Glicosidi monoterpenici iridoidi e aciclici, cancanosidi L, M, N, O e P da Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulose(SCHRENK) R. WOTTIMO(Orobanchaceae) è una pianta parassita perenne che cresce sulle radici diSalvadoraOCalotropisspecie, distribuita in Nord Africa, Arabia e paesi asiatici.1) Gli steli di questa pianta (Kanka-nikujuyou in giapponese) sono stati tradizionalmente utilizzati per latrattamento dell'impotenza, della sterilità, della lombalgia e della debolezza corporeanonché un agente promotore della circolazione sanguigna.1,2) Durante i nostri studi sui costituenti bioattivi da steli diC. tubulosa, 3-6) in precedenza abbiamo segnalato ventiquattro aminoglicosidi feniletanoidi inclusi i cancanosidi H1, H2, I, J1, J2, K1, e K2e due oligozuccheri acilati da steli freschi diC. tubulosa. 5,6) Inoltre, presideglicosidi feniletanoidi, echinacoside, acteoside e isoacteoside, si è scoperto che inibiscono l'aumento dei livelli sierici di aspartato aminotransferasi (AST) e di alanina aminotransferasi (sale) nel fegato danneggiato dei topi indotto daD-galattosamina (D-GalN)/ lipopolisaccaride a dosi di 25-100 mg/kgper sistema operativo(p.o.). Sono stati inoltre chiariti i requisiti strutturali dei glicosidi feniletanoidi per l'attività epatoprotettiva.5) In questo studio continuo sui costituenti degli steli freschi diC. tubulosa, abbiamo ulteriormente isolato undici glicosidi iridoidi inclusi i cancanosidi L (1), M (2), e n (3), sette glicosidi monoterpenici aciclici inclusi i cancanosidi O (4) e P (5), tre fenilpropanoidi e quattro lignani. Questo articolo tratta dell'isolamento e della delucidazione della struttura di cinque nuovi composti (1-5).

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI PER ALLEVIARE LE DISFUNZIONI SESSUALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Steli freschi di C. tubulosa (coltivati ​​a Urumqi, provincia dello Xinjiang, Cina) sono stati estratti con metanolo sotto riflusso per produrre un estratto metanolico (8,36% dagli steli freschi). Dall'estratto metanolico, le frazioni eluite con H2O e MeOH (5,63% e 2,73%, rispettivamente) sono state ottenute mediante cromatografia su colonna Diaion HP-20 (H2O→MeOH) come descritto in precedenza.5) La frazione eluita con MeOH è stata sottoposto a cromatografie su colonna SiO2 e ODS e infine HPLC per fornire cancanosidi L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) e P (5, 0 .0002%), 6-desossicatalpol3,7) (6, 0.197%), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), gluroside3,7) (8, 0.0443%), cancanoiside A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), acido mussaenosidico3,7) ( 10, 0,0056%), 8- acido epiloganico3,8) (11, 0,0023%), 8-acido epideossiloganico3,7) (12, 0,0004%), acido geniposidico3,7) (13, 0,0040% ), cancanoside E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glucopiranosilossi-2,6-dimetil-2,6-acido ottadienoico3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetil-8-idrossiottadiene-1-il-ObD-glucopiranoside10) (16, 0,0082%), 8-idrossigeraniolo 8-O-bD-glucopiranoside11) (17, 0,0044%), betulalbuside A12) (18, 0,0004%), coniferina13) (19, 0,0002%), siringina13) ( 20, 0,0015%), aldeide sinapica 4-ObD-glucopiranoside14) (21, 0,0001%), ( )-pinoresinolo ObD-glucopiranoside4,8,15) (22, 0,0010%), eucommin A16) (23, 0,0002 %), isoeucommina A17) (24, 0,0010%) e ( )-siringaresinolo ObD-glucopiranoside4,8,18) (25, 0,0044%).

Strutture dei cancanosidi L (1), M (2) e N (3)

Il Kankanoside L (1) è stato ottenuto come polvere bianca con rotazione ottica negativa ([a]D 26 - 45.7 in MeOH). Il suo spettro IR mostrava una forte banda di assorbimento a 3433 e 1{{20}}80 cm- 1 indicativa di una porzione glicosidica. Il bombardamento atomico veloce (FAB)-MS di 1 esecuzione nelle modalità con ioni positivi e negativi ha mostrato picchi di ioni quasimolecolari a m/z 371 [M Na] e 347 [M- H]-, rispettivamente, e la formula molecolare era determinato come C15H24O9 mediante misurazione FABMS ad alta risoluzione. Idrolisi acida di 1 con D-glucosio liberato da acido cloridrico (HCl) 1,0 M, che è stato identificato mediante analisi HPLC utilizzando un rilevatore di rotazione ottica.3-6) Gli spettri 1 H- e 13C-NMR di 1 (CD3OD, Tabelle 1, 2), assegnati da vari esperimenti NMR,19) hanno mostrato segnali assegnabili a quattro metilene [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br gg, J= ca. 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br gg, J= ca. 8 , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2.4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

