Valutazione dell'attività antifatica delle saponine totali di Radix Notoginseng

Xu Yong-xin e Zhang Jian-jun

College di Educazione Fisica, Università di Zhengzhou, Zhengzhou, Repubblica Popolare Cinese

Per ulteriori informazioni: ali.ma@wecistanche.com

Background e obiettivi:

Sono state segnalate diverse attività biologiche delle saponine totali di Radix notoginseng (TSRN), una medicina tradizionale cinese. Il presente studio è stato condotto per indagare ilattività antifaticadi TSRN nei topi Kunming maschi.

Metodi:

I topi sono stati divisi in quattro gruppi. Il primo gruppo designato come gruppo di controllo è stato somministrato ogni giorno con acqua distillata mediante sonda gastrica. Il secondo, il terzo e il quarto gruppo designati come gruppi di trattamento con TSRN sono stati somministrati con TSRN rispettivamente di 20, 40 e 80 mg/kg di peso corporeo/giorno. Il trattamento è continuato per 28 giorni. È stato determinato il tempo di nuoto esaustivo, il lattato nel sangue e il contenuto di glicogeno tissutale dei topi dopo il nuoto.

Risultati:

TSRN ha esteso il tempo di nuoto esaustivo dei topi, ha ritardato efficacemente l'aumento del lattato nel sangue e ha aumentato il contenuto di glicogeno nei tessuti.

Interpretazione e conclusioni:

TSRN si è mostrato promettenteattività antifaticain un modello animale. Tuttavia, sono necessari ulteriori studi per chiarire il meccanismo dell'effetto del TSRN sufatica.

Parole chiave: Attività antifatica - lattato - nuoto - saponine totali di Radix notoginseng

Panax notoginseng (Burk.) FH Chen è coltivato in tutto il sud-ovest della Cina, in Birmania e in Nepal. La radice, la parte comunemente usata di questa pianta chiamata Radix notoginseng o Sanchi, ha una lunga storia come rimedio nella medicina tradizionale orientale1-3. In Cina, R. notoginseng è usato per favorire la circolazione sanguigna, rimuovere la stasi sanguigna, indurre la coagulazione del sangue, alleviare il gonfiore, ritardarefatica,e alleviare il dolore4,5. Si dice che R. notoginseng sia benefico per malattie coronariche, malattie vascolari cerebrali, cancro, diabete mellito, nonché per il miglioramento dell'apprendimento e della memoria in studi sperimentali6-8. Questi effetti terapeutici sono attribuiti ai suoi principi attivi, vale a dire saponine, flavonoidi e polisaccaridi9-11. Le saponine totali di R. notoginseng (TSRN) sono considerate i principali ingredienti attivi e sono una miscela di oltre 20 saponine di tipo Dammarane, tra cui ginsenoside Rg1, Rg2, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, Rd, Re, Rh, F2 e notoginsenoside R1, R2, R3, R4, R6, Fab, Fc, Fe, ecc.12. Sebbene siano note molte attività biologiche e funzioni farmacologiche del TSRN. È noto che ci sono stati studi limitati che ne hanno studiato gli effettistanchezza fisica. Pertanto, il presente studio è stato progettato per indagare ilattività antifaticadi saponine totali di R. notoginseng in un modello di ratto.

Materiale e metodi

Lo studio è stato condotto nel Laboratorio di Biochimica dell'Università di Zhengzhou (Zhengzhou, Cina). Materiali vegetali: il campione essiccato di R. notoginseng è stato ottenuto dalla Henan Chinese Herbal Medicine Company, (Zhengzhou, Cina) ed è stato autenticato dal Dipartimento di botanica, Università di Zhengzhou (Zhengzhou, Cina). Il campione è stato identificato per caratteristiche macromorfologiche e microscopiche e cromatografia su strato sottile (TLC). Sulla base della farmacopea cinese, è stata identificata come la radice di

Panax notoginseng (Burk.) FH Chen. Preparazione delle saponine totali di R. notoginseng (TSRN):

R. notoginseng essiccato è stato macinato in polvere e passato attraverso un setaccio a 40 maglie. TSRN è stato preparato con il metodo di Sun et al13. In breve, i campioni alimentati (1 kg) sono stati estratti con il 70 percento di etanolo a 100 gradi (3 × 4 l) e concentrati sotto vuoto (40 gradi) per far evaporare il solvente per dare un piccolo volume. Dopo l'estrazione con etere (3 × 0,5 l), la porzione dello strato di acqua è stata estratta con n-butanolo fino a quando lo strato di n-butanolo è diventato incolore. La soluzione di n-butanolo è stata concentrata ed essiccata sotto vuoto (60 gradi). L'estratto secco è stato sottoposto a cromatografia su colonna di resina D101, lavato con H2O ed eluito con etanolo per dare TSRN. Il TSRN conteneva il 64,3 ± 1,15 percento di notoginsenoside come determinato mediante cromatografia su strato sottile e metodo spettrofotometrico.

