisce con l'età (39, 40), il che ci ha spinto a valutare la sua concentrazione e quella della sirtuina 6 nel sangue del tronco di feti E18.5 ipossici o normossici. In effetti, le concentrazioni di sKL e sirtuina 6 erano significativamente ridotte nei feti ipossici E18.5 (Fig. 7, D ed E). Inoltre, cosa importante, anche i livelli sierici di klotho e sirtuina 6 erano ancora significativamente ridotti nei topi anziani (Fig. 7, F e G), indicando una riduzione permanente di queste due proteine per tutta la vita. Per Klotho, ciò sembra essere dovuto a livelli di espressione di mRNA significativamente ridotti nei reni della prole ipossica di 15-mese (Fig. 7H). Tuttavia, i livelli di espressione dell'mRNA renale della sirtuina 6 erano invariati tra topi normossici e ipossici anziani (Fig. 7I). Inoltre, è stato dimostrato che i cambiamenti nella metilazione del DNA sono uno dei meccanismi più importanti non solo per il rinnovamento e la differenziazione delle cellule progenitrici del nefrone (41), ma anche per l'espressione di klotho (42, 43). Tuttavia, in contrasto con l'ipermetilazione di Mki67 (Fig. 3F), il promotore di klotho era ipometilato durante l'ipossia cronica (Fig. S6 supplementare). Non è stato possibile determinare il modello di metilazione di Sirt6. Per quanto ne sappiamo, il nostro modello IUGR è il primo a delineare un meccanismo che porta a un fenotipo di invecchiamento precoce, attraverso la sinergia di danno infiammatorio, riparazione inefficace, metabolismo alterato e ridotta abbondanza di proteine antietà già presenti alla nascita.
La riduzione delle proteine antietà in risposta all'ipossia cronica è conservata tra topi e uomini In un'ultima serie di esperimenti, ci siamo chiesti se l'interazione tra ipossia cronica e livelli sierici ridotti di proteine antietà sia un fenomeno evolutivamente conservato. A tal fine, i campioni di siero di uno studio controllato (10) su nove volontari sani (otto maschi, una femmina) sono stati raccolti 2 settimane prima (a livello del mare, SL), in tre punti temporali durante un giorno ininterrotto di 28- soggiorno a 3454 m (alta quota, HA3, HA9, HA28) e 1, 7 e 14 giorni dopo il loro ritorno a SL (RSL1, RSL7, RSL14) sono stati analizzati per sKL e SIRT6 (Fig. 8). I campioni ottenuti presso SL sono serviti come controlli per ciascun partecipante. I livelli sierici di sKL e SIRT6 sono diminuiti ad alta quota ed entrambi hanno raggiunto rilevanza statistica a H28. Al ritorno al livello del mare, sKL è aumentato a livelli più alti rispetto a prima della permanenza in alta quota a RSL7 ed è tornato alla normalità a RSL14 (Fig. 8A). D'altra parte, SIRT6 ha continuato a diminuire al ritorno al livello del mare e ha iniziato a inclinarsi nuovamente solo a RSL14 (Fig. 8B), suggerendo una regolazione differenziale di queste due proteine anti-invecchiamento. In sintesi, questi risultati suggeriscono che livelli ridotti di klotho e sirtuina 6 nel siero possono generalmente richiedere l’esposizione a condizioni ipossiche croniche e possono quindi rappresentare un processo evolutivo altamente conservato.
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