circa. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H ciascuno, entrambi d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], due methine [d 2,15 (1H, dd, J=7.2, 8,9 Hz, 9-H) e 2,23 (1H, m, 5-H)] e un gruppo acetalico [d 4,81 (1H, d, J{{28 }},9 Hz, 1-H)] insieme a una porzione b-glucopiranosile [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Come mostrato in Fig. 1, l'esperimento di spettroscopia di correlazione 1 H–1 H (1 H–1 H COSY) su 1 ha indicato la presenza di strutture parziali scritte in grassetto. Nell'esperimento di correlazione eteronucleare di legami multipli (HMBC) su 1, sono state osservate correlazioni a lungo raggio tra i seguenti protoni e carboni (1-H e 3-C, 8-C; {{ 49}}H e 1-C; 7-H e 8-C, 10-C; }}H2 e 7-C, 8-C; 1 -H e 1-C) come mostrato in Fig. 1. Successivamente, la stereostruttura relativa di 1 è stata caratterizzata da sensibilità alla fase Esperimento di spettroscopia di potenziamento nucleare Overhauser (NOESY sensibile alla fase), che ha mostrato correlazioni NOE tra le seguenti coppie di protoni (1-H e 3aH; 3a-H e 4a-H; 3b-H e 4b-H; 4b-H e 5-H, 9-H; e 10-H2), come mostrato in Fig. 1. Gli spettri 1 H- e 13C-NMR di 1 erano sovrapponibili a quelli del principale costituente iridoide 6-desossicatalpolo (6), ad eccezione dei segnali dovuti alla porzione satura di d-lattolo. Infine, l'idrogenazione di 6 ha dato 1, quindi è stato chiarito che la stereostruttura del cancanoside L è 3,4- diidro-6-desossicatalpol (1).

CISTANCHE NATURALI TUBULOSA PER ALLEVIARE I DISTURBI DELL'AROUSAL DELLA POSTA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Il Kankanoside M (2) è stato ottenuto come polvere bianca con rotazione ottica negativa ([a]D 26 - 18.7 in MeOH). Lo spettro IR di 2 mostrava bande di assorbimento a 3433, 1736, 1655 e 1076 cm- 1 attribuibili alle porzioni idrossile, d-lattone, olefina ed etere. Lo spettro FAB-MS di ioni positivi di 2 ha mostrato un picco di ioni quasimolecolari a m/z 353 [M Na] e la formula molecolare è stata determinata come C15H22O8 mediante misurazione FAB-MS di ioni positivi ad alta risoluzione. Idrolisi acida di 2 con D-glucosio liberato da HCl 1,0 M. Gli spettri 1 H- e 13CNMR di 2 (CD3OD, Tabelle 1, 2) hanno mostrato segnali assegnabili a quattro metilene [d 1,66, 2,11 (1H ciascuno, entrambi m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H ciascuno, entrambi m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2.8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H ciascuno, entrambi d, J{{61 }}.1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], due methine [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], un'olefina [d 5,94 (1H, m, 7-H)] e un gruppo lattone saturo (d C 174.9) insieme a una porzione bD-glucopiranosile [d 4.32 (1H, d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Come mostrato in Fig. 1, l'esperimento 1 H–1 H COZY su 2 ha indicato la presenza di strutture parziali scritte in grassetto e, nell'esperimento HMBC, sono state osservate correlazioni a lungo raggio tra le seguenti coppie di protoni e carbonio ({{ 103}}H e 1-C; 7-H e 9-C; 9-H e 1-C, 8-C; }}H2 e 7-C, 8-C, 9-C; La relativa stereostruttura di 2 è stata caratterizzata da un esperimento NOESY sensibile alla fase, che ha mostrato correlazioni NOE tra le seguenti coppie di protoni (3a-H e 4a-H; 3b-H e 4b-H; 4b-H e 5- H; 5-H e 6b-H, 9-H) come mostrato in Fig. 1. Pertanto, la stereostruttura di 2 è stata chiarita come mostrato.

Kankanoside N (3) è stato isolato come polvere bianca con rotazione ottica negativa ([a]D 25 - 24.6 in MeOH). Nel FAB-MS a ioni positivi di 3, è stato osservato un picco di ioni quasimolecolari a m/z 371 [M Na] . La formula molecolare C16H28O8 è stata determinata mediante misurazione FAB-MS ad alta risoluzione. Idrolisi acida di 3 con D-glucosio liberato da HCl 1.0 M. I dati 1 H- e 13C-NMR (CD3OD, Tabelle 1, 2) hanno mostrato segnali assegnabili a un metile [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], quattro metilene {d 1,37, 1,87 (1H ciascuno, entrambi m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H ciascuno, entrambi m, 6-H2), [3,65 ( 1H, gg, J= 9.1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, gg, J= 5.9, 9,8 Hz), 11-H2] e [3,70 (1H, gg, J= 3.3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, quattro metini [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] e un gruppo emiacetalico [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] insieme a una porzione bD-glucopiranosile [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101 }}H)]. La struttura iridoide di 3 è stata chiarita dagli esperimenti 1 H – 1 H COZY e HMBC e la relativa stereostruttura è stata caratterizzata da un esperimento NOESY sensibile alla fase come mostrato in Fig. 1. Di conseguenza, la sterostruttura di 3 è stata chiarita come mostrato.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI PER RISOLVERE PROBLEMI SESSUALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Strutture dei cancanosidi O (4) e P (5)