Animali:

I topi maschi Kunming, di peso compreso tra 18- 22 g, sono stati ottenuti dal Laboratory Animal Center, Medical College of Zhengzhou University (Zhengzhou, Cina.) e sono stati nutriti con una dieta commerciale e acqua ad libitum. La dieta commerciale consisteva in 12% di grassi, 60% di carboidrati e 28% di proteine. Gli animali sono stati alloggiati in un ciclo di 12-h luce/buio a una temperatura di 22 ± 1 grado e un'umidità del 50 ± 5 percento. I topi sono stati autorizzati ad acclimatarsi all'ambiente di laboratorio per almeno 1 settimana prima degli esperimenti. L'autorizzazione etica per l'esecuzione degli esperimenti sugli animali è stata ottenuta dal Comitato istituzionale per l'etica degli animali.

Raggruppamento di animali:

Novantasei topi sono stati divisi casualmente in quattro gruppi, ciascuno composto da 24 topi. Il primo gruppo designato come gruppo di controllo (Controllo) è stato somministrato ogni giorno con acqua distillata mediante sonda gastrica. Il secondo, il terzo e il quarto gruppo designati come gruppi di trattamento con TSRN sono stati somministrati con TSRN rispettivamente di 20, 40 e 80 mg/kg corpo/peso al giorno. La somministrazione di acqua distillata o TSRN è stata continuata per 28 giorni. Le dosi di TSRN e 28 giorni di tempo di trattamento utilizzate in questo studio sono state confermate adatte ed efficaci nei topi testati, secondo esperimenti preliminari.

Prova di nuoto esaustiva:

Dopo il trattamento finale con TSRN o acqua distillata, i topi sono stati lasciati riposare per 30 minuti. Quindi, otto topi sono stati prelevati da ciascun gruppo per un test completo di nuoto. Gli animali sono stati posti nella vasca da bagno (50 × 50 × 40 cm) profonda 30 cm con acqua mantenuta a 25 ± 2 gradi. La coda di ogni topo era caricata con un fascio di pezzi di piombo, che rappresentava il 10 percento del suo peso corporeo. L'esaurimento è stato determinato osservando la perdita di movimenti coordinati e il mancato ritorno in superficie entro 10 sec14. Il tempo di nuoto è stato immediatamente registrato.

Misurazione dei parametri biochimici relativi alla fatica:

Dopo il trattamento finale con TSRN o acqua distillata, i topi sono stati lasciati riposare per 30 minuti. Quindi, otto topi sono stati prelevati da ciascun gruppo per l'analisi del lattato nel sangue. I topi sono stati costretti a nuotare per 30 minuti dopo il carico di peso (2% del peso corporeo) e il sangue è stato raccolto dalla vena della coda prima e dopo il nuoto. Il contenuto di lattato nel sangue è stato misurato secondo le procedure raccomandate fornite dal kit diagnostico commerciale (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, Cina). I restanti otto topi sono stati prelevati da ciascun gruppo per l'analisi del glicogeno tissutale. I topi sono stati costretti a nuotare per 90 minuti senza carichi. Dopo aver riposato per un'ora, i topi sono stati uccisi per lussazione cervicale in anestesia. Sono stati raccolti i muscoli del fegato e del gastrocnemio15. Il contenuto di glicogeno tissutale è stato testato secondo le procedure raccomandate fornite dal kit diagnostico commerciale (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, Cina).

analisi statistica

: Tutti i test sono stati condotti in triplicato. I dati sperimentali sono stati espressi come media ± deviazione standard. L'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA), l'LSD e i test T3 di Dunnett sono stati eseguiti per determinare la differenza significativa tra i campioni entro l'intervallo di confidenza del 95%, utilizzando il software SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, STATI UNITI D'AMERICA).