Anche i cancanosidi O (4) e P (5), C16H26O8, sono stati ottenuti come polveri bianche con rotazioni ottiche negative (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 entrambi in MeOH). Gli spettri IR di 4 e 5 mostravano bande di assorbimento a 3433, 1696, 1647 e 1076 cm- 1 per 4, e 3434, 1701, 1647 e 1{ {95}}76 cm- 1 per 5, ascrivibili a funzioni glicosidiche, carbossiliche e olefiniche. I loro spettri UV hanno mostrato un massimo di assorbimento comune a 217 nm, indicando la presenza di una porzione di acido carbossilico a,b-insaturo in entrambi. L'idrolisi acida di 4 e 5 ha liberato D-glucosio, mentre mediante idrolisi enzimatica con glucosidasi, 4 e 5 hanno dato (2E,6E)-8-idrossi-2,6-dimetil{{37} },6-acido ottadienoico20) (4a) e (2E,6E)-8-idrossi-3,7- dimetil-2,{{ acido 47}}ottadienoico21) (5a), rispettivamente. 1 I dati H- e 13C-NMR di 4 (CD3OD, Tabelle 2, 3) hanno mostrato segnali assegnabili a due metili [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}}.0 Hz, 9-H3)], tre metilene {d 2,19 (2H, br t, J= ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4.24 (1H, gg, J= 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, gg, J= 6.2, 12.0 Hz), { {96}}H2]} e due olefine trisostituite [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Hz, 3-H)] insieme a una parte b-Dglucopiranosile [d 4,34 (d, J= 7.8 Hz, 1 -H)]. Confrontando i segnali del carbonio nello spettro 13C-NMR di 4

con quelli di 4a, è stato osservato uno spostamento della glicosilazione nella posizione 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). La posizione del legame del glucoside è stata confermata anche dagli esperimenti dell'HMBC, come mostrato in Fig. 2. Di conseguenza, è stato chiarito che la stereostruttura di 4 è (2E,6E)-8-bD-glucopiranosilossi-2,{{ acido 16}}dimetil-2,6-ottadienoico. D'altra parte, i dati 1 H- e 13C-NMR di 5 (CD3OD, Tabelle 2, 3) indicavano la presenza di un (2E,6E)-8-idrossi{{30}} porzione dell'acido ,7-dimetil-2,6-ottadienoico [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H ciascuno, entrambi br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] insieme a una parte bD-glucopiranosile [d 4,23 (d, J= 7.7 Hz, 1 -H)]. La connettività della porzione bD-glucopiranosile in 5 è stata chiarita sulla base di esperimenti HMBC come mostrato in Fig. 2. Inoltre, è stato osservato un tipico spostamento della glicosilazione per i segnali in posizione 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68.8). sulla base delle prove sopra menzionate, la stereostruttura di 5 è stata determinata come (2E,6E)-8-bD-glucopiranosilossi-3,7-dimetil-2,{{103 }}acido ottadienoico.

Effetti dei costituenti sulla citotossicità indotta dal fattore di necrosi tumorale-a (TNF-a) nelle cellule L929

È noto che il TNF-a media una varietà di danni d'organo attraverso l'induzione dell'apoptosi cellulare. Nel caso del fegato, gli effetti biologici del TNF-a sono stati implicati nel danno epatico indotto da tossine epatiche, ischemia/riperfusione, epatite virale e alcol.22-24) Pertanto, il TNF-a è considerato un obiettivo importante per scoprire agenti antinfiammatori ed epatoprotettivi. Sulla base del concetto sopra menzionato, abbiamo studiato i costituenti protettivi di prodotti naturali sulla morte cellulare indotta dal TNF-a nelle cellule L929, una linea cellulare sensibile al TNF-a.25) In precedenza, abbiamo riportato

che diversi costituenti di Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) e Sapindus rarak, 36-38) hanno mostrato effetti inibitori della citotossicità indotta dal TNF-a nelle cellule L929. Poiché i costituenti feniletanoidi di C. tubulosa (esechinacoside, acteoside e isoacteoside, ecc.) 5) ha inibito anche questa citotossicità, abbiamo esaminato ulteriormente i costituenti iridoidi, fenilpropanoidi e lignani come mostrato nella Tabella 4. Di conseguenza, il cancanoside A (9, inibizione: 16,3± 2,0% a 1 00 mM), acido mussaenosidico (10, 44,7± 8,7%), 8-acido epigamico (11, 10,7± 0,4%), 8-idrossi geraniolo 8-ObD- è stato riscontrato che il glucopiranoside (17, 21,3± 2,4%) e il ()-pinoresinolo ObD-glucopiranoside (22, 22,3± 1,6%) mostrano un'attività significativa. Sebbene le loro attività fossero più deboli di quelle dell'echinacoside (IC50= 31.1 mM), acteoside (17,8 mM) e isoaceteoside (22,7 mM), i principali costituenti feniletanoidi.5)

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