Risultati

Effetti del TSRN sul tempo di nuoto completo dei topi:

Il tempo di nuoto esaustivo del terzo e quarto gruppo è aumentato significativamente (P<0.05) when="" compared="" with="" the="" control="" group.="" however,="" the="" exhaustive="" swimming="" time="" of="" the="" second="" group="" showed="" no="" significant="" changes="" compared="" with="" the="" control="" group="" (fig.="" 1).="" the="" swimming="" time="" of="" the="" second,="" third,="" and="" fourth="" groups="" increased="" by="" 21.15,="" 27.41,="" and="" 34.01="" percent,="" respectively.="">

Effetti del TSRN sul contenuto di lattato nel sangue dei topi dopo il nuoto:

Non c'era alcuna differenza significativa nel contenuto di lattato nel sangue tra i gruppi di trattamento TSRN e il gruppo di controllo prima del nuoto. Dopo il nuoto, il contenuto di lattato nel sangue di ciascun gruppo di trattamento con TSRN è diminuito significativamente (P<0.05) when="" compared="" to="" the="" control="" group="" (fig.="" 2).="" the="" results="" indicated="" that="" the="" blood="" lactate="" contents="" of="" the="" second,="" third="" and="" fourth="" groups="" decreased="" by="" 47.14,="" 57.59,="" and="" 61.96="" percent,="">

Effetti del TSRN sul contenuto di glicogeno tissutale dei topi dopo il nuoto:

Dopo il nuoto, il contenuto di glicogeno nel fegato e nei muscoli di ciascun gruppo di trattamento con TSRN è aumentato significativamente (P<0.05) when="" compared="" with="" that="" of="" the="" control="" group="" (fig.="" 3).="" the="" liver="" glycogen="" contents="" of="" tsrn="" treatment="" groups="" increased="" by="" 58.12,="" 115.84,="" and="" 153.58="" percent,="" respectively.="" the="" muscle="" glycogen="" contents="" of="" treatment="" groups="" increased="" by="" 58.54,="" 83.74,="" and="" 73.98="" percent,="">

Discussione

Il presente studio è stato progettato per studiare l'attività anti-fatica delle saponine totali di R. notoginseng (TSRN). Il nuoto forzato degli animali è stato impiegato come criterio della loro capacità di lavoro fisico. Molti studi hanno evidenziato che il nuoto presenta vantaggi rispetto ad altre forme di esercizio, incluso il tapis roulant16-19. Per standardizzare il carico di lavoro e ridurre il tempo di nuoto, al petto o alla coda dell'animale sono stati aggiunti pesi a specifiche percentuali di peso corporeo17,20. Il presente studio ha dimostrato che il TSRN ha esteso il tempo di nuoto esauriente dei topi, il che indicava che il TSRN aveva un'attività anti-fatica e poteva elevare la tolleranza all'esercizio. Per esplorare i meccanismi, sono stati determinati alcuni parametri biochimici nei topi dopo il nuoto. Il lattato nel sangue è il prodotto della glicolisi dei carboidrati in condizione anaerobica e la glicolisi è la principale fonte di energia per un esercizio intenso in breve tempo21,22. Pertanto, il lattato nel sangue è uno degli indicatori importanti per giudicare il grado di affaticamento atletico. Nel presente studio, il TSRN ha effettivamente ritardato l'aumento del lattato nel sangue e la comparsa di affaticamento. L'energia per l'esercizio è derivata inizialmente dalla scomposizione del glicogeno, dopo un intenso esercizio il glicogeno muscolare si esaurirà e, successivamente, l'energia proverrà dal glucosio circolante rilasciato dal fegato. Pertanto, il contenuto di glicogeno nel fegato e nei muscoli sono parametri sensibili legati all'affaticamento23-25. Nel presente studio, il TSRN ha aumentato significativamente il contenuto di glicogeno tissutale dei topi dopo il nuoto. In conclusione, i risultati hanno suggerito che il TSRN avesse un'attività anti-fatica, che prolungava il tempo di nuoto esauriente dei topi, ritardava efficacemente l'aumento del lattato nel sangue e aumentava il contenuto di glicogeno nei tessuti. Sono necessari ulteriori studi per chiarire l'esatto meccanismo dell'effetto del TSRN sulla fatica.